原发性高血压患者血清miR-192 表达水平与左室肥厚的关系

杜高波，贾小凤，余 强，李晓鹃

（黄石市中心医院，湖北理工学院附属医院心血管内科，湖北 黄石 435000）

随着我国居民饮食结构的改变，原发性高血压患病率逐年升高，且发病年龄日趋年轻化[1]，已成为威胁我国人群健康的重大公共卫生问题。研究表明[2]，长期持续存在的高血压会导致心脏及血管结构发生改变，并可引发一系列的并发症。其中，由心室重构引起的左心室肥厚是导致患者心律失常、心肌梗死、心力衰竭甚至死亡的主要原因[3]，因此，如何逆转或减缓左心室肥厚在高血压治疗中尤为重要。有研究指出[4]，心肌发生纤维化与心室重构关系密切。微小RNA-192（microRNA-192，miR-192）作为miRNA 重要类型，参与了肝脏[5]、皮肤疤痕[6]等多种器官纤维化过程，是否与高血压心室重构所致左心室肥厚有关，鲜有报道。本研究分析了高血压患者血清中miR-192 表达与左心室肥厚相关性，探讨其在高血压左心室肥厚中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018 年6 月至2019 年12 月在黄石市中心医院治疗的原发性高血压患者，纳入标准：（1）年龄在18 岁以上，符合原发性高血压诊断标准[7]；（2）临床资料完整；（3）初诊或既往虽诊断但未接受规范降压药物治疗。排除标准：（1）继发性高血压，或服用降压药物治疗者；（2）合并糖尿病、高血脂者；（3）合并心肌病、心力衰竭、心房颤动、卒中者；（4）肝肾等重要脏器严重功能障碍患者；（5）重度感染、恶性肿瘤、免疫疾患者。共纳入187 例，其中，男性101 例，女性86 例，平均年龄（59.34±9.84）岁。本研究获得医院伦理委员会批准，患者行知情同意。

1.2 方法

1.2.1 临床资料收集收集患者一般情况、收缩压、舒张压、高血压病程、烟酒嗜好及高血压家族史，计算体重指数（BMI），以及空腹血糖（FBG）、血脂[总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白-C（LDL-C）和高密度脂蛋白-C（HDL-C）]、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）和超敏-C 反应蛋白（hs-CRP）等生化指标。

1.2.2 超声心动图检查患者行超声心动图检查，检查由超声科具有高级职称的医师利用德国西门子公司生产的SC2000 超声诊断系统完成。分别获取左心室后壁厚度（LVPWd）、室间隔厚度（IVST）、舒张末期和收缩末期左心室内径（LVEDD、LVESD）、舒张末期和收缩末期左心室容积（LVEDV、LVESV）、左心房前后径（LAD）和左心室射血分数（LVEF），均测量3 个心动周期，取均值。计算左心室质量（LVM）=0.8×1.04×[（IVST+LVEDD+LVPWT）3—LVEDD3]+0.6，左心室质量指数（LVMI）=LVM/身高2.7，左心室肥厚判定标准[8，9]：男性LVMI >49.2 g/m2.7，女性LVMI >46.7 g/m2.7。根据是否合并左心室肥厚，将患者分为肥厚组和对照组。

1.2.3 实时荧光定量PCR 术检测血清中miR-192 表达患者抽取晨起空腹肘静脉血5 mL，室温下静置60 min，离心（3 500 r/min，半径13.5 cm）15 min，留取上层血清，保存于-80℃冰箱保存。取冻存血清，室温融化，根据总RNA 提取试剂盒（上海斯信公司，货号：239435）提供的操作步骤提取总RNA，利用紫外分光光度仪（购自日本岛津公司）检测其浓度。按照反转录试剂盒（日本TaKaRa 公司，货号：RR037A）操作步骤将总RNA 转录为cDNA。按照PCR 扩增试剂盒（日本TaKaRa 公司，货号：RR390A）操作步骤，利用StepOnePlus 型实时荧光定量PCR 仪（美国ABI 公司）对引物体系进行扩增。引物序列：miR-192：上 游：5 ′-CTGACCTATGAATTGACAGCCGT-3′，下游：5′-ATCCAGTGCAGGGTCCGA-3′；U6：上游：5′-GAGAAGATTAGCATGGCCCCT-3′，下游：5′-ATATGGAACGCTTCACGAATTTG C-3′。反应条件：94 ℃ 3 min，94 ℃ 30 s，54 ℃30 s，70 ℃ 30 s，38 个循环，每个样本设复孔6 个。用2-△△Ct法计算血清中miR-192 表达量。

1.2.4 酶联免疫吸附试验（ELISA 法）检测血清中心肌纤维化指标取冻存血清，室温融化，利用ELISA 法检测血清中转化生长因子β1（TGF-β1）、Ⅰ型前胶原羧基末端肽（PⅠCP）和Ⅲ型前胶原氨基端肽（PⅢNP）水平，试剂盒购自上海通蔚公司（货号分别为：3683、01869、3215），所有操作均按试剂盒说明完成。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 2 组患者临床基础资料和超声心动图指标比较

经超声心动图检查，187 例原发性高血压患者中，76 例出现左心室肥厚（肥厚组），111 例未发现左心室肥厚（对照组），与对照组比较，肥厚组患者LVPWT、IVST、LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV、LAD、LVMI 和hs-CRP 均升高（P<0.05），见表1。

表1 2 组患者一般资料比较（）Tab.1 Comparison on the general data of patients between the two groups（）

表1 2 组患者一般资料比较（）Tab.1 Comparison on the general data of patients between the two groups（）

*P < 0.05。

2.2 2 组患者血清中miR-192、TGF-β1、PⅢNP和PⅠCP 水平比较

与对照组比较，肥厚组患者血清中miR-192、TGF-β1、PⅢNP 和PⅠCP 水平升高（P<0.05），见表2。

表2 2 组患者血清中miR-192、TGF-β1、PIIINP 和PICP 水平比较[（），µg/L]Tab.2 Comparison on the serum levels of miR-192，TGF-β1，PIIINP and PICP in patients between the two groups[（），µg/L]

表2 2 组患者血清中miR-192、TGF-β1、PIIINP 和PICP 水平比较[（），µg/L]Tab.2 Comparison on the serum levels of miR-192，TGF-β1，PIIINP and PICP in patients between the two groups[（），µg/L]

*P < 0.05。

2.3 原发性高血压患者血清中miR-192 水平与超声心动图和心肌纤维化指标相关性

Pearson 相关分析结果显示，血清中miR-192 与LVPWT、IVST、LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV、LAD、LVMI、TGF-β1、PⅠCP 和PⅢNP呈正相关（P<0.05），见表3。

表3 原发性高血压患者血清中miR-192 水平与超声心动图和心肌纤维化指标相关性Tab.3 Correlation of the serum level of miR-192 with the indexes of echocardiography and myocardial fibrosis in patients with essential hypertension

2.4 原发性高血压患者血清中miR-192 水平影响因素分析

在排除一般资料的影响后，以原发性高血压患者血清miR-192 水平作为因变量，把超声心动图指标和心肌纤维化指标作为自变量，开展多元线性回归分析，LVPWT、IVST、LVEDD、LVESV、TGF-β1、PⅠCP 和PⅢNP 是影响血清miR-192水平的相关因素（P<0.05），见表4。

表4 原发性高血压患者血清miR-192 水平的多元影响因素分析Tab.4 Analysis on the multivariate influencing factors of the serum level of miR-192 in patients with essential hypertension

3 讨论

左心室肥厚作为心脏对血压升高的一种适应性变化，在高血压患者中发生率较高，本研究中，187 例原发性高血压患者中40.64%并发有左心室肥厚，与以往研究报道相当[10]。早期的左心室肥厚有利于维持正常的泵血功能，但随着时间延长，会导致患者心肌顺应性会降低、耗氧量增多，最终引发心衰甚至死亡，已成为心血管事件发生及死亡的重要风险因素[11]。因此，积极探讨高血压左心室肥厚发病机制或风险因素对高血压病的综合防治具有重要意义。miRNA 作为机体内广泛存在的参与多种生理、病理过程的高度保守的短链RNA，与心血管疾病发生、发展密切相关，参与调解心肌细胞生长，并在心肌重构、纤维化中发挥重要作用[12]。本研究结果显示，miR-192 在肥厚组患者血清中表达水平较对照组明显升高，说明miR-192 表达与高血压患者发生左心室肥厚相关，出现了高表达，同时，相关分析发现，血清miR-192 与超声心动图指标LVPWT、IVST、LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV、LAD 和LVMI 呈正相关，进一步说明miR-192 与高血压左心室肥厚有关，但具体作用机制尚待进一步研究明确，本研究中并未发现血清miR-192 与LVEF 相关，分析原因可能与心脏功能代偿有关，从而导致左心室肥厚以保证LVEF 能够满足身体供血需要。

有研究指出[13]，高血压左心室肥厚以心肌细胞肥大及细胞外基质重构为主要表现。左心室肥厚早期以心肌细胞肥大为主要表现，从而代偿性降低室壁张力以维持正常的射血功能，但随着病变进展，大量凋亡的心肌细胞发生凋亡并由细胞外基质替代，从而引起射血能力减低、心脏功能出现恶化。胶原是构成细胞外基质的重要组分，其合成、降解及构造异常在促使心肌纤维化导致心肌重构中发挥重要作用，具体表现为血清PⅠCP 和PⅢNP 水平升高[14]。TGF-β1 介导的信号通路则是心肌纤维化中主要通路[15]。本研究结果显示，肥厚组患者血清中TGF-β1、PⅢNP 和PⅠCP 水平较对照组升高，且血清miR-192 与TGF-β1、PⅠCP 和PⅢNP 呈正相关，说明原发性高血压患者合并左心室肥厚时出现血清中miR-192 表达水平出现升高，可能与心肌细胞外基质重构及心肌纤维化有关。本研究显示，LVPWT、IVST、LVEDD、LVESV、TGF-β1、PⅠCP 和PⅢNP 是影响血清miR-192 水平的相关因素，从另一方面亦说明miR-192 可能是反映高血压左心室肥厚严重程度及心肌纤维化的指标，可能是评估心肌肥厚及心肌纤维化的潜在标志物。

综上所述，miR-192 在出现左心室肥厚的高血压患者血清中表达水平升高，且与左心室肥厚指标及心肌纤维化指标相关，有望成为评估高血压左心室肥厚及心肌纤维化的新的标志物，但鉴于高血压左心室肥厚病理过程复杂，涉及众多分子机制，miR-192 具体作用过程尚待进一步研究明确。