规模鸡场重组禽流感病毒三价灭活疫苗免疫效果评估

何 丹，杨铭芬，杨锦兰，张 兵

（南宁市动物疫病预防控制中心，南宁 530001）

禽流感（Avian influenza，AI）是由禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）引起的一种急性、高度接触性人畜共患传染病［1］。根据A 型流感病毒的血凝素（HA）与神经氨酸酶（NA）不同，已发现16 个HA 亚 型 和9 个NA 亚 型［2］。高 致 病 性 禽 流感 病毒（Highly pathogenic avian influenza virus，HPAIV）给养禽业带来不可估量的经济损失，严重威胁到人类身体健康。针对AIV 抗原变异性强、抗原性逐渐变异的特点，科研人员不断研制出一系列疫苗在家禽中大规模使用，并取得了理想的防控效果［3，4］。2017年9月起，原农业部要求全国采用重组禽流感（H5+H7）疫苗对家禽进行强制免疫，各地对重组疫苗进行了一系列评估［5-7］。免疫抗体监测是了解疫苗免疫效果的有效方法，及时掌握疫苗使用效果非常必要。本试验对南宁市辖区内4 个规模鸡场的样品进行HPAIV 抗体检测，客观评价疫苗临床效果，以期制订更合理的免疫程序，为禽流感综合防控提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验动物

分别从4 个规模鸡场选择14 日龄左右、同一批次的鸡。

1.1.1 种鸡 种鸡A场5000羽（疫苗批号2020016），种鸡B 场5000 羽（疫苗批号2020017）；对照组各100 羽。

1）免疫。试验组首次免疫肌肉注射疫苗0.3 mL∕羽；21 d 后第二次免疫0.5 mL∕羽。对照组以相同剂量和方式注射生理盐水。

2）采样。首免前采样，首免后第1、2、3 周及二免后第2、4、6 周，首免后5、6 个月采样。每次随机采集50 羽免疫鸡和10 羽对照鸡血清，及对应的喉头、泄殖腔棉拭子。

1.1.2 肉鸡 肉鸡C 场（95 d 出栏）900 羽，肉鸡D 场（70 d 出栏）900 羽，疫苗批号均为2020016；对照组各100 羽。

1）免疫。C 场试验组接种方法同种鸡；D 场试验组肌肉注射疫苗0.5 mL∕羽；对照组分别以相同剂量和方式注射生理盐水。

2）采样。C 场首免前采样，首免后第1、2、3 周及二免后第2、4、6 周采样，直至出栏。D 场免疫前采样，免疫后每周采样，直至出栏。每次随机采集50羽免疫鸡和10 羽对照鸡血清，及对应的喉头、泄殖腔棉拭子。

1.2 疫苗与试剂

1.2.1 疫苗 重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗（H5N1 Re-11 株+Re-12 株、H7N9 H7Re-3 株），批号2020016、2020017，广东永顺生物制药股份有限公司生产。

1.2.2 试剂 禽流感病毒H5 亚型（Re-11 株）血凝抑制抗原，批号20201218，哈尔滨国生生物科技股份有限公司生产；禽流感病毒H5 亚型（Re-12 株）血凝抑制抗原，批号20210105；禽流感病毒H7N9 亚型（Re-3 株）血凝抑制抗原，批号20210525。禽流感病毒H5 和H7 亚型双重实时荧光RT-PCR 检测试剂盒，批号AIV-H5＆H720210531P，北京世纪元亨动物防疫技术有限公司生产。

1.3 抗体检测

采集的血清分别检测H7N9 H7-Re3 株和H5N1 Re-11 株、H5N1 Re-12 株抗体，按照国家标准《GB∕T 18936—2020 高致病性禽流感诊断技术》中HA、HI试验方法进行。HI 抗体滴度≥4log2 为免疫抗体合格，免疫合格个体数量占群体总数的70%（含）以上为免疫合格群体。

1.4 核酸检测

喉头、泄殖腔棉拭子按试剂盒方法进行禽流感病毒核酸检测。

2 结果与分析

2.1 种鸡

注射批号2020016 疫苗的A 场免疫后H7 效价产生较H5 缓慢；A 场首免后第2 周H5、H7 抗体合格率达70%以上，第3 周达90%以上；二免后第2 周能保持较高水平，平均效价均可达9log2 以上，第4 周效价有所回落，第6 周回升。注射批号2020017 疫苗的B 场抗体效价上升较A 场缓慢，二免后同样在第4周有所回落而后又回升，但均能保持较高效价水平。A、B 场首免第5、6 个月抗体效价均有所回落，差异不大（表1）。

表1 种鸡A、B 场抗体水平

2.2 肉鸡

从表2、表3 可知，肉鸡C 场和D 场H5 抗体产生快，首免第3 周合格率达100%，平均效价达8log2 以上；H7 抗体产生较慢，首免第3 周合格率虽上升至80%以上，但平均效价不高。C 场在二免后抗体水平稳定，第4 周效价回落，但直至出栏抗体合格率和平均效价均保持较高水平。D 场仅免疫1 次，平均效价稳步上升至9 log2 以上，在第6 周开始逐步下降，合格率均保持较高水平。

表2 肉鸡C 场抗体水平

3 小结与讨论

不同批次的该重组禽流感病毒三价灭活疫苗在免疫禽群后均能产生抗体，合格率可达到90%以上，二免后能保持一定水平。该疫苗首免后第3 周H5、H7 抗体均能达到较高水平，未出现临床发病情况，说明该疫苗有效性较好，保护率较高。H5 抗体产生较H7 快且稳定，批号2020016 疫苗产生抗体比批号2020017 稍快，首免或二免后抗体合格率及效价出现短时间不同程度的回落现象，但很快又回升，可能跟疫苗批次、抗原浓度、水乳化程度及禽群种类、个体差异等有关。进行二免的禽群比只进行1次免疫的禽群抗体水平稳定，相应棉拭子样品未检测出H5 和H7 亚型禽流感病毒核酸阳性，未见试验养殖场反映有禽只异常死亡及明显应激现象，说明该疫苗安全性较好。试验禽群H5 母源抗体都较高，疫苗抗原性可能受影响，对免疫效果有一定影响。疫苗免疫程序、接种日龄、接种次数、间隔时间及免疫操作规范性都会影响免疫效果，制定科学免疫程序并严格执行，能够进一步提高免疫效果，建议对日龄较大（如120 日龄）出栏的禽群进行三免。