超高液相色谱-串联质谱法测定鸡肉中氟苯尼考残留量的不确定度评定

单长海，李 翔，杨 周，龙 洋，胡 容，孙 辉

（国家富硒产品质量检验检测中心，湖北恩施 445000）

氟苯尼考是一种畜禽动物专用的酰胺醇类的广谱抗菌药，治疗畜禽动物的细菌性疾病，尤其对呼吸道系统感染和肠道感染疗效显著[1-2]。氟苯尼考具有一定的毒性，畜牧农产品中氟苯尼考累积到一定限量，会对人体造成危害[3-4]。《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》（GB 31650—2019）规定，鸡肉中氟苯尼考残留限量小于100 μg·kg-1，是国家对农产品重点监督项目。《食品安全国家标准 动物性食品中氟苯尼考及氟苯尼考胺残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》（GB 31658.5—2021）自2022年2月1日起开始实施，是国家农产品安全监督抽检指定的唯一检测方法。在兽药残留的分析检测工作中，由于试剂耗材质量等级的不同、检测设备的精密度和灵敏度的不同对检测结果产生一定的偏差，通过对标准方法进行测量不确定度分析并关注主要不确定度来源，能够提高检测结果的准确度[5-6]。本文依据GB 31658.5—2021、《化学分析中不确定度的评估指南》（CNAS—GL006：2019），对鸡肉中氟苯尼考残留量测定的不确定度进行评定，旨在为采用新标准进行检测时找出关键控制环节并加以控制，以降低检验风险。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂与仪器

鸡肉样品，市场采购。

氟苯尼考标准品（100.0 mg·L-1，上海安谱实验科技股份有限公司，浓度不确定度U=3.0 mg·L-1）；乙腈、甲酸、正己烷、乙酸乙酯（色谱纯，德国CNW公司）；实验室用水为Milli-Q超纯水，鸡肉中氟苯尼定量分析质控样（自制）。

Triple Quad 5500三重四级杆液相色谱-质谱联用仪（美国ABSCIEX公司）；ST 40R离心机（美国Thermo Fisher公司）；Vac Elut SPS 24半自动固相萃取仪（美国Agilent Technologies公司）。

1.2 实验方法

1.2.1 溶液配制以及样品处理

标准溶液及内标配制：精密量取1.0 mL氟苯尼考标准溶液于10 mL容量瓶中，用乙腈定容，得到10 μg·mL-1氟苯尼考标准工作液；同样方法制备100 ng·mL-1内 标 工 作 溶 液。 按 照 GB 31658.5—2021中8.3的方法制备得浓度分别为10 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1、200 ng·mL-1、500 ng·mL-1和1 000 ng·mL-1的校准工作溶液。

样品处理按GB 31658.5—2021中8.1、8.2、8.3的方法处理，色谱和质谱条件按照8.4的条件设置。

1.2.2 数学模型的建立

根据测量方法建立鸡肉中氟苯尼考残留量定量分析的数学模型为

式中：X为鸡肉中氟苯尼考含量，μg·kg-1；c为试样溶液中氟苯尼考浓度，μg·L-1；m为供试试料质量，g；v为试样定容体积，mL。

2 结果与分析

2.1 不确定度来源的识别

根据GB 31658.5—2021标准方法的测量过程和测量模型，影响鸡肉中氟苯尼考定量分析的不确定度来源有：①样品称量引入的不确定度urel(a)；②氟苯尼考标准物质浓度的准确性引入的不确定度urel(c)；③校准曲线拟合引入的不确定度urel(q)；④检测方法重复性引入的不确定度urel(r)；⑤检测方法加标回收率引入的不确定度urel(h)。由于检测方法加标回收率引入的不确定度包含了提取净化过程引入的不确定度，因此在评定过程中忽略了提取净化过程引入的不确定度。

2.2 不确定度测量

2.2.1 样品称量引入的不确定度urel(a)

（1）天平允差引入的不确定度u(a1)。根据《电子天平校准规程》（JJG 1036—2008），使用0.001 g分度的天平，称样量在2 g（±0.02 g）时最大允许误差为±0.005 g，供试品称样按照均匀分布，则样品称样时由电子天平允许误差引入的标准不确定度为

（2）天平重复性引入的不确定度u(b)。根据电子天平校准证书得天平重复性引入的不确定度为u(b)=0.003 g。

（3）样品称样引入的相对标准不确定度urel(a)。样品称量按2.00 g计算，称量引起的相对标准不确定度为

2.2.2 氟苯尼考标准物质浓度的准确性引入的不确定度urel(c)

氟苯尼考标准物质证书给出的浓度为100.0 mg·L-1，不确定度为3.0 mg·L-1。氟苯尼考标准物质浓度的准确性引入的不确定度为

2.2.3 校准曲线拟合引入的不确定度urel(q)

校准曲线以氟苯尼考标准溶液配制的浓度和仪器分析得到的峰面积见表1，拟合线性方程为Y=0.181X+0.379 1，R2=0.999 9，其中斜率a=0.181，截距b=0.379 1，测量样品的次数p=2，标准曲线测量次数n=6，被测供试品溶液浓度均值c=152 ng·mL-1，配制标准溶液理论平均值c=310 ng·mL-1。计算校准曲线的残差S2为

表1 校准曲线的标准溶液浓度及峰面积统计表

校准曲线拟合引入的标准不确定度为

校准曲线拟合引入的相对标准不确定度为

2.2.4 检测方法重复性测定引入的不确定度urel(r)

称取鸡肉样品10份，按1.2.1的方法进行检测，测定鸡肉中氟苯尼考含量。鸡肉中氟苯尼考含量 检 测 结 果xi分 别 为 76.3 μg·kg-1、78.2 μg·kg-1、75.6 μg·kg-1、72.1 μg·kg-1、70.6 μg·kg-1、75.6 μg·kg-1、78.9 μg·kg-1、77.2 μg·kg-1、73.6 μg·kg-1和 75.2 μg·kg-1，均值X=75.3 μg·kg-1，按公式计算标准偏差S为

检测方法重复性引入的标准不确定度u(r)为

检测方法重复性引入的相对标准不确定度为

2.2.5 检测方法回收率引入的不确定度urel(h)

称取鸡肉样品，按照样品中氟苯尼考含量分别为 50 μg·kg-1、100 μg·kg-1、200 μg·kg-1水平进行加标，每个水平按照3个平行样进行称样加标处理，按照1.2.1的方法进行回收率测定。9个样品的加标回收率分别为88.7%、89.6%、90.5%、92.2%、90.5%、95.6%、94.5%、96.4%和94.6%。方法回收率的平均值x为92.5%，计算相对标准偏差S为

检测方法回收率引入的标准不确定度为

检测方法回收率引入的相对标准不确定度为

2.2.6 合成不确定度urel

通过测定过程的不确定度来源分析，该方法的相对合成不确定度urel为

本次测定的鸡肉中氟苯尼考含量的平均值x为75.3 μg·kg-1，则本次鸡肉中氟苯尼考测定的合成不确定度uc为

2.2.7 扩展不确定度U

按照CNAS-GL006：2018，选择95%置信水平时，包含因子k=2，则测量结果的扩展不确定度U为

因此，按照GB 31658.5—2021方法测定鸡肉中氟苯尼考的结果为（75.3±6.4） μg·kg-1。

3 结论

本研究依据GB 31658.5—2021标准，对鸡肉中氟苯尼考残留量测量过程中的不确定度来源进行了分析，对测量不确定度分量进行评定，发现对检测结果准确度影响最主要的因素为标准曲线拟合，而校准曲线拟合与人员操作检测熟练程度和仪器性能有关。因此，在检测过程中，需要对人员检测能力和仪器维护保养进行定期监控，以降低检验风险。