黎药牛耳枫研究进展

彭政忠 张丽艳 唐靖雯 潘梅 卢礼平 杨桃

【摘 要】 从黎药牛耳楓化学成分、药理活性、质量评价、制剂产品开发等方面进行归纳总结，综述了黎药牛耳枫的化学物质基础，抗炎、抗胆碱、抗肿瘤等药理活性，总黄酮类成分、多指标成分、指纹图谱等质量控制方法，以及已上市制剂产品情况，为进一步开发利用提供参考。

【关键词】 牛耳枫；化学成分；药理活性；质量评价

【中图分类号】R285   【文献标志码】 A    【文章编号】1007-8517（2023）01-0053-05

Research Progress of Li Medicine Daphniphyllum Calycinum Benth

PENG Zhengzhong1，2 ZHANG Liyan2 TANG Jingwen1* PAN Mei1 LU Liping1 YANG Tao1

1.Guizhou Warmen Pharmaceutical Co.， Ltd.， Guiyang 550018，China;

2.School of Pharmacy，Guizhou University of Traditional Chinese Medicine， Guiyang 550025， China

Abstract：The chemical composition， pharmacological activity， quality evaluation， as well as pharmaceutical product development of Daphniphyllum calycinum Benth. were summarized in this paper. The chemical basis， anti-inflammatory， anticholine， antitumor and other pharmacological activities， total flavonoids， multi-index components， fingerprint and other quality control methods， as well as the development of the preparation were reviewed， providing reference for further development and utilization.

Keywords：Daphniphyllum Calycinum Benth.; Chemical Composition; Pharmacologi-cal Activities

牛耳枫为虎皮楠科植物牛耳枫Daphniphyllum calycinum Benth.的干燥地上部分，收载于《贵州省中药材民族药材质量标准（2019年版 第一册）》，具有清热解毒、活血散瘀、祛风止痛的功效［1］。牛耳枫是黎族民间常用药，在黎族地区用其治疗外伤和炎症［2］。在《中华本草》［3］《全国中草药汇编》［4］及《福建药物志》［5］《广西民族药简编》［6］、《海南植物志》［7］等均有记载，具有很高的药用价值和开发前景。由牛耳枫和辣蓼组成的复方牛耳枫片，具有理气健胃、除湿化滞等功效，治疗急慢性肠胃炎，临床疗效佳［3］。笔者综述了牛耳枫化学成分、药理活性、质量评价、制剂产品开发等方面，为黎药牛耳枫进一步研究及综合利用提供参考。黎药牛耳枫研究进展思维导图如图1所示。

1 化学成分

牛耳枫化学成分主要包括生物碱类化合物和黄酮类化合物，还含有少量的三萜类、甾醇类、胡萝卜苷类和酚酸类等其它化合物，其中槲皮素、芦丁、山奈酚、木犀草素、5，7-二羟基色原酮等均为常见的黄酮类化合物［8］。目前，在对牛耳枫化合物及其成分含量方面研究相对较多。

王永丽等［9］从牛耳枫乙酸乙酯部位和正丁醇部位分离、鉴定出7 个化合物，其中5-oxymaltol、2，6-dimethyl-3-hydroxychromone为首次从该植物中分离获得。李晶晶等［10］采用柱层析和重结晶等分离技术，从牛耳枫果实甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物中分离、鉴定出10个化合物，其中5，7-二羟基色原酮、对羟基苯甲酸、5，7，4-三羟基-3-甲基黄酮等9个化合物首次从该植物的果实中分离得到。张小坡等［11］采用多种柱色谱方法从牛耳枫枝叶乙醇提取物中分离、鉴定出8个化合物，其中羽扇豆酮首次从交让木属植物中分离得到，以及胡萝卜苷、槲皮素、芦丁为首次从该植物中分离得到。朱文粮等［12］采用各种色谱方法从牛耳枫的茎叶乙醇浸提物中分离、鉴定出8个生物碱。李晶晶等［13］采用柱层析分离技术和重结晶等方法从牛耳枫叶的乙酸乙酯层分离、鉴定出3个化合物，其中反式对甲氧基肉桂酸、木樨草素为首次从该属植物中分离得到。沈寿茂等［14］从牛耳枫的茎和叶中分离得到4个新的水飞蓟生物碱，即水飞蓟素A - D。近年来从牛耳枫中分离、鉴定的化合物见表1。

2 药理活性

2.1 抗炎作用 宋青等［15］进行了牛耳枫80%乙醇提取物的体内外抗炎作用及其机制研究，通过建立 LPS 诱导的小鼠巨噬细胞ＲAW264.7 体外炎症模型，结果显示，牛耳枫提取物抑制了TNF-α、IL-10、IL-1β的分泌，并呈现剂量依赖性。通过 LPS 诱导建立了小鼠内毒素血症模型，结果显示，牛耳枫提取物对小鼠血清细胞因子和炎性细胞因子有抑制作用；牛耳枫提取物呈剂量依赖性抑制了肝脏中iNOS 和 TNF-α蛋白的表达，对小鼠内毒素血症产生较好的预防和治疗作用。任守忠等［16］以牛耳枫和辣蓼为原料制备枫蓼提取物，分析其抗炎机制，研究表明枫蓼提取物23.4、46.8g/kg均能明显抑制小鼠耳肿胀，枫蓼提取物16.2 g/kg、32.4 g/kg均能显著抑制角叉菜胶致大鼠足跖肿胀，且均能不同程度地降低炎足组织中TNF-α、IL-1β、PGE2和MDA的含量，但对NO无明显影响。结果表明，枫蓼提取物可降低小鼠腹腔毛细血管通透性、减少渗出，减轻小鼠耳肿胀和大鼠足肿胀，具有良好的抗炎作用。刘洪梅等［17］以牛耳枫和辣蓼为原料制备枫蓼发酵提取液，探究其镇痛、抗炎、抗胃溃疡作用，研究表明，枫蓼发酵提取液显著抑制乙酸致小鼠扭体反应，在一定程度上能抑制乙酸致小鼠毛细血管通透性的升高，还能显著抑制二甲苯致耳肿胀和蛋清致足肿胀，减弱乙醇对胃黏膜的损伤以及减少血清中IL-1α、IL-1β的水平，同时抑制组织中HIS渗出，对 PED2渗出也有一定抑制作用。结果表明，枫蓼发酵提取液质量稳定可控，具有良好的抗炎、镇痛、抗胃溃疡作用。

2.2 抗胆碱酯酶活性 王永麗等［9］从牛耳枫中得到的deoxycalyciphylline B、deoxyisocalyciphylline B具有抗乙酰胆碱酯酶（AChE）活性，secodaphniphylline、deoxyisocalyciphylline B 具有较强的抗丁酰胆碱酯酶（BChE）活性。见表2。

吴裕红等［18］以牛耳枫和辣蓼为原料分别制备枫蓼提取物，在乙酰胆碱引起的家兔小肠平滑肌痉挛模型中，对空肠而言，乙酰胆碱使小肠平滑肌收缩活动加强，给予枫蓼水提物、醇提物各剂量（0.125 g/mL、 0.25g/mL、0.5 g/mL）均可使平滑肌收缩张力下降，进而抑制乙酰胆碱引起的小肠平滑肌痉挛；对于回肠平滑肌，枫蓼醇提物各剂量对乙酰胆碱引起的痉挛均有明显的颉颃作用，最低有效浓度为 0. 125 g /mL，而水提物的最低有效浓度为 0. 5 g /mL。见表3。该抑制作用可能是通过阻断乙酰胆碱与 M 受体的结合，降低细胞中钙离子浓度，从而降低小肠平滑肌的兴奋度。

2.3 抗肿瘤活性 王永丽［19］从牛耳枫中提取16种生物碱进行体外抗肿瘤活性筛选，结果显示，2-hydroxyyunnandaphnine D在体外具有较强的抗肿瘤活性，其对人宫颈癌细胞（HeLa）、人肺腺癌细胞（A-549）、人乳腺癌细胞（MCF-7）、人肝癌细胞（HePG-2）和人神经胶质瘤（U-251）等5种肿瘤细胞株均有一定的抑制作用，其中对HePG-2细胞的抑制增殖作用最强，且具有量效和时效关系。曹志然等［20］从牛耳枫的茎叶乙醇浸提物中采用正相硅胶，反相材料（C18，MCI）以及凝胶（Sephadex LH-20，Toyopearl HW-40C）分离得到牛耳枫生物碱F21，并进行了该成分对HePG-2细胞的抑制作用及机制研究，结果表明，牛耳枫生物碱F21在体外对HepG-2细胞具有显著的抑制作用，其作用机制并非通过激活胱天蛋白酶途径而诱导肿瘤细胞的凋亡。王蓓等［21］进行了牛耳枫生物碱2-hydroxyyunnandaphnine D体外抗肿瘤活性及作用机制研究，结果显示，该生物碱在体外对HepG-2细胞、MCFh7细胞及HeLa细胞3种肿瘤细胞株均有明显的抑制作用，且具有明显的时-效和量-效关系依赖性；FDA/PI双染色荧光显微镜观察显示，该生物碱组中死亡细胞数较正常对照组细胞死亡数量增加，且随着剂量的加大细胞死亡数量增加，表明该生物碱在体外具有明显的抑制肿瘤细胞增殖的作用。刘帅等［22］ 从牛耳枫的茎中分离出一种新的牛耳枫Daphnezomine L型生物碱，对HeLa细胞具有中等的细胞毒活性，IC50为16.0μg / mL。

3 质量评价

唐靖雯等［23］对牛耳枫进行了质量标准研究，建立了以指标成分芦丁、牛耳枫对照药材为对照的薄层鉴别（TLC）方法，以及以指标成分芦丁为含量的高效液相色谱（HPLC）法，结果显示，TLC斑点清晰，重复性好；芦丁在0.200～1.403μg范围内线性关系良好，平均加样回收率为101.65%，RSD为 2.42%。何远景［24］建立了牛耳枫中山奈酚-3-O-芸香糖苷含量的HPLC法，结果显示，山奈酚-3-O-芸香糖苷浓度在6.92～69.2 μg/mL之间，且其峰面积呈良好的线性关系。梁颖等［25］建立了同时测定牛耳枫中没食子酸、原儿茶酸、芦丁、山柰酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素、木犀草素、芹菜素、山柰酚等8种成分含量的高效液相色谱串联三重四级杆质谱（HPLC-MS/MS）法，并结合 TOPSIS 分析法，对不同产地（广西桂林、海南琼中、海南海口）牛耳枫样品的8种成分含量进行对比分析及综合评价，结果显示，8种成分在相应的浓度范围内线性关系良好，且海南海口的药材综合质量较好。杜迎翔等［26］建立了牛耳枫的HPLC指纹图谱方法，标定了11个共有峰，指认了2个峰（芦丁、槲皮素），各指纹图谱的相似度均达到 0.85以上；利用系统聚类分析，确定同一地区牛耳枫药材化学成分的稳定性，说明药材质量与采集、干燥、运输及贮存过程有关；利用主成分分析提取了3个主要成分，确定牛耳枫中对第一主成分的影响较大的是芦丁、槲皮素以及其他 3个未知成分。李海龙等［27］建立了测定牛耳枫药材中总黄酮的含量方法，总黄酮在7.84～47.04 μg/mL范围内线性关系良好。

4 制剂产品开发

近年来，各制药企业利用牛耳枫药用资源，开发的中药复方制剂产品枫蓼肠胃康分散片，是以牛耳枫、辣蓼两味药材经加工制成的分散片，具有理气健胃、除湿化滞功能，用于中运不健、气滞湿困而致的急性胃肠炎及其所引起的腹胀、腹痛和腹泻等消化不良症［28］；在急性胃肠炎治疗中，有效改善临床症状［29］。此外，以牛耳枫、辣蓼两味药材组合开发的中药复方制剂产品有枫蓼肠胃康颗粒、枫蓼肠胃康口服液、枫蓼肠胃康胶囊、枫蓼肠胃康软胶囊、枫蓼肠胃康滴丸等，在临床上有一定的应用。黄腾等［30］采用随机、双盲、阳性药平行对照，多中心、非劣效试验设计，收集6个月至5岁患儿240例评价枫蓼肠胃康颗粒治疗小儿急性腹泻（湿热泻）的临床有效性和安全性，结果表明，枫蓼肠胃康颗粒对6个月至5岁小儿急性腹泻（湿热泻）止泻率与儿泻停颗粒疗效相当且起效较快，临床应用安全。吴珮毓等［31］观察枫蓼肠胃康口服液联合思密达治疗老年慢性腹泻的临床疗效，结果表明，观察组总有效率为94.29%，高于对照组的74.29%，差异有统计学意义（P<0.05）；观察组治疗有效时间为（5.27±2.25）d，短于对照组的（8.58±2.80）d，差异有统计学意义（P<0.05）；两组不良反应发生率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。李燕君［32］研究枫蓼肠胃康胶囊联合常规三联（克拉霉素片、奥美拉唑肠溶胶囊和阿莫西林胶囊）治疗慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生的效果，结果表明，试验组幽门螺杆菌（Hp）根除率为82.00%，高于对照组的60.00%，差异有统计学意义（P<0.05）；试验组不良反应发生率为6.00%，低于对照组的20.00%，差异有统计学意义（P<0.05）。

5 展望

目前，对牛耳枫在化学成分和生物活性方面研究较多，但其药用成分和药用机理研究相对较少，严重制约着相关产品的开发［8］。采用现代的分离鉴定技术从牛耳枫中获得的新生物碱2-hydroxyyunnandaphnine D在体外对HepG-2细胞具有较强的抑制作用，且抑制作用具有较好的时效和量效关系［21］，但其作用机制研究较少且尚不清楚。牛耳枫提物研究发现具有抗炎作用［15］，以及在体外具有显著的抗AChE 及抗BChE活性［9］，但对于药理药效等方面的关注较少。牛耳枫的复方制剂产品枫蓼肠胃康颗粒可调节幼龄大鼠的胃液分泌，对幼龄大/小鼠具有一定的抗炎、镇痛、保护胃黏膜及解痉作用，表明其对幼龄动物的急性胃炎具有一定疗效［33］，但对治疗儿科急性胃炎的临床应用还需进一步研究。牛耳枫的中药复方制剂产品开发方面主要与辣蓼组合，与其他中药组合开发的制剂产品较少。因此，下一步对牛耳枫的研究可将化学成分、药理作用机制、临床应用三者紧密结合，开发更多以牛耳枫为原料的复方制剂产品。

参考文献

［1］贵州省药品监督管理局.贵州省中药材民族药材质量标准［M］.北京：中国医药科技出版社，2019：20-21.

［2］刘明生.黎药学概论［M］.北京：人民卫生出版社，2008：41-42.

［3］国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草［M］.第十二卷.上海：科技出版社，1999：865-867.

［4］全国中草药汇编编写组编.全国中草药汇编［M］.下册.北京：人民卫生出版社，1978：154-155.

［5］福建省中医研究所编.福建药物志［M］.第2册.福州：福建科学技术出版社，1983：4，162.

［6］黄燮才.广西民族药简编［M］.南宁：广西壮族自治区卫生局药品检验所，1980：112.

［7］陈焕镛.中国科学院华南植物研究所编辑.海南植物志（第2卷）［M］.北京：科学出版社，1965：187-188.

［8］陈媚，韩丽娜，刘以道，等.牛耳枫研究进展［J］.热带农业科学，2016，36（1）：21-24，29.

［9］王永丽，刘伟，尉小慧，等.牛耳枫的化学成分及抗胆碱酯酶活性分析［J］.中国实验方剂学杂志，2016，22（20）：53-57.

［10］李晶晶，曾东强.牛耳枫果实中抑菌活性成分的初步分离［J］.农药学学报，2013，15（3）：261-266.

［11］张小坡，张俊清，裴月湖，等.黎药牛耳枫化学成分研究［J］.中國现代药，2011，13（10）：26-29.

［12］朱文粮，罗都强，刘召阳.牛耳枫中生物碱的研究［J］.天然产物研究与开发，2010，22（6）：1024-1027.

［13］李晶晶，曾东强.牛耳枫叶甲醇粗提物的生物活性及化学成分研究［J］.广西大学学报（自然科学版），2013，38（3）：559-568.

［14］SHEN S M，LI H，WANG G R，et al. Further new complex daphniphyllum alkaloids from the stems and leaves of Daphniphyllum calycinum： structure and stereochemistry［J］. Tetrahedron，2020，76（49）：131616.

［15］宋青，朱粉霞，李冬玉，等.牛耳枫提取物的抗炎作用［J］.中成药，2017，39（9）：1771-1776.

［16］任守忠，苏文琴，陈君，等.枫蓼提取物的抗炎作用及机制研究［J］.中药药理与临床，2016，32（1）：160-163.

［17］刘洪梅，陈玉婷，何立美，等.枫蓼发酵提取液总黄酮含量测定及药效［J］.中国兽医学报，2016，36（6）：1001-1007，1014.

［18］吴裕红，彭新宇，张嘉慧，等.枫蓼提取物成分分析及其主要成分黄酮对肠平滑肌的药效学研究［J］.黑龙江畜牧兽医，2021（2）：128-136.

［19］王永丽.牛耳枫生物碱体外抗肿瘤活性成分筛选及作用机制研究［D］.保定：河北大学，2012.

［20］曹志然，王永丽，戎瑞雪，等.牛耳枫生物碱F21对HepG-2细胞的抑制作用及机制［J］.中国药理学与毒理学杂志，2012，26（1）：63-67.

［21］王蓓，戎瑞雪，郑聪毅，等.牛耳枫生物碱2-hydroxyyunnandaphnine D体外抗肿瘤活性及作用机制［J］. 河北大学学报（自然科学版），2013，33（4）：401-407.

［22］LIU S，ZHANG J H，DI Y T，et al. Daphniphyllum alkaloids with cytotoxic activity from Daphniphyllum angustifolium.［J］.Natural product research，2017，32（18）：2165-2170.

［23］唐靖雯，彭政忠，潘梅，等.牛耳枫质量标准提升研究［J］.中国民族民间药，2021，30（13）：69-74.

［24］何远景.HPLC法测定牛耳枫中山奈酚-3-O-芸香糖苷的含量［J］.四川中医，2017，35（2）：57-59.

［25］梁颖，许文佳，符策奕，等.HPLC-MS/MS法同时测定牛耳枫中的8种成分［J］.中药材，2018，41（11）：2615-2618.

［26］杜迎翔，李冬玉，陈家全，等.牛耳枫的高效液相色谱指纹图谱研究［J］.中药材，2016，39（12）：2789-2793.

［27］李海龙，刘明生，张俊清，等.牛耳枫药材中总黄酮含量测定［J］.海南医学，2012，23（15）：106-108.

［28］王玉鹏，赵丽华，黄顺旺.枫蓼肠胃康分散片的质量研究［J］.中国实验方剂学杂志，2012，18（20）：109-111.

［29］薛微.枫蓼肠胃康分散片对急性胃肠炎的治疗作用研究［J］.临床医药文献电子杂志，2019，6（80）：158-159.

［30］黄腾，王孟清，杜幼蕊，等.枫蓼肠胃康颗粒治疗小儿急性腹泻（湿热泻）120例随机双盲多中心临床研究［J］.中医杂志，2021，62（4）：318-323.

［31］吴珮毓，穆小松.枫蓼肠胃康口服液联合思密达治疗老年慢性腹泻的疗效观察［J］.检验医学与临床，2020，17（20）：3016-3017.

［32］李燕君.枫蓼肠胃康胶囊联合常规三联治疗慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生的效果［J］.中国医学创新，2020，17（19）：149-153.

［33］茹丽，刘静，张志兰，等.黎药枫蓼肠胃康颗粒对幼龄大/小鼠的抗炎、镇痛、保护胃黏膜及解痉作用研究［J］.中国药房，2017，28（1）：67-71.

（收稿日期：2022-04-28 编辑：陶希睿）