猪繁殖与呼吸综合征病毒与多杀性巴氏杆菌混合感染的诊断

牛合霞

（邯郸市大名县农业农村局，河北大名056900）

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）因病猪耳部皮肤呈蓝紫色而被业内人员称为“猪蓝耳病”，该病以怀孕母猪早产、流产，或产出死胎、畸形胎、弱胎和仔猪呼吸困难为主要临床特征。 PRRS 的病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV），目前我国猪病临床上已发现的PRRSV 包括美洲型毒株（经典毒株、高致病性毒株、类NADC30 毒株、类NADC34 毒株）和欧洲型毒株；美洲型毒检出明显多于欧洲型毒株。 感染PRRSV 的猪免疫系统被攻击， 增加了细菌、 病毒和支原体感染几率。PRRSV 流行毒株具有遗传多样性，变异快，传播方式复杂。临床上不断的用药和疫苗的使用加剧了PRRSV 变异。 上述现象进一步加重了猪场PRRS 的防控难度。

多杀性巴氏杆菌属于巴氏杆菌科、巴氏杆菌属，是动物呼吸道重要病原菌，可感染多种宿主（猪、牛、羊、兔、禽、野生动物和宠物）, 是一种无鞭毛、无芽孢、革兰氏阴性、短杆状或球杆状、致病性极强的细菌。 根据荚膜抗原的差异，可将多杀性巴氏杆菌分为5 种血清型（A、B、D、E、F型）， 其中A 型和D 型为我国流行多杀性巴氏杆菌主要的血清型，主要引起猪肺疫和猪传染性萎缩性鼻炎。多杀性巴氏杆菌可造成严重的呼吸道症状，也可与其他病原协同致病，增加死亡率，降低饲料转化率，对我国养猪业发展产生了严重威胁。猪场抗生素过量使用造成了多重耐药的多杀性巴氏杆菌出现， 为该病防控带来了更大困难。

河北某养殖场保育仔猪发病，根据临床症状观察、病理学检查和实验室检测结果，初步判定该养殖场仔猪发生了PRRS 与巴氏杆菌病混合感染， 根据药敏试验结果对该猪群进行治疗，同时根据PRRSV 序列分析结果制定PRRS 防控措施。本文对保育仔猪PRRS 与巴氏杆菌病混合感染的发病情况、病理变化、实验室诊断及防制措施进行了介绍， 可为养猪业的从业人员提供参考。

1 病猪临床表现

2023 年3 月18 日，该场从周边猪场外购且未免疫过PRRS 疫苗的仔猪开始发病，主要症状为病猪精神萎靡，吃料减少，猪耳部皮肤变成蓝紫色， 同时伴有咳嗽； 病猪直肠温度在40.5℃～42.0℃。 发病5 天后部分病猪开始出现气喘、腹式呼吸、被毛粗乱无光泽、体重下降，病猪陆续出现死亡。 发病7 天后发病率达到30%，死亡率为5%。

2 剖检病变

对猪场送检的4 头病死仔猪剖检的病变如下：耳部皮肤呈蓝紫色（3/4）；颌下淋巴结和腹股沟淋巴结出血（2/4）；心包腔积有黄白色液体（1/4），心包与心外膜之间见灰白色、丝状纤维素性分泌物（2/4），心外膜见出血点（1/4）；气管和支气管管腔内见大量泡沫样分泌物（2/4）；肺胸膜与肋胸膜之间见灰白色丝状纤维素样分泌物（2/4），肺尖叶、心叶的部分肺小叶呈深红色、质地坚实（3/4），部分肺小叶可见气肿（2/4）。 肝脏肿大，表面散在黄白色坏死灶（2/4）。 肾脏呈土黄色、散在针尖大小出血点（1/4）。 其他器官未见肉眼可见病变。

3 实验室诊断

3.1 病毒性疾病的分子生物学诊断

按照试剂盒说明书程序，处理病料、提取病料RNA，进行PRRSV、猪呼吸道冠状病毒、伪狂犬病病毒和猪流感病毒的PCR 检测，结果表明，送检猪病料呈PRRSV 阳性；其余3 种病毒均未检出。将呈PRRSV 阳性的PCR 产物委托生工生物工程 （上海） 股份有限公司进行测序，将PRRSV 的测序结果与国际序列进行BLAST 比对，序列比对结果显示，该猪场仔猪病料中检出的PRRSV 与类NADC30 毒株高度同源。

3.2 细菌分离鉴定

无菌操作取病死猪心包积液、有纤维素样分泌物的肺脏和气管分泌物，进行涂片，采用美兰染色和革兰氏染色，美兰染色镜检结果，发现典型的两级着色的短杆菌； 革兰氏染色镜检结果，为革兰氏染色阴性、无芽孢、短杆状或球杆状的菌。

无菌操作取病死猪有纤维素样分泌物的肺脏和气管分泌物分别接种于含10%新生牛血清TSA 平板、 十六烷基三甲基溴化铵琼脂平板（CA）和麦康凯琼脂平板（MA），37℃恒温培养箱培养24～36 小时， 按常规方法进行细菌分离纯化。 细菌学检测结果表明，接种病料的含10%新生牛血清TSA 平板上生长出圆润、灰白色、透明或半透明的小菌落；十六烷三甲基溴化铵琼脂平板和麦康凯琼脂平板上均无细菌生长。取纯化细菌的单菌落进行美兰染色和革兰氏染色，这两种染色结果与病料染色结果相同。 初步判定，送检猪病料纯化的2 株细菌均为多杀性巴氏杆菌，分别命名为P1 株和P2 株。

3.3 药敏试验

挑取分离纯化2 株细菌培养物接种于含10%新生牛血清的TSB 中，于37℃振荡（220 转/分钟） 培养16 小时， 取适量菌液采用纸片扩散（K-B）法进行药敏试验。 结果表明，2 株分离菌对头孢噻肟和阿米卡星均极敏，对新霉素、庆大霉素和大观霉素均高敏，对卡那霉素、阿莫西林和强力霉素均低敏，对其余4 种药物均耐药（见表）。

药物敏感性试验结果（抑菌圈直径：毫米）

4 小结与讨论

综合发病仔猪的临床症状、病理剖检结果及实验室诊断结果， 判定该场外购的仔猪发生了PRSSV 与多杀性巴氏杆菌的混合感染， 建议采取以下防控措施：

4.1 PRSS 的防控措施

目前没有特效药物治疗PRSS。因此，在该病防控方面，建议做好以下工作：

严格执行病死猪的无害化处理制度；及时清除传染源，切断传播途径。 对引进的猪要严格进行检疫，猪繁殖与呼吸综合征病毒检测呈阴性也要隔离1 周。猪繁殖与呼吸综合征易引起猪继发性感染或混合感染， 导致死亡率大幅度增加，发现疑似病例应尽快确诊，隔离病猪，并对猪舍加强消毒。 及时淘汰发病猪，隔离饲养感染猪繁殖与呼吸综合征病毒后康复仔猪，育肥猪出栏后圈舍及用具及时进行彻底消毒后再使用。在猪存栏期间，要确保猪舍空气流通，同时也要合理控制温湿度。 冬季更要做好通风与保温工作。 猪舍合理控制饲养头数，密度不宜过大。 养殖企业应重视PRSS 的血清学和病原学监测，根据监测结果及时做好PRSS 的预警工作。 建议对病料中含有的猪繁殖与呼吸综合征病毒进行测序与序列分析， 提高选择猪繁殖与呼吸综合征疫苗的精准性。 若猪场检测出的PRRSV 与现有疫苗毒株序列高度同源，可以考虑给未发病仔猪接种猪繁殖与呼吸综合征疫苗，否则不予考虑接种猪繁殖与呼吸综合征疫苗。

4.2 猪巴氏杆菌病的防控措施

猪场应重视猪舍卫生与消毒工作。加强外购仔猪的饲养管理，气候不稳定时要注意增强猪群的抵抗力，减少各种不良应激反应。 为控制猪细菌性疾病的发生发展和减少耐药菌株出现，应及时进行药敏试验，科学使用抗菌药物，以免贻误治疗猪巴氏杆菌病的时机。待猪群情况稳定后考虑给健康猪接种猪肺疫疫苗。 坚持以预防为主，减少易感动物数量，降低发病率。

4.3 猪病的鉴别诊断

根据耳部皮肤发绀、浅表淋巴结出血、肺实变、 肾脏病变初步判定发病仔猪存在病毒性疾病， 猪呼吸道病毒的鉴别诊断应注意区分PRRSV、猪呼吸道冠状病毒、伪狂犬病病毒和猪流感病毒等；根据心包炎、纤维素性肺炎等病理变化判定发病仔猪存在细菌性疾病，猪呼吸道细菌感染的鉴别诊断应注意区分多杀性巴氏杆菌、副猪嗜血杆菌、猪链球菌等。 鉴于主诉先前诊治效果较差，故建议对该场发病仔猪及时进行病理学和病原学检查，以较早控制仔猪病情蔓延。