加味星蒌承气颗粒制备工艺及质量标准研究

任桂林 蒲清荣 赵剑 黄锐 罗群 唐定洪 李能源 杨思进

摘要：目的 研究加味星蒌承气处方的制备工艺和质量标准，为研制成颗粒剂提供基础。

方法 采用正交实验法进行水提工艺研究，以出膏率及辛弗林的含量为指标，优选出最佳的水提工艺。采用薄层鉴别及高效液相色谱法对加味星蒌承气颗粒进行质量标准研究。

结果 加味星蒌承气处方最佳的提取工艺为：十二倍量的水，浸泡0.5 h，煎煮0.5 h，煎煮3次。在此条件下，出膏率为（21.79±0.94）%，辛弗林含量为（2.0097±0.09）mg/g。该水提工艺条件稳定可行，干膏率及辛弗林含量较高。加味星蒌承气颗粒以羌活中紫花前胡苷，大黄中大黄酸、大黄素甲醚，芒硝为鉴别指标，以麸炒枳实中辛弗林为含量指标，建立了加味星蒌承气颗粒的质量标准。

结论 本文为加味星蒌承气颗粒备案为医疗机构制剂提供了药学基础。

关键词：加味星蒌承气颗粒；制备工艺；质量标准；辛弗林；正交实验

中图分类号：R285.5

文献标志码：A

文章编号：1007-2349（2023）07-0001-03

痰热腑实证是中风病急性期最常见的证候，化痰通腑法是中风病急性期基本治疗大法［1］。星蒌承气汤是化痰通腑的代表方剂［2］。加味星蒌承气汤是在星蒌承气汤的基础上加郁金、石菖蒲、胆南星、鸡血藤、麸炒枳实、姜厚朴、地龙、甘草组成，具有熄风清热，通腑化浊，开玄启闭的功效，适用于中风病急性期风火痰瘀所致的玄府郁闭证，症见神识昏朦、口舌歪斜、偏瘫、肢麻、大便秘结或不通等。为方便临床使用，提高治疗脑梗死急性期治疗水平，本文采用正交实验优选加味星蒌承气处方最佳的制备工艺，并研制成颗粒剂，同时对颗粒剂进行质量标准研究，为医疗机构制剂的申报提供药学基础。

1 材料与方法

1.1 实验材料 紫花前胡苷（中国食品药品检定研究院，批号：111821-201604）；辛弗林（中国食品药品检定研究院，批号：110727-201809）；大黄酸（中国食品药品检定研究院，批号：110757-201607）；大黄素甲醚（中国食品药品检定研究院，批号：110758-201817）；加味星蒌承气颗粒（西南医科大学附属中医医院制剂室，批号：20201128，20201129，20201130）

1.2 实验仪器 A-SERIES电子天平（常州市幸运电子设备有限公司）；AUW120D十万分之一电子天平（日本岛津）；HH-4数显恒温水浴锅（江苏金坛市金城国胜实验仪器厂）；JPCT0328超声波发生器（武汉嘉鹏电子有限公司）；GOODLOOK-1000型薄层成像系统（上海科哲生化科技有限公司）；LC-20AT高效液相色谱仪（日本岛津）

1.3 辛弗林含量测定［3］ 色谱条件 以十八烷基键合硅胶为填充剂；以甲醇-磷酸二氢钾溶液（取磷酸二氢钾0.6 g，十二烷基磺酸钠1.0 g，冰醋酸1 mL，加水溶解并稀释至1000 mL）（50：50）为流动相；流速为1 mL·min-1，检测波长为275nm，柱温为40℃，理论塔板数按辛弗林计应不低于4000。

对照品溶液的制备 取辛弗林对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1 mL含辛弗林0.5 mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备 取干浸膏粉末3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，加热回流1.5 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 mL，蒸干，残渣加水10 mL使溶解，通过聚酰胺柱（60～90目，2.5 g，内径为1.5 cm，干法装柱）用水20 mL洗脱，收集洗脱液，转移至25 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。

1.4 制备工艺研究 按处方准确称取加味星蒌承气饮片，选择加水量、浸泡時间、煎煮时间、煎煮次数为因素，选用L9（34）因素水平表安排正交试验，进行水提，合并提取液，浓缩，烘干，进行干膏率的测定及含量测定，优选最优的水提工艺［4-5］。

1.5 质量标准研究 对加味星蒌承气颗粒进行质量标准研究，包括鉴别和含量测定。以羌活中紫花前胡苷、大黄中的大黄酸、大黄素甲醚和芒硝作为鉴别，以枳实中的辛弗林作为含量测定指标。

2 结果

2.1 方法学考察［6］

2.1.1 线性关系的考察 取辛弗林对照品8.47 mg置25 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，制得浓度为0.3371 mg/mL的对照品溶液，作为对照品贮备液，备用。分别精密量取对照品贮备液0.25，0.5，1.0，2.0，4.0，8.0 mL，分别置10 mL的量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别制成浓度为0.008 43，0.016 86，0.033 71，0.067 42，0.134 84，0.269 68 mg/mL的对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液各10 μL，按照上述色谱条件测定。以峰面积（A）为纵坐标（Y），辛弗林浓度（mg/mL）为横坐标（X），绘制标准曲线。得到辛弗林的回归方程为y=5E+06x-876.02，R2=0.999 8（n=6），在0.008 43 mg/mL～0.269 68 mg/mL范围内呈良好的线性关系。

2.1.2 精密度试验 取浓度为0.033 371 mg/mL的辛弗林对照品连续进样测定6次，其峰面积平均值为148 364.3，RSD值为0.93%，表明仪器精密度良好。

2.1.3 重复性试验 取加味星蒌承气浸膏粉，按供试品制备方法制备，平行制备6份样品，测定，辛弗林平均含量为1.66 mg/g，RSD%为1.32%，表明分析方法重复性良好。

2.1.4 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在0，2，4，8，12，24 h进样分析。记录峰面积，结果辛弗林峰面积均值为206 886.5，RSD%为0.69%。表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.1.5 加樣回收试验 精密称取辛弗林对照品26.21 mg，加甲醇定容至25 mL，其浓度为1.0432 mg/mL，称取同一份供试品1.5 g，精密称定。每3份为一组，每组分别加入辛弗林对照品溶液1.5 mL，2.6 mL，3.9 mL。按照供试品溶液制备方法制备，进样，测定。

2.1.6 专属性试验 取缺枳实的处方量饮片，按“1.3辛弗林含量测定”中供试品制备方法制备阴性样品溶液，对比阴性样品、对照品和供试品的高效液相色谱图。结果表明加味星蒌承气颗粒其他组分对辛弗林的测定无干扰，本方法专属性强。

2.2 制备工艺研究

2.2.1 水提正交实验研究 取水提正交实验干浸膏，按照辛弗林含量测定的方法制备样品，测定，记录峰面积，计算含量。以辛弗林的含量及干膏率为指标进行综合评分，综合评分值=［（辛弗林含量/辛弗林含量最大值）×0.6+干膏率/干膏率最大值×0.4］×100［7-8］。正交试验结果见表3、表4。

由直观分析可见，影响提取效果的因素顺序为：提取次数C>加水量A>煎煮时间B>浸泡时间D，以浸泡时间D作为误差项，进行方差分析。方差分析结果表明，提取次数和加水量对结果有显著性影响（P<0.05），煎煮时间对结果无显著性影响，无统计学差异（P>0.05）。因此，水提的最佳提取工艺中，最佳的因素组合为A3B1C3D3，考虑到生产实际，由于浸泡时间对结果影响很小，故最佳的水提工艺定为：十二倍量的水，浸泡0.5 h，煎煮0.5 h，煎煮3次。

2.2.2 水提验证性试验 由于水提工艺的最佳方案没有在正交试验因素表内，因此对最佳水提工艺进行了3次验证。结果见表5。

2.3 质量标准

2.3.1 羌活TLC鉴别［9-10］ 取加味星蒌承气颗粒    5 g，加甲醇50 mL，超声处理20 min，静置，过滤，滤液浓缩至2 mL，作为加味星蒌承气颗粒供试品溶液。另取紫花前胡苷对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。按处方（除羌活外）与制法，制成阴性样品，其余处理同供试品溶液，作为阴性样品溶液。照薄层色谱法（四部通则0502）试验，吸取上述三种溶液各10 μL，分别点于同一3%醋酸钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（8∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝色荧光斑点，且阴性样品无干扰。同时在三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（9∶1∶5∶0.5）验证系统一和三氯甲烷-甲醇（9∶5）验证系统二为展开剂的条件下，样品中分离情况均良好，缺羌活阴性样品无干扰。见图3。

2.3.2 大黄TLC鉴别［11-14］ 取加味星蒌承气颗粒5 g，加甲醇50 mL，浸泡1 h，滤过，蒸干，残渣加水10 mL使溶解，再加盐酸1 mL，加热回流30 min，立即冷却，用乙醚分2次振摇提取，每次20 mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1 mL使溶解，作为加味星蒌承气颗粒供试品溶液。另取大黄酸和大黄素甲醚对照品，分别加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。按处方（除大黄外）与制法，制成阴性样品，其余处理同供试品溶液，作为阴性样品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各10 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相对应的位置上，显相同的橙黄色荧光主斑点，阴性无干扰。同时在正己烷-乙酸乙酯-甲酸（30∶10∶0.5）验证系统一和环己烷-乙酸乙酯-甲酸（12∶5∶0.1）验证系统二为展开剂的条件下，样品中分离情况均良好，缺大黄阴性样品无干扰。见图4。

2.3.3 芒硝鉴别 芒硝中含有Na2SO4，取加味星蒌承气颗粒1 g，加10 mL水溶解后，加盐酸1 mL，搅拌，加入氯化钡试液5 mL，作为加味星蒌承气颗粒供试品溶液。另取芒硝0.2 g，加10 mL水溶解后，加盐酸1 mL，搅拌，加入氯化钡试液5 mL，作为芒硝对照溶液。芒硝对照溶液和加味星蒌承气颗粒供试品均生成白色沉淀。

2.3.4 含量测定 加味星蒌承气颗粒的含量测定色谱条件及供试品制备方法同“1.3辛弗林含量测定”，根据加味星蒌承气颗粒（批号：20201128，20201129，20201130）三批中试结果，规定本品每1 g颗粒含麸炒枳实以辛弗林（C9H13NO2）计，不得少于0.94 mg。

3 讨论

加味星蒌承气颗粒供试品色谱中，在与紫花前胡苷相对应的位置上，显相同颜色的蓝色荧光斑点，且阴性无干扰，可作为质量标准鉴别项。加味星蒌承气颗粒供试品色谱中，在与大黄酸、大黄素甲醚相对应的位置上，显相同颜色的橙黄色荧光斑点，且阴性无干扰，可作为质量标准鉴别项。加味星蒌承气颗粒供试品与芒硝显相同的白色沉淀，可作为质量标准鉴别项。

同时，本文对其他部分药材也进行了鉴定试验，加味星蒌承气颗粒供试品色谱中，在与郁金、姜厚朴、地龙对照药材相应的位置上，无相应的斑点，故未选择郁金、姜厚朴、地龙作为鉴别。加味星蒌承气颗粒供试品色谱中，在与瓜蒌皮对照药材相应的位置上，斑点颜色较浅，加大取样量和点样量后，斑点颜色仍较浅，故不作为质量标准的鉴别指标项。加味星蒌承气颗粒供试品色谱中，在与鸡血藤对照药材相应的色谱位置上，红色主斑点无相应斑点，故未选择鸡血藤作为鉴别项。加味星蒌承气颗粒和缺胆南星阴性样品在两液相交处均能产生环，故胆南星不作为鉴别项。加味星蒌承气颗粒中含量测定以辛弗林为指标，且缺麸炒枳实阴性样品无干扰，可作为含量测定指标。

本文按照四川省医疗机构机制备案管理的相关

要求，本文主要完成了工艺研究和质量标准研究，为医疗机构制剂的申报提供基础。

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（收稿日期：2022-08-18）