HPLC法测定注射用伏立康唑中倍他环糊精的含量

赵萌 朱明儒

【摘要】目的：建立注射用伏立康唑制剂中倍他环糊精含量测定方法，考察该制剂中倍他环糊精的影响因素。方法：参考《中华人民共和国药典（2020年版）》四部羟丙基倍他环糊精中有关物质测定方法，采用HPLC，示差折光检测器测定倍他环糊精，参考《中华人民共和国药典（2020年版）》四部原料药物与制剂稳定性试验指导原则建立影响因素试验。结果：建立测定方法并对该方法进行方法学验证，结果该方法专属性好、检测限和定量限满足测定要求、线性关系良好、准确度高，方法可行，影响因素试验中高温条件下倍他环糊精含量明显增加。结论：本方法为注射用伏立康唑中倍他环糊精的含量测定提供参考，影响因素试验提示企业在生产及贮存过程中应关注温度变化。

【关键词】倍他环糊精；示差检测器；注射用伏立康唑；影响因素

【DOI编码】10.3969/j.issn.1674-4977.2023.05.031

Determination of Beta-cyclodextrin in Voriconazole for Injection by HPLC

ZHAO Meng， ZHU Mingru

（Jilin Institute for Drug Control， Changchun 130000， China）

Abstract：Objective： To establish a method for the determination of beta-cyclodextrin in voriconazole for injection， and investigate the influencing factors of beta-cyclodextrin in the preparation. Methods：Referring to the determination method of related substances in hydroxypropyl beta-cyclodextrin in the fourth part of the "Chinese Pharmacopoeia 2020 edition"， the beta-cyclodextrin was determined by HPLC and differential refractive detector， and the influence factor test was established by referring to the guiding principles of the stability test of raw materials and preparations in the fourth part of the "Chinese Pharmacopoeia 2020 edition". Results： The determination method was established and its methodology was verified. The results showed that the method was specific， the detection limit and the limit of quantification met the determination requirements， the linear relationship was good， the accuracy was high， and the method was feasible. The content of beta-cyclodextrin was significantly increased under high temperature in the influence factor test. Conclusion：This method provides a reference for the determination of beta-cyclodextrin in voriconazole for injection， and the test of influencing factors suggests that enterprises should pay attention to temperature changes during production and storage.

Key words：beta-cyclodextrin； differential detector； voriconazole for injection； influence factor

伏立康唑为难溶性药用原料，其在水中的溶解度仅为0.2 mg/mL（pH=3）[1]。目前，市售注射用伏立康唑多添加辅料羟丙基倍他环糊精或磺丁倍他环糊精，辅料与伏立康唑形成包合物，增加伏利康唑的水溶性及稳定性[2-4]，以满足注射用制剂要求。经了解，环糊精类辅料添加量均在伏立康唑量的15倍左右，由此研究辅料带来的杂质具有重要意义。倍他环糊精为该类辅料的主要降解杂质，其用于注射剂，安全性需进一步考察。因此，参照《中华人民共和国药典》2020年版四部[5]羥丙基环糊精检验标准中倍他环糊精检验方法对注射用伏立康唑中倍他环糊精的含量进行测定，并对该方法进行方法学验证。对样品进行影响因素试验，考察不同条件对注射用伏立康唑制剂中倍他环糊精的影响。

1建立测定方法

1.1实验仪器

Waters e2695高效液相色谱仪；Mettler MS105电子天平（0.00001 g）。

1.2实验试剂

甲醇，来源：Fisher Scientific，批号：185860；纯化水，实验室自制；倍他环糊精对照品，来源：中国食品药品检定研究院，批号：100317-202005，含量89.0%。

1.3色谱条件

色谱柱：苯基键合硅胶柱（Venusil XBP Polar-Phenyl 4.6×250 mm，5μm）；柱温：40℃；流速：1.5 mL/min；进样量：20μL；流动相：甲醇-水（90∶10）；示差折光检测器：检测器温度40℃。

1.4分析方法

对照品溶液的制备：取倍他环糊精对照品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每1 mL中约含倍他环糊精0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液制备：取注射用伏立康唑制剂适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每1 mL中约含0.1 g的溶液，作为供试品溶液。

1.5测定法

分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。

1.6方法学验证

1.6.1专属性

取溶剂作为阴性样品溶液。精密量取阴性样品溶液、供试品溶液、对照品溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。详见图1至图3。

测定结果显示供试品溶液色谱图中有与对照品溶液保留时间一致的色谱峰，且与相邻色谱峰分离良好，阴性样品溶液在倍他环糊精出峰处无干扰，本方法专属性良好。

1.6.2定量限

取倍他环糊精对照品（0.0058 mg/mL），作为定量限溶液。精密量取20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，倍他环糊精的峰高约为基线噪音的10倍，计算定量限为133.27 ng。

1.6.3检测限

取倍他环糊精对照品（0.0019 mg/mL），作为检测限溶液。精密量取20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，倍他环糊精的峰高约为基线噪音的3倍，计算检测限为42.65 ng。

1.6.4线性

分别取对照品适量，置适量量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，制成每1 mL约含倍他环糊精0.1、0.25、0.4、0.5、0.6、0.75 mg的溶液，作为线性系列溶液。精密量取定量限溶液与线性系列标准溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，以对照品浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准曲线，详见图4。

结果表明，倍他环糊精的浓度在0.0066～0.7689 mg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系，y=88595x-281.28，R2=1。

1.6.5精密度试验

取倍他环糊精对照品溶液（0.5 mg/mL），分别于0、3、6、9、12和15小时，精密量取20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，计算精密度为0.1%。

1.6.6重复性试验

取供试品（批号：201001），按拟订方法独立测定6份。结果RSD为1.6%。表明该方法重复性良好。

1.6.7准确度试验

分别精密称取注射用伏立康唑（批号：201001）约1.0 g，每个生产企业9份，至10 mL量瓶中，其中3份精密加入倍他环糊精对照品使制成0.25 mg/mL，另3份精密加入对照品使制成0.5 mg/mL，最后3份精密加入对照品使制成0.6 mg/mL，作为准确度试验溶液。精密量取上述溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，記录色谱图，计算回收率，结果平均回收率100.47%，RSD：0.5%，准确度良好。

2样品测定

取4批样品，按照拟定的倍他环糊精测定方法，测定样品中倍他环糊精的含量，结果见表1。

3影响因素试验

3.1试验方法

1）高温考察：取选定样品，分别置CZ-A-80C恒温恒湿试验仪中，考察制剂在60℃条件下放置5天、10天、30天时主要考察指标同0天的变化情况。

2）高湿考察：取选定样品，分别置下部放置KNO3饱和溶液的干燥器中，考察制剂在92.5%RH条件下放置5天、10天、30天时主要考察指标同0天的变化情况。

3）强光照射考察：取选定样品，分别置BXZ-250型综合药品稳定性试验箱中，考察制剂在4500 lx条件下放置5天、10天、30天时主要考察指标同0天的变化情况。

3.2试验结果

样品在高温、高湿及光照条件下，倍他环糊精测定结果见表2。倍他环糊精的量在高温条件下变化显著，见图5，高湿及光照条件下变化较小，几乎不变。

4结论

经方法学验证，结果上述注射用伏立康唑中倍他环糊精测定方法专属性好、检测限和定量限满足测定要求、线性关系良好、准确度高，方法可行。该方法为注射用伏立康唑中倍他环糊精的含量测定提供参考。影响因素试验中倍他环糊精的量在高温条件下变化显著，提示企业在生产及贮存过程中应关注温度变化。

【参考文献】

[1]冯彩霞，修宪，田伟，等.注射用伏立康唑磺丁基醚倍他环糊精包合物工艺开发和质量研究[Z].2018.

[2]修宪，田伟，陈东健，等.磺丁基醚-β-环糊精对伏立康唑增溶作用的考察[J].中国药师，2014，17（9）：1457-1460.

[3]谷福根，高永良，崔福德.磺丁基醚-β-环糊精及其在药剂学中的应用[J].中国新药杂志，2004（1）：15-19.

[4] O. DAS，V. M. GHATEAND S. LEWIS. Utility of Sulfobutyl Etherβ-Cyclodextrin Inclusion Complexes in Drug Delivery[J].Indian J Pharm Sci，2019，81（4）：589-600.

[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典（2020版）[M].北京：中国科技出版社，2020：742.

【作者简介】

赵萌，女，1990年出生，主管药师，研究方向为药品检验与研究。朱明儒，女，1992年出生，初级工程师，研究方向为药品检验与研究。

（编辑：侯睿琪）