多司马酯的含量测定方法探讨

付永超

（未名生物医药有限公司，福建 厦门 361009）

多司马酯（Dosmalfate，又名地奥明七硫酸氢酯铝）是香叶木甙七硫酸酯的碱式铝盐，属于含铝的黄酮类化合物，是天然植物成分地奥司明经过结构改造合成的胃黏膜保护剂，临床上用于预防和治疗非甾体抗炎药所致的消化道黏膜损伤[1]。该药由西班牙Faes公司创制，于2000年首次在西班牙上市。国内由湘北威尔曼制药股份有限公司于2005年上市。

多司马酯为淡黄色粉末，无臭，几乎无味，有引湿性。该物质在水、甲醇或氯仿中几乎不溶，在稀盐酸溶液中易溶，在1 mol/L氢氧化钠溶液中溶解。多司马酯英文名称Dosmalfate[INN]，CAS号为122312-55-4，分子式为C28H61Al16O79S8，分子量为2 349.96，其结构复杂，单一方法难以准确测定并客观描述其含量，该文采用容量法、高效液相色谱法综合测定铝、硫和香叶木甙七硫酸酯3个不同官能团，使多司马酯含量测定结果更精确，达到质量控制更精准的目的。

1 材料与方法

1.1 药品、试剂与仪器

多司马酯样品为实验室自制，批号分别为001、002和003；盐酸为市售分析纯；硫酸为市售分析纯；硝酸为市售分析纯；氯化钡为市售分析纯；氯化镁为市售分析纯；氯化铵为市售分析纯；三乙醇胺为市售分析纯；铬黑T为市售试剂；氨水为市售分析纯；醋酸为市售分析纯；醋酸铵为市售分析纯；EDTA为市售分析纯；二甲酚橙为市售试剂；氯化铝为市售分析纯；乙腈为市售TEDIA色谱纯；三乙胺为市售分析纯；氟化钠为市售分析纯；香叶木甙七硫酸酯钠盐为市售试剂；仪器为岛津LC-10A，7725i进样阀（20 μL定量管），紫外检测器；Agilent1100，四元梯度泵，柱温箱，脱气机，自动进样器，DAD检测器；UV-2501PC紫外分光光度计。

1.2 研究对象

研究对象为多司马酯化学结构中的铝、硫和香叶木甙七硫酸酯3个官能团。

1.2.1 铝

该物质含铝，铝是该物质主要药效基团之一，是制酸力的主要来源，是重要的质量指标，现版中国药典收载铝的单方复方药物有多个，包括硫糖铝、氢氧化铝以及复方铝酸铋片等。其测铝的方法都大同小异，以EDTA法测定，该物品沿用药典成熟方法，并经过验证，其指示剂变色敏锐。

1.2.2 硫

该物质含硫，硫的含量也是重要的质量指标之一，只有生成硫酸酯（盐）后才能联结上氢氧化铝，从而发挥药效，中国药典的硫糖铝中测定硫的含量，该物质也根据药典成熟方法测定硫，测定原理为络合滴定法，硫酸与加入的氯化钡形成沉淀，过量的钡以EDTA络合滴定，在氯化钡中加入氯化镁用以指示终点。反应方程如公式（1）～公式（3）所示。

经过验证，指示剂变色敏锐，终点易观察，精密度符合要求。

1.2.3 香叶木甙七硫酸酯

美国药典（USP）中的硫糖铝以高效液相色谱法测定无水蔗糖八硫酸酯，从科学的严谨性考虑，多司马酯也应以高效液相色谱法测定，证明甙的硫酸酯结构存在，从而证明多司马酯的正确含量，且含硫酸酯的甙是强阴离子，具有很好的疗效，是有效基团，应予测定。

1.3 研究方法

1.3.1 铝的测定方法

取样品约1 g，精密称定，置200 mL量瓶中，加稀盐酸10 mL溶解后，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取20 mL，加氨试液中和至恰析出沉淀，再滴加稀盐酸至沉淀溶解为止，加醋酸-醋酸铵（pH6.0）20 mL，再精密加乙二胺四醋酸二钠滴定液（0.05 mol/L）25 mL，煮沸3 min～5 min，放冷至室温，加二甲酚橙指示液1 mL，用锌滴定液（0.05 mol/L）滴定至溶液由黄色转变为红色，并将滴定的结果用空白实验校正。每1 mL乙二胺四醋酸二钠滴定液（0.05 mol/L）相当于1.349 mg的铝。根据分子式测算，其铝含量限度理论值为18.37%。

1.3.2 硫的测定方法

取该物品约1 g，精密称定，置烧杯中，加硝酸溶液（1→2）10 mL、水10 mL，缓缓煮沸10 min，加氨试液至碱性后再多加5 mL，煮沸1 min，放冷，移至100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液10 mL逐滴加1 mol/L盐酸溶液至恰呈酸性后，再多加3滴，精密加氯化钡-氯化镁溶液（取氯化钡6 g与氯化镁5 g，加水溶解并稀释至500 mL）10 mL，摇匀，放置片刻，加氨-氯化铵缓冲液（pH10.0）15 mL，三乙醇胺（1→2）5 mL与铬黑T指示剂少量，用乙二胺四醋酸二钠滴定液（0.05 mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白实验校正。每1 mL乙二胺四醋酸二钠滴定液（0.05 mol/L）相当于1.603 mg的硫。根据分子式测算，其硫含量限度理论值为10.92%。

1.3.3 香叶木甙七硫酸酯的测定方法研究

1.3.3.1 预试验

1.3.3.1.1 色谱柱的选择

USP中硫糖铝使用的色谱柱是测糖的专用柱，考虑国内的国情难以借鉴，经过筛选，该文采用十八烷基键合硅胶柱。

1.3.3.1.2 流动相的选择

选择了各种体系的流动相进行试验，根据峰型、分离度以及塔板数等指标，最终选定流动相为乙腈-水溶液（三乙胺0.28 mL/100 mL，冰乙酸调pH约7.5）（15∶85）。

1.3.3.1.3 检测波长的选择

根据该物品在流动相中的UV扫描结果确定最大吸收峰处330 nm作为检测波长。

1.3.3.1.4 样品前处理

根据中国药典测定硫糖铝中铝的含量方法，将该物质用醋酸-醋酸铵缓冲溶液（pH6.0）溶解后，加入过量的乙二胺四乙酸二钠溶液（0.05 mol/L），使铝络合。

拟用的方法：取该物质细粉约50 mg，精密称定，置于50 mL量瓶中，加醋酸-醋酸铵缓冲溶液（pH6.0）8 mL使溶解，必要时可微热或超声处理，再加入乙二胺四乙酸二钠溶液（0.05 mol/L）10 mL，摇匀，加水至刻度，摇匀，作为待测溶液。

该方法可行，但是在试验过程中发现这样处理的样品对色谱柱的损伤较大，多次进样后，色谱峰拖尾严重，因此该文对处理方法进行改进。改为取本品细粉约50 mg，精密称定，置于50 mL量瓶中，加醋酸-醋酸铵缓冲溶液（pH6.0）8 mL使其溶解，必要时可以微热或超声处理，再加入氟化钠溶液（2%）10 mL，摇匀，加水至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为待测溶液。

该方法根据氟化钠在pH5～pH6溶液中与Al3+结合能力比乙二胺四乙酸二钠强，因此将乙二胺四乙酸二钠溶液换成氟化钠溶液络合铝离子。试验证明该方法处理的样品色谱峰对称性较好，拖尾因子小于1.1，保留时间适宜，适合多司马酯的香叶木甙七硫酸酯母环测定（如图1所示）。

图1 多司马酯HPLC色谱图

1.3.3.2 拟定的方法

1.3.3.2.1 色谱条件与系统适应性

色谱柱为十八烷基键合硅胶柱（ODS），规格为4.6mm×250mm，粒径为5 μm。检测波长为330 nm。流动相为乙腈-水溶液（三乙胺0.28 mL/100 mL，冰乙酸调pH约为7.5）（15∶85）为流动相。重复进样相对标准差（RSD）应小于1.5%。理论塔板数按香叶木甙七硫酸酯峰计算应不低于2 000。各组分峰与主峰分离度应符合要求[2]。

1.3.3.2.2 对照品准备

该物品采用中间体，即香叶木甙七硫酸酯的钠盐（C28H25O36S7Na7，分子量为1 322.86）为对照品。对照品的精制方法为甲醇重结晶；质量标准如下：HPLC测定含量为99.0%以上（面积归一化法），有关物质小于0.5%（HPLC），S%为17.0%以上（滴定法）。该物质以C28H25O36S7（分子量为1 161.93）的含量作为质量标准，而对照品用的是香叶木甙七硫酸酯钠盐C28H25O36S7Na7（分子量为1 322.86），因此HPLC测得的是香叶木甙七硫酸酯钠盐的含量，折算成香叶木甙七硫酸酯需乘以0.878（1 161.93/1 322.86）。取无水香叶木甙七硫酸酯钠对照品约15 mg，精密称定，置于25 mL量瓶中，加醋酸—醋酸铵缓冲液（pH6.0）4 mL使其溶解，再加入2%氟化钠溶液5 mL，加水至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

1.3.3.2.3 供试样品制备

取样品细粉约50 mg，精密称定，置于50 mL量瓶中，加醋酸-醋酸铵缓冲溶液（pH6.0）8 mL使溶解，必要时可以微热或超声处理，再加入氟化钠溶液（2%）10 mL，摇匀，加水至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为待测溶液。

1.3.3.2.4 测定方法

分别取对照品溶液和供试品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算供试品中含相当于香叶木甙七硫酸酯钠（C28H25Na7O36S7）的量，再乘以0.878即得。

2 结果

2.1 铝的测定结果

方法学的精密度试验，同一实验员以同一批样品（001）在同一条件下重复测定6次，记录测得结果（见表1），其RSD=0.22%，数据显示该试验方法精密度良好。加样回收率试验，每20 mL样品溶液中添加灼烧至恒重的氧化铝（Al2O3）51 mg，相当于铝27 mg，依法测定6次，测得的回收率结果数据记录见表2，显示平均回收率为99.50%，RSD为0.61%，回收率满足要求且精密度好。

表1 铝含量测定精密度试验结果

表2 铝含量测定加样回收试验结果

经多次试验验证，该方法测定结果精密度、准确度高，显色明显，试验操作简便，速度快，分析成本不高，适合用于多司马酯含量测定。对多个不同批号的样品进行测定，结果见表3。

表3 3批样品铝含量测定结果

2.2 硫的测定结果

方法学的精密度试验，同一实验员以同一批样品（001）在同一条件下重复测定6次，记录测得结果（见表4），其RSD=0.60%，数据显示该试验方法精密度良好。

表4 硫含量测定精密度试验结果

加样回收率试验，每20 mL样品溶液中添加相当于硫32 mg的香叶木甙七硫酸酯，依法测定6次，测得的回收率结果数据记录见表5，显示平均回收率99.64%，RSD为0.61%，回收率满足要求且精密度好。

表5 硫含量测定加样回收试验结果

经多次试验验证，测定硫的方法测定结果精密度、准确度好，显色明显，试验操作简便，速度快，分析成本不高，适合用于多司马酯含量测定。对多个不同批号的样品进行测定，结果见表6。

表6 3批样品硫含量测定结果

2.3 香叶木甙七硫酸酯的测定结果

2.3.1 线性关系考察

精密称取对照品香叶木甙七硫酸酯钠盐39.6 mg于25 mL量瓶中，加适量水溶解后，用溶剂（含醋酸-醋酸铵缓冲溶液（pH6.0）16%，氟化钠溶液（2%）20%的水溶液）稀释至刻度，从中精密吸取1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL及5.0 mL于10 mL量瓶中，用上述溶剂稀释至刻度，进样量20 μL。进样量与峰面积的线性关系见表7，显示线性关系良好。

表7 线性关系考察结果

Y=-100431+164628X

r=1.000

2.3.2 精密度试验

取同一份样品连续测定6次，记录测定结果见表8，显示RSD为0.2%，该方法精密度高。

表8 精密度试验结果

2.3.3 加样回收（准确度）试验

在样品中加入香叶木甙七硫酸酯，使用既定方法测定，测得回收试验结果见表9，显示回收率平均为99.61%，RSD为0.62%，均在可接受范围内。

表9 加样回收（准确度）试验结果

2.3.4 定量限

根据信噪比10∶1为0.21 μg。

2.3.5 稳定性试验

取待测溶液，室温放置8 h，并在该时间段内的0 h、1 h、2 h、4 h和8 h取样测定，显示峰面积变化不大，待测液稳定，见表10。

表10 稳定性试验结果

综上所述，经多次试验验证，该方法测定结果精密度、准确度好，试验操作简便、稳定，适合用于多司马酯含量测定。

2.3.6 样品测定

取3批供试品按照既定方法测定，结果见表11。

表11 3批样品含量测定结果

3 结语

多司马酯用于胃、十二指肠溃疡的治疗，临床需求广泛，其分子量大于2 000，含有多个不同基团，分子结构复杂，使用单一方法难以准确测定并客观描述其含量，该文针对其3个主要特征基团铝、硫和香叶木甙七硫酸酯，采用容量法测定铝、硫，使用高效液相色谱法（HPLC）测定香叶木甙七硫酸酯母环，考察了容量法的精密度、回收率和HPLC法的线性关系、精密度、加样回收率以及稳定性，并对3批样品进行测定。在多司马酯含量测定中，3种方法互相验证，使结果更精确、更客观，达到质量控制更精准的目的。试验结果证明，该方法可行。该文为准确测定多司马酯的含量提供了理论依据。