茶叶中三氯杀螨醇残留量GC 测定的方法验证分析

◎ 肖 伟 ，符秋玉

（1.湖南中益食品化工检测院， 湖南 益阳 413000；2.湖南口味王实业有限公司，湖南 益阳 413000）

本研究依据GB/T 5009.176—2003 标准要求及GB/T 32465—2015《化学分析方法验证确认和内部质量控制要求》，旨在验证该分析方法的系统适用性、标准曲线线性、精密度、回收率、检出限和定量限。可接受的参考标准如下：①系统适用性，各组分之间分离度不低于1.5，溶剂无干扰。②线性R2≥0.995。③加标回收率在80%～110%内。④精密度，在重复性条件下获得的2 次独立测定结果的绝对差值≤算术平均值×10%或RSD ≤10%。⑤定量限与检测限LOD ≤0.016 mg/kg，LOQ ≤0.092 mg/kg。

1 试验部分

1.1 仪器与试剂

仪器：Agilent 气相色谱仪（CN1933A029， 配ECD 检测器）；OHAUS 电子天平（AR224CN）。标准品信息：正己烷中三氯杀螨醇（100 μg/mL，批号A1905311）；苯；石油醚：沸程30～60 ℃；丙酮、硫酸、无水硫酸钠，以上试剂均为分析纯。

1.2 原理

试样中的三氯杀螨醇经提取，其提取液与标准系列同时用酸净化后，用配有电子捕获检测器的气相色谱仪测定，根据色谱峰的保留时间定性，与标准比较定量[4]。

1.3 试验方法

1.3.1 气相色谱条件

毛细管柱Agilent HP-5，30 m×0.32 mm（内径）0.25 μm；柱温240 ℃；进样口温度280 ℃；检测器温度300 ℃；流速1.0 mL/min；分流比10 ∶1；进样量1.0 μL。

1.3.2 标准溶液配置

三氯杀螨醇标准使用液：量取正己烷中三氯杀螨醇溶液（100 μg/mL）标准溶液1.0 mL 至20 mL 容量瓶中，以石油醚稀释至刻度，浓度为5.0 μg/mL。再按照上述标准使用液用石油醚稀释成0.05～1.0 μg/mL的系列溶液，配制三氯杀螨醇标准系列0.05、0.10、0.20、0.50、1.0 μg/mL 分别各取5 mL，加0.5 mL 浓硫酸酸化，振摇1 min，于1 600 r/min 离心15 min，用吸管把上清液分别移入进样瓶中，供气相色谱法测定。

1.3.3 样品检测

①预处理：取具有代表性的茶叶试样100 g，粉碎后混匀称取约5 g 的试样（精确至0.01 g），置于125 mL具塞锥形瓶中，加20 mL 石油醚，于超声波清洗器上振荡30 min，滤入50 mL 具有刻度比色管中，以15 mL 石油醚分3 次洗涤残渣，洗液并入比色管中，将石油醚浓缩，最后以石油醚定容至10.0 mL。②净化：吸取试样提取液5.0 mL 至10 mL 离心管中，加0.5 mL 浓硫酸，盖上盖子。振摇数次后，打开盖子放气，然后振摇1 min，于1 600 r/min 离心15 min，用吸管把上清液分别移入干净具塞试管中(油试样需将上清液浓缩至1.00 mL）。③测定：取上述标准系列溶液及样品浓缩待测液，根据预先设定的方法及标准曲线，依据GB/T 5009.176—2003，采用ECD 检测器进行GC 测定[5]。

2 试验结果与讨论

2.1 系统适用性

选取空白试验（按照样品处理流程处理，不称样）及标准溶液进样，以保留时间定性、峰面积定量，通过色谱图分析计算。其中，空白试验应无干扰，三氯杀螨醇的理论塔板数应＞8 000，结果见表1。

表1 三氯杀螨醇GC-ECD 专属性试验结果表

结果表明，空白试验对待测组分没有干扰，单组分分离度不要求，三氯杀螨醇的理论塔板数符合要求。

2.2 标准曲线线性

移取1.3.2 标准系列溶液分别自动进样测定，记录三氯杀螨醇色谱峰面积，以峰面积为纵坐标，以标准溶液的浓度为横坐标，外标法峰面积定量绘制标准曲线，结果见表2。

表2 三氯杀螨醇GC-ECD 标准曲线线性结果表

结果表明，三氯杀螨醇回归方程：Y=1 134.336 8X+44.468 2，R2=0.996 2；三氯杀螨醇在0.05～1.0 μg/mL 范围内，呈良好的线性关系。

2.3 精密度试验

对本试验室采用空白基底样品加标做待测样的方式测定以确定精密度，取同一批号样品，称取7 份，每份加入相同体积的标液进行提取测定，测得含量见表3。

表3 三氯杀螨醇GC-ECD 精密度试验结果表

以上数据表明，该条件下待测样品的测量精密度符合要求。

2.4 加标回收试验

采用标准回收的试验来确定方法的回收率。准备8 个50 mL 离心管，编号1-12，其中，1-2 号不加标；3-4 号加各标准使用液0.18 mL；5-6 号加标准使用液0.60 mL；7-8 号加各标准使用液1.2 mL。照样品处理制备并测定，计算回收率，结果见表4。

表4 三氯杀螨醇GC-ECD 回收率结果表

以上数据表明， 待测加标样品回收率为82.7%～97.3%，符合要求。

2.5 检出限

方法检出限: 即某方法可检测的最小浓度，通常用外推法可以求得。本试验依据GB/T 27417—2017《合格评定 化学分析方法确认和验证指南》，采用信噪比法评估LOD。一般来说，利用已知低浓度的分析物样品与空白样品的测量信号进行比较，确定可检出的最小浓度，典型的可接受的信噪比是2 ∶1或3 ∶1，即检出限（LOD）：S/N=3±1，定量限（LOQ）：S/N=10±1。在本试验中，依次稀释标准溶液，采用信噪比法来测定仪器的检出限。吸取三氯杀螨醇标准使用液0.10 mL 到25 mL 作为检出限待测液1；吸取三氯杀螨醇标准使用液0.03 mL 到25 mL，作为检出限待测液2；吸取三氯杀螨醇标准使用液0.125 mL到25 mL 作为定量限待测液。经测量，结果见表5。

表5 三氯杀螨醇GC-ECD 检出限和定量限表

由以上数据分析可知，方法检出限：当称样量为5 g，稀释体积为10.0 mL，检出限为0.012 mg/kg，定量限为0.05 mg/kg，符合标准要求。

3 结语

综上所述，本试验室依照GB/T 5009.176—2003，进行系统适用性、线性、精密度、回收率、检出限和定量限验证分析，由各指标结果可知，各项验证指标均符合GB/T 32465—2015《化学分析方法验证确认和内部质量控制要求》及GB/T 27417—2017 《合格评定 化学分析方法确认和验证指南》的要求，表明本试验室具备按照该标准检测茶叶中三氯杀螨醇残留量的能力。