天山堇菜花舔膏提取工艺及质量标准研究

黄丽淑 吾买尔江?伊迪热斯 阿依努尔?吾布力卡斯木 艾克热木江?托合提荪 阿卜杜热西提?麦麦提敏 艾力江?买买提 白克尔?麦麦提尼亚孜古再丽努尔?如则托合提 阿卜力克木?奥布力

【摘 要】 目的：优化天山堇菜花舔膏的提取工艺，建立薄层色谱鉴定方法，为其质量标准研究提供实验室资料。方法：以浸膏得率为主要评价指标，使用单因素考察法和正交实验来选择最佳提取工艺。采用薄层色谱法（TLC）对天山堇菜花舔膏中的天山堇菜花、阿勃勒、新疆圆枣、破布木果等药材进行定性鉴别。结果：天山堇菜花舔膏最佳提取条件为，采用加热回流提取法，溶媒量第一次12倍，第二次10倍，提取时间1h，提取次数2次。结论：所建立的TLC鉴别方法简便，快速，斑点分离度良好，符合药品质量标准要求，可用于天山堇菜花舔膏的质量标准体系。

【关键词】 天山堇菜花舔膏；提取工艺； 薄层色谱（TLC）

【中图分类号】R29   【文献标志码】 A    【文章编号】1007-8517（2024）02-0057-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.02.zgmzmjyyzz202402012

Study on Extraction Technology and Quality Standard of Loki Benafxa

HUANG Lishu Omarjan Idris Aynur Ubulkasim Akramjan Tohtitursun Abdurxit Mamitimin Alijan Mamat

Baker Matniyaz Guzalnur Ruztohti A Bu Li Ke Mu Ao Bu Li*

The Hospital of Traditional Uyghur Medicine in Hotan，Hotan 848000，China

Abstract：Objective Optimize the extraction technology of Loki Benafxa，establish a thin-layer chromatography （TLC） identification method，and provide a laboratory data for its quality standard research.Methods The single factor and orthogonal test were used to optimize the extraction process as the extraction rate was the main index.Qualitative identification of the medicinal materials including Viola tianshanica Maxim.，Cassia fistula L.and Ziziphus jujuba Mill.Var.spinosa （Bunge） Hu ex H.F.Chou was carried out by TLC.Results The optimum extractionconditions were determined to be： extraction times 2 times，menstruum dosage was 12 and 10 times respectively for the first and second time，andextraction time 1 hour under reflux.Conclusion The results showed that the established TLC method is simple and rapid with good separation efficiency，and fulfills the demands of the drug quality standards.It could be used for the establishment of a quality standard system for the Loki Benafxa.

Keywords：Loki Benafxa;Orthogonal Experiment;Thin-Layer Chromatography （TLC）

天山堇菜花舔膏出自維吾尔医药学古籍《卡拉巴丁卡迪日》［1］，维吾尔语中称“罗欧克比乃非谢”，又名清肺止咳舔膏。由天山堇菜花、阿勃勒、破布木果等五味药组成，其主要适用于降低异常胆液质刺激性，调节血液质，消炎，化痰，镇咳。用于治疗慢性支气管炎等病症［2］。在临床上主要以单人单方形式制备使用，但原先制备工艺中存在制备条件模糊，无参数标准，制备过程完全靠制备者经验，没有现代化质量标准等一系列问题。

因此，本文将以浸膏得率为主要评价指标，通过单因素和正交试验对天山堇菜花舔膏的提取工艺进行优化［3］。为确保制剂的安全性与有效性，本文采用薄层色谱法（TLC）［4-5］，对天山堇菜花舔膏中的天山堇菜花、阿勃勒、新疆圆枣等药材进行定性鉴别，为其质量标准研究提供初步的实验室研究资料。

1 仪器与药材

1.1 仪器 JX5001电子天平（上海浦春计量仪器有限公司）；101型电热鼓风干燥箱（北京科委永兴仪器有限公司）；TH-Ⅱ型薄层加热器（上海科哲生化科技有限公司）；EV342旋转蒸发仪（北京莱伯泰科仪器股份有限公司）；VP50真空抽滤泵（北京莱伯泰科仪器股份有限公司）；HB-05加热锅（北京莱伯泰科仪器股份有限公司）；硅胶Ｇ薄层板（青岛海洋化工有限公司，规格：10 cm×10 cm，批号：20220207）；硅胶H薄层板（青岛海洋化工有限公司，规格：10 cm×10 cm，批号：20210203）。

1.2 药材 天山堇菜花（批号：H30297102，新疆麦迪森药业有限公司），阿勃勒（批号：M30173824，新疆麦迪森药业有限公司），破布木果（批号：M30138203，新疆麦迪森药业有限公司）和绿葡萄干（批号：M30266103，新疆麦迪森药业有限公司），新疆圆枣（批号：KXKFZ-YP-210818，新疆新绿宝药业有限公司）。大黄酸对照品（批号：D-202001043，中国食品药品检定研究院）。

2 提取方法与结果

2.1 方法 天山堇菜花、阿勃勒、新疆圆枣和绿葡萄干等药材置圆底烧瓶，以溶媒量、提取时间、提取次数为主要因素，用单因素考察法和正交实验筛选最佳提取工艺。

2.2 正交实验优选提取工艺 在单因素条件的基础上，为了筛选更优选的提取条件，选取溶媒量（A）、提取时间（B）和提取次数（C）三个因素，每个因素3个水品，按照L9（34）正交表实验设计，以浸膏得率为评价指标进行实验。正交试验因素与水平设计见表1，正交试验结果与方差分析结果见表2及表3。

由直观分析结果可知，各因素对试验结果的影响程度为C（提取次数）>A（溶媒量）>B（提取时间），以提取次数影响最大，提取时间的影响最小，各因素的最佳水平为A3B3C3。以提取时间为误差项，对其余三因素进行方差分析。由方差分析结果得出：A、B和C因素对提取效果均无显著性影响（P＞0.05）。根据单因素与正交试验结果以及经济性综合考虑，天山堇菜花舔膏最佳提取选择溶媒量第一次12倍，第二次10倍，提取时间1 h，提取次数2次。

2.3 验证实验 按单因素实验和正交实验筛选出的最佳提取工艺，制备3批样品，测定浸膏得率。结果表明单因素实验和正交实验优选结果可靠，提取后的浸膏得率相对稳定。结果如表4所示。

3 TLC鉴别方法与结果

3.1 天山堇菜花薄层色谱鉴别 取样品50 g，用正丁醇萃取两次，每次30 mL，取正丁醇层，合并，减压蒸干，加20 mL无水乙醇超声溶解，过滤，滤液蒸干，加5 mL甲醇溶解，用0.45 μL微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。按照上述方法准备天山堇菜花阴性对照溶液。取天山堇菜花对照药材（自身对照）5 g，捣碎，加20倍水，回流提取2 h，过滤，滤液蒸干，加30 mL甲醇，超声溶解，过滤，滤液浓缩至2 mL，作为对照药材溶液。照《中国药典》 （2020年版）［5］薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述三种溶液各10 μL，分别点在统一硅胶G板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5∶4.5∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置自然光和紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，无阴性干扰。结果如图1、图2所示。

3.2 阿勃勒薄层色谱鉴别 取样品50 g，用正丁醇萃取两次，每次30 mL，取正丁醇层，合并，减压蒸干，加20 mL无水乙醇超声溶解，过滤，滤液蒸干，加5 mL甲醇溶解，用0.45 μL微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。按照上述方法准备阿勃勒阴性对照溶液。取阿勃勒对照药材5 g，捣碎，加5倍开水，浸泡4 h，过滤，滤液减压蒸干，加30 mL甲醇，超声溶解，过滤，浓缩至5 mL，作为对照药材溶液。取大黄酸对照品配置成1 mg/mL溶液，作为对照品溶液。按照《中国药典》 （2020年版）［5］薄层色谱法（通则0502）试验，吸取大黄酸对照品溶液和阿勃勒对照药材溶液5 μL，阴性对照溶液和供试品溶液10 μL，点在分别点在统一硅胶G板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（6∶3∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热数分钟，置紫外光灯（365 nm）和自然光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的橙黄色荧光斑点。结果如图3、图4所示。

3.3 新疆圆枣的薄层鉴别 取样品10 g，加50 mL石油醚（60～90 ℃）超声40 min，过滤，滤液蒸干，残渣加2 mL甲醇溶解，作为供试品溶液。另取新疆圆枣阴性对照样品和新疆圆枣药材，按上述方法配置成新疆圆枣阴性对照溶液和对照药材容溶液。按照《中国药典》 （2020年版）［5］薄层色谱法（通则0502）试验，吸取对照药材溶液10 μL，阴性对照溶液和供试品溶液12 μL，点在分别点在统一硅胶H板上，以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸（12∶5∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热数分钟，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，无阴性干扰。结果如图5所示。

3.4 破布木果的薄层鉴别 取样品50 g，用正丁醇萃取两次，每次30 mL，取正丁醇层，合并，减压蒸干，加20 mL无水乙醇超声溶解，过滤，滤液蒸干，加5 mL甲醇溶解，用0.45 μL微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。取破布木果对照药材（自身对照）5 g，捣碎，加20倍水，回流提取2 h，过滤，滤液蒸干，加30 mL甲醇，超声溶解，过滤，滤液浓缩至2 mL，作为对照药材溶液。照《中国药典》 （2020年版）［5］薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述三种溶液各5 μL，分别点在统一硅胶GF254板上，以石油醚-乙酸乙酯-甲酸-乙酸（5∶3∶0.2∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同斑点，无阴性干扰。结果如图6所示。

4 讨论

研究通过单因素考察法和正交实验探究了天山堇菜花舔膏的最佳提取工艺，并建立了薄层色谱鉴定方法。在单因素考察法中，发现加热回流提取法和不同溶媒量、提取时间、提取次数等因素对于提取率有着显著的影响。而正交试验结果显示无显著性差异。为此，以单因素结果为准，结合药物生产过程中的经济性，确定最佳提取条件。

此外，研究还建立了薄层色谱鉴定方法，通过对天山堇菜花舔膏中的药材进行定性鉴别［6-9］，可以快速而准确地确认制剂中天山堇菜花、阿勃勒、新疆圆枣、破布木果等药材的存在［10-12］，這对于天山堇菜花舔膏的质量控制具有重要意义。

因本方采用加热回流提取法制备，制剂中水溶性成分较多，且在舔膏剂中含大量蔗糖，从而提高了供试品的前处理难度。为了除去样品中的蔗糖，本试验采用有机溶剂分层法，多次沉淀、干燥、再溶等手段达到除去供试品中蔗糖等杂质的目的。

新疆圆枣（Ziziphus jujuba Mill. Var. spinosa （Bunge） Hu ex H. F.Chou）富含白桦脂酸和熊果酸，可作为药材质量标准研究的特征性化合物［13-14］，研究过程中用白桦脂酸和熊果酸作为对照化合物，尝试建立新疆圆枣的薄层鉴定方法，但在供试品溶液中没有发现相应的斑点，原因可能是天山堇菜花舔膏基于水煎液浓缩制成，而白桦脂酸和熊果酸不溶于水或微溶于水［15-16］，其在供试品溶液中的量很少，不能显现在薄层色谱上。因此，采用自身对照药材来开展制剂的相关薄层研究。

研究［17-18］表明破布木果富含迷迭香酸。以迷迭香酸为标准化合物，尝试建立天山堇菜花舔膏中破布木果药材的薄层鉴定方法，但阴性干扰严重。原因可能是制剂中其它药材也含有迷迭香酸，不能作为破布木果药材的专属化学成分，同样采取药材自身对照法来建立破布木果药材薄层鉴别方法。

天山堇菜花舔膏在中医（维吾尔医）长期治病过程中，广泛用于治疗各种急、慢性支气管炎、不明原因的发热以及各种原因导致的咳嗽等疾病。其治疗效果较好，广受患者青睐。但是，其没有进行过系统的现代药学研究，缺乏工艺和质量标准等方面的研究资料等原因没能批量生产，无法满足临床需求量。本研究能够满足天山堇菜花舔膏在后期生产的工艺参数要求，所建立的薄层鉴定方法可以作为该制剂质量标准体系的一部分，能够为该制剂后期的院内制剂研发以及新药开发提供基础研究资料。

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（收稿日期：2023-04-24 编辑：徐雯）