半抗原
- 抗独特型抗体在半抗原免疫检测中的应用
518118半抗原是一类由于自身分子量过小而无法刺激免疫应答，必须偶联载体蛋白才能刺激机体产生免疫应答的小分子，这类小分子的检测可以广泛应用于多种领域。例如，甾体激素和甲状腺激素半抗原被广泛用于临床诊断［1］；在食品安全和环境保护领域，需要检测水体、植物和微生物中的天然毒素、人工合成的农药和兽药等半抗原［2-3］，这些方面的应用都迫切需要一种能快速准确检测半抗原且对检测人员和检测环境要求低的方法。相对于色谱等传统检测手段，免疫检测更契合这些需求。由于半抗
生物技术进展 2023年5期2023-10-14
- 一种新型拟除虫菊酯类农药半抗原的设计合成及其效果评价
体，而重点在于半抗原的设计合成。一直以来，由于对抗原抗体作用机理以及半抗原空间结构的了解不足，导致半抗原设计具有很大的盲目性，通常需要反复多次的试错尝试，耗费了大量的资金和时间。而且对于非有机合成专业的人员来说，对目标物进行有机修饰或从头合成半抗原，往往非常困难。另外，拟除虫菊酯是一类典型的手性农药，含有多个旋光异构单体，这对于能够识别手性单体的抗体而言，一种菊酯往往是多种物质的混合物，增大了免疫分析的难度。目前针对拟除虫菊酯半抗原的合成主要有全合成在苯环
安徽农业科学 2023年1期2023-02-13
- 广谱性抗体的制备及其在食品安全快速检测中的应用进展
物的混合物作为半抗原,最终免疫制得了能识别32种(氟)喹诺酮类抗生素的广谱性抗体。采用混合抗原法制备广谱性抗体具有简单高效的特点,但存在一些问题,如混合抗原中每种抗原的免疫原性不同,优势抗原往往产生高亲和力的抗体,而免疫原性弱的抗原产生的抗体亲和力较低或丢失[13]。图2 采用混合抗原免疫动物后制备广谱性单克隆抗体Fig.2 Preparation of broad-spectrum monoclonal antibodies by immunizing
食品与发酵工业 2022年22期2022-11-29
- 稻瘟灵单克隆抗体的制备及评价
，合成了稻瘟灵半抗原，并与蛋白偶联制备抗体，通过常规免疫与杂交瘤细胞融合，成功筛选得到特异性识别稻瘟灵的单克隆抗体，并以此为基础建立了稻瘟灵的快速免疫检测方法，为检测试纸条等产品的开发提供了依据。1 实验部分1.1 试剂、材料与仪器弗氏完全/不完全佐剂、牛血清白蛋白（BSA）、卵清蛋白（OVA）、TLC薄层层析板（GF254）、辣根过氧化物酶（HRP）、3，3＇，5，5＇-四甲基联苯胺（TMB）均为Sigma公司产品，稻瘟灵等农药标准品（德国Dr．Ehre
分析测试学报 2022年11期2022-11-18
- 拟除虫菊酯类农药半抗原专利技术分析
建立，关键在于半抗原的涉及和改造，通过适当的化学方法加以适当的修饰，使其分子结构的某个位置上带上端基为活性基团的连接臂，使其转变为带有游离氨基或游离羧基的衍生物，从而与大分子载体相连接，生成半抗原-载体的偶联物，此偶联物即为人工抗原。笔者检索了国内外涉及拟除虫菊酯类农药半抗原设计与合成的发明专利并对申请人、发明内容等进行梳理，以期为拟除虫菊酯类农药半抗原或人工抗原的研究或相关发明专利的挖掘提供参考。1 申请人、申请量特点从申请年度和申请量来看，全球有关拟除
世界农药 2022年8期2022-09-02
- 麦角酸二乙基酰胺人工抗原的制备与初步应用
制备 LSD 半抗原，并连接于牛血清白蛋白（BSA）得到 LSD 完全抗原，并将其作为包被原应用于 LSD 胶体金免疫层析试剂中，建立了 LSD 胶体金免疫层析半定量分析方法，可实现 5 min 现场快速检测。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 主要仪器设备 XYZ 大平台三维感应划膜喷金仪 HM3260 购自上海金标生物科技有限公司；HGS510-1 喷金标机购自杭州峰航科技有限公司；MCE 1202S-2CCN-0 精密电子天平购自德国Sartori
中国医药生物技术 2022年3期2022-06-11
- 吡虫啉人工半抗原合成方法的优化
用于IMI人工半抗原的合成，且应用最为广泛。半抗原从-Cl衍生简单碳链，对吡虫啉的结构改动小，且Cl原子位于分子识别的远端，能使IMI的抗原决定簇充分暴露，合成半抗原的抗体非常灵敏。通过亲和取代反应取代IMI吡啶环上α-Cl这一半抗原合成方法以朱国念等发表的最为成熟。虽然此方法为目前最为常用的IMI人工半抗原合成方法，但也存在很多缺点，如：试验过程中使用高危化学试剂，易造成火灾、半抗原合成过程容易产生较多杂质、免疫后小鼠血清抗体效价低等。本研究旨在减少常规
中国农业大学学报 2022年5期2022-05-17
- 唑吡坦抗原的合成与鉴定
此，研究唑吡坦半抗原的合成方法及唑吡坦免疫检测试剂对于唑吡坦的滥用快速检测非常重要。目前，关于唑吡坦半抗原设计及快速检测的方法尚未见报导，本文主要通过碳二亚胺法合成唑吡坦半抗原并制备唑吡坦（ZOL）免疫检测试剂（胶体金法）。拟为唑吡坦的滥用快速检测提供解决方案，从而服务于全球公共卫生健康事业。1 材料与方法1.1 仪器，试剂1.1.1 仪器精 密 电 子 天 平MCE 1202S-2CCN-0（Sartorius），数显加热恒温磁力搅拌器C-MAG HS7
中国药物滥用防治杂志 2021年3期2021-06-20
- 毒品成瘾的免疫疗法研究进展
蛋白为载体合成半抗原，辅以完全弗氏佐剂，动物实验显示有50%的免疫接种大鼠对可卡因导致的中枢神经系统影响表现出完全的抗药性，且保护程度与抗可卡因抗体的量密切相关。1995年，Carrera等[10]研制出第1种公认可靠的抗可卡因疫苗，以苯甲酰爱冈宁(可卡因甲酯的水解物)为原料，以血蓝蛋白为载体，用标准方法合成了以六碳连接体半抗原，后期Sakurai等[11]还合成了1种用两个酰胺基取代了六碳连接体两个酯基的半抗原，效价更稳定、更有效。接种了可卡因疫苗的老鼠
中国医学科学院学报 2021年1期2021-03-29
- 杀菌剂半抗原的合成及其免疫分析技术的研究进展①
抗体的质量，而半抗原的设计和合成对抗体质量好坏起到决定性作用。因此，本文对杀菌剂半抗原的合成及免疫分析技术在杀菌剂残留检测中的应用进行综述。1 杀菌剂半抗原的合成半抗原的设计要求既要尽可能保留分析物的化学结构，还要尽量减少对分析物的空间构象和电荷分布的影响。下面按照杀菌剂种类不同分别对半抗原合成进行介绍。1.1三唑类杀菌剂半抗原的合成 三唑类杀菌剂是目前生产上广泛应用的一类杀菌剂，具有广谱、高效和内吸性强等优点[17]，其共同结构是主碳链上含有羟基(或酮基
中国免疫学杂志 2020年24期2021-01-26
- 一种滴滴涕胶体金免疫快速检测试纸条的研制
。图1 滴滴涕半抗原合成1.2 方法1.2.1 滴滴涕半抗原的制备取1.7g邻氯苯乙酸，加5mL氯苯，再加入1.8g水合氯醛，加热至完全溶解后，加入三氯化铝5.38g，室温搅拌5h，停止反应，加水80mL和乙酸乙酯120mL，萃取分离，分去水相，有机相无水硫酸钠干燥蒸干，得到黄色油状物，上硅胶柱，石油醚/乙酸乙酯（v/v，1/1）洗脱分离，得到乙酸滴滴涕半抗原产物1.8g，收率43.9%。1.2.2 免疫原的制备—滴滴涕半抗原与牛血清白蛋白（BSA）偶联物
食品安全导刊 2020年28期2020-10-23
- 小鼠CD40胞外片段的原核表达及多克隆抗体的制备
细胞应答小分子半抗原的增强作用，利用TRIzol法提取BALB/c小鼠脾脏总RNA，并反转录成cDNA;根据CD40的胞外段CDS设计引物，通过PCR扩增目的基因，构建pGEX4T-1-CD40表达载体，进行原核表达及多克隆抗体制备。结果表明，成功扩增了522 bp的目的基因，表达并纯化获得了45 ku的CD40重组蛋白，多克隆抗体抗体不但可与重组蛋白结合，与小鼠脾脏天然CD40蛋白也可以特异性结合。说明CD40重组蛋白表达成功，且制备的抗体有望模拟CD4
湖北农业科学 2020年6期2020-07-09
- 鸡肉中金刚烷胺间接竞争ELISA检测方法的建立
疫检测方法时，半抗原的设计与合成是关键步骤，直接决定了制备的抗体质量的优劣[28-30]。报道[20-21]显示半抗原的复杂空间结构和分子极性可能是产生高特异性抗体的关键，氨基的保留与否可能不影响抗体特异性，但大多数抗体表现出低亲和力或对个别药物具有高选择性。本研究通过分析现有的金刚烷胺半抗原及其抗体，设计并制备一种针对金刚烷胺分子特点的新型半抗原，利用产生的金刚烷胺特异性单克隆抗体，拟建立一种与现有检测方法相比更为灵敏、适用性强的间接竞争酶联免疫吸附分析
食品科学 2020年10期2020-06-01
- 甲基苯丙胺疫苗的研究进展
白偶联METH半抗原(MH6)的抗METH疫苗(MH6-KLH)免疫大鼠，可以阻断由METH诱导的体温调节和精神运动，并且减少由METH引起的自发活动；对疫苗组与对照组大鼠的药代动力学研究显示其血清中METH浓度更高，且脑内METH浓度更低，并且每只小鼠中METH的浓度与其自身抗体效价相关。之后研究人员用该候选疫苗接种大鼠模型，发现其能够抑制METH的自我给药，并且在维持期间产生了瞬时的和剂量依赖性的自我给药效应。与对照组比较，MH6-KLH接种大鼠血液中
医学研究杂志 2019年6期2019-12-10
- 以烟草花叶病毒为载体的μE3单克隆抗体的制备及鉴定①
。雌三醇是一种半抗原，在体内通过雌二醇的代谢而产生，其主要是存在于尿液中的一种天然的雌激素，在胎盘中芳构化形成雌三醇[1]。雌三醇在孕妇体内含量的变化与巨大儿和唐氏综合征或爱德华氏综合征等疾病密切相关[2-5]。在孕妇体内未结合的雌三醇浓度非常低，则预示着胎儿存在染色体异常的可能，可能患有爱德华氏综合征或唐氏综合征；而雌三醇异常升高，则增加了孕妇怀有巨大儿的风险，因此雌三醇检测是筛查孕妇胎儿畸形的重要指标，在优生优育中有着重要作用。免疫学方法是利用抗原、抗
中国免疫学杂志 2019年20期2019-11-20
- 杀草丹半抗原及其人工抗原的制备与鉴定
药与三嗪类农药半抗原的设计要点,为获取高质量特异性抗体提供资料参考。Shiro 等[12]合成了一种杀草丹半抗原并制备出单克隆抗体,利用竞争性酶联免疫法对谷物和水质中杀草丹农药残留量进行检测。免疫分析方法的建立,关键技术在于能获取到特异性强的抗体[13]。要实现这一目标,前提条件就得合成制备出合适的人工抗原。杀草丹化学结构稳定,直接进行修饰引入活性基团形成半抗原所需反应条件较为剧烈、苛刻[14]。为使分子结构中氯苯环最大限度的暴露出来,本研究利用乙基羟乙胺
食品工业科技 2019年14期2019-09-11
- 农药吡虫啉酶联免疫检测方法研究进展
进行综述。1 半抗原设计小分子酶联免疫检测方法研究的前提是设计合理的半抗原，再利用半抗原与载体蛋白连接制备完全抗原。吡虫啉分子量为255.7，为一种小分子，其化学结构是通过碳链连接的咪唑环和吡啶环，咪唑环上有一个—NO2，吡啶环上有一个—Cl。这些基团与载体蛋白的连接较困难，需要对吡虫啉分子先进行衍生。在前人的报道中，有6种衍生方法(图1)，分别给吡虫啉分子衍生了易于与载体蛋白连接的—COOH(I[15]、Ⅱ[15]、Ⅲ[16]、Ⅳ[17]、V[16])或
安徽农业科学 2018年12期2018-05-03
- 呋喃西林代谢物半抗原的制备及其免疫检测中的应用
M 衍生制备了半抗原，通过偶联蛋白后免疫小鼠制备了单克隆抗体，其IC50值为31.25 μg/L。任海涛[11]等将4-（4-醛基苯氧基）-丁酸和4-（4-醛基苯氧基）-乙酸与SEM衍生合成半抗原，通过偶联蛋白后免疫小鼠制备了单克隆抗体，其 IC50值为12.37 μg/L。Huang Deng Yu等[12]用4-羧基苯甲醛与SEM衍生制备了半抗原，通过偶联蛋白后免疫小鼠制备了单克隆抗体，其IC50值为0.54 μg/L。现有文献报道合成的SEM半抗原结
现代食品科技 2018年3期2018-04-24
- 克百威人工抗原合成及其免疫应用
性的抗体，包括半抗原设计、人工抗原合成及抗体制备，而半抗原的设计与合成是农药免疫分析的前提、基础和关键。做为典型的小分子化合物，克百威本身不具有免疫原性，同时其结构中不含有可直接偶联的功能基团，需要进行半抗原衍生化或者人工合成。Abad等[9]设计合成4种克百威半抗原(表1)，根据抗体制备和免疫分析结果，确定免疫效果最好的克百威半抗原为4-[〔(2，3-二氢-2，2-二甲基-7-苯并呋喃基氧)羰基〕氨基]丁酸(BFNB)。因而在此后的克百威免疫分析中，多选
西北农业学报 2018年1期2018-01-31
- 基于3种载体蛋白的莱克多巴胺抗原的合成与检测
AC-琥珀酸酯半抗原与3种载体蛋白（BSA、OVA和KLH）偶联合成人工抗原，采用紫外光谱扫描、测定偶联比和ESI-MS进行鉴定；通过免疫小鼠获得抗血清，采用ELISA比较其效价，对3种人工抗原的免疫原性进行评定，结果显示3种抗血清效价为4 000～32 000，表明合成的3种人工抗原都具有免疫原性，其中以KLH为载体蛋白的抗原的免疫效果较好，可用于制备高效RAC抗体。莱克多巴胺；载体蛋白；半抗原；人工抗原；免疫原性莱克多巴胺（ractopamine，RA
广东农业科学 2017年7期2017-11-03
- 西维因人工抗原的合成与鉴定
且带活性基团的半抗原；(2)使半抗原的活性基团与小牛血清及卵清蛋白等载体蛋白偶联制备具有免疫原性和特异性的人工抗原。1 材料和方法1.1 试验试剂吡啶、α-萘酚、N-羟基琥珀酰亚胺、卵清蛋白(OVA)、对硝基苯氯甲酸酯、6-氨基己酸、牛血清蛋白、乙酸乙酯、石油醚、N,N-二环己基碳二亚胺(缩写作DCC)、丙酮、硼酸盐缓冲液、乙醚、磷酸盐缓冲液、H硅胶、盐酸。1.2 试验仪器ZF-1型紫外分析灯，UV-7504型紫外可见分光光度计，Frontier FT-I
山西农业大学学报（自然科学版） 2017年10期2017-10-10
- 三嗪类除草剂免疫分析技术的研究进展
键技术环节,即半抗原及人工抗原的设计合成、抗体的制备以及各种免疫分析技术在三嗪类除草剂检测中的应用,并对目前存在的问题和今后的发展方向进行了讨论。免疫分析技术,三嗪类,除草剂,农药残留三嗪类除草剂(triazine herbicides)自20世纪50年代问世以来,被广泛用作抑制农田中杂草生长的高效除草剂,其分子结构以六元环为主体由三个C和三个N对称排列,所以也可称作“均三氮苯类除草剂”。常见的三嗪类除草剂品种有阿特拉津(atrazine)、西玛津(sim
食品工业科技 2017年16期2017-09-18
- 食品中黄曲霉毒素总量免疫分析方法研究进展
对上述B族AF半抗原分子设计、抗原合成方法及所产生抗体特性进行综合分析,作者认为,肟化活泼酯法效果最优,选择AFB1的2位羰基为活性位点,通过肟化引入活性基团羧基,以单酰胺键为间隔臂合成抗原,该方法操作步骤简单,反应条件温和,产物产率较高;同时,所产生抗体具有效价高(免疫动物易产生抗体)、敏感(IC50为0.066 μg/kg)、特异(100%识别AFB1)、广谱(同时100%识别AFB2)等特性。其次是混合酸酐法和半缩醛法,均是选择AFB2a的3位羟基为
食品工业科技 2017年13期2017-07-31
- 酶联免疫吸附分析法应用于战场水环境TNT检测的可行性研究
造性提出了合成半抗原的3种方法；对应3类半抗原采用不同蛋白偶联方法合成3种人工抗原；分析动物体对TNT人工抗原可产生有效免疫应答并可获得满足ELISA要求的抗血清；样品前处理方法可满足快速检测要求。从理论证明建立TNT的ELISA并满足检测要求的可行性；同时，提出了利用此法检测待解决和优化的問题。关键词：TNT；水环境；酶联免疫吸附分析法；半抗原；抗血清中图分类号：TJ41；X832 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2017）01-0125-
湖北农业科学 2017年1期2017-03-09
- 酶联免疫分析技术在食品检验中的应用
术要点2.1 半抗原的设计多数农药都是小分子物质，本身不对机体产生刺激，并不产生针对农药抗原决定簇的特异性，需与大分子载体产生藕联后才能对机体产生刺激，进而产生抗体。因此，需要合成可与载体藕联，并能最大程度地对待测分析结构进行模拟的半抗原。有学者认为，理想的半抗原应包括待测物特征结构、便于机体对特征结构进行识别的连接臂及末端可与蛋白载体产生共价连接的功能基团[3]。因此，半抗原设计原则为尽可能保留待测物特征结构，并在恰当位置引入合适连接臂及功能基团，方便其
食品安全导刊 2017年24期2017-02-01
- 一种新型可替宁抗原的合成
(S)-可替宁半抗原及人工抗原，并鉴定其是否合成成功。以(S)-可替宁为起始原料，经硝化、还原和羧基化等一系列反应得到(S)-可替宁半抗原，再通过DCC法将半抗原与BSA偶联得到人工抗原；(S)-可替宁半抗原经HPLC-MS结构确认，人工抗原经紫外扫描和免疫学方法鉴定，结果表明目标半抗原及人工抗原合成成功。通过本文的合成方法可以得到活性强、免疫性强的人工抗原。可替宁；半抗原；人工抗原；化学合成；免疫检测(S)-可替宁，化学名为(S)-1-甲基-5-(3-吡
广州化工 2016年22期2016-12-14
- 氯吡脲人工抗原的合成与鉴定
，EDC）法将半抗原分别与牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）和卵清蛋白（ovalbumin，OVA）进行偶联，获得CPPU的免疫抗原（CPPU-BSA)和包被抗原（CPPU-OVA）。采用质谱、元素分析和核磁共振氢谱对CPPU半抗原（CPPU-COOH）的分子结构式进行鉴定；采用紫外光谱和高性能基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱对偶联物的结构和相对分子质量进行鉴定。结果显示成功合成出CPPU人工抗原，为其抗体的制备和免疫学方法
食品科学 2016年21期2016-12-02
- 多效唑人工抗原的合成与鉴定
含羧基的多效唑半抗原。将纯化后的半抗原分别与牛血清白蛋白和卵清蛋白经N-羟基琥珀酰亚胺活泼酯法偶联制备免疫原和包被原。采用质谱、红外光谱、核磁共振氢谱对多效唑半抗原的结构进行鉴定；采用紫外光谱及高性能基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱对偶联物的结构进行鉴定。结果显示成功合成出多效唑人工抗原，为其抗体的制备和免疫学方法的构建奠定了前期研究基础。多效唑；半抗原；人工抗原；制备多效唑（paclobutrazol，PAC）作为一种抑制类的植物生长调节剂，具有延缓植
食品科学 2016年7期2016-11-14
- 直接竞争酶联免疫吸附法测定饲料中沙丁胺醇
。目前沙丁胺醇半抗原的合成多采用酸酐与沙丁胺醇的醇羟基或酚羟基反应形成酯键衍生出含羧基末端的连接臂[13,14]，因此连接臂难以定位，半抗原可能存在不同异构体；半抗原中的酯键不够稳定[20]，特别是在免疫动物制备抗体的过程中，易被动物体内的酯酶降解，难以得到单一高效的抗沙丁胺醇抗体。本实验室采用在沙丁胺醇的酚羟基上通过醚键衍生间隔臂，得到的半抗原(图1)结构单一，稳定性好；采用活性酯法将牛血清白蛋白(BSA)和辣根过氧化物酶(HRP)分别与沙丁胺醇半抗原共
分析科学学报 2016年6期2016-10-16
- 天名精内酯酮多克隆抗体的制备
核加成反应制备半抗原天名精内酯酮缩氨基脲(CN)，使用MS和NMR对其结构进行鉴定；采用戊二醛法将半抗原和载体蛋白牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联，合成天名精内酯酮免疫原(CN-BSA)和包被原(CN-OVA)，采用紫外吸收扫描法、红外光谱法对免疫原及包被原进行鉴定；用制备好的免疫原免疫健康BALB/c小鼠获得天名精内酯酮多克隆抗体，通过间接非竞争ELISA法测定其效价。【结果】 成功制备了天名精内酯酮免疫原(CN-BSA)和包被原(CN-OV
西北农林科技大学学报（自然科学版） 2016年4期2016-06-15
- 孔雀石绿单克隆抗体制备和酶联免疫检测方法的建立
合成1种高质量半抗原。通过偶联载体蛋白、动物免疫和细胞融合， 制备出一株高质量的单克隆抗体MGDA4C7，亚类为IgG1，轻链为κ型。 通过对包被原浓度、抗体浓度、二抗浓度的优化，建立了孔雀石绿间接竞争酶联免疫分析方法。方法半抑制浓度（IC50）为0.96 μg/L，线性检测范围（IC20～C80）为0.1～8.1 μg/L，LOD（IC10）为0.05 μg/L，回归方程y=Symbolm@@ 0.3274lgx+0.4698（R2=0.9891）。 本
分析化学 2016年9期2016-05-14
- 变应性接触性皮炎的免疫机制
，ACD)是由半抗原-特应性T细胞介导、于过敏原接触皮肤后激发产生的迟发型超敏反应(Ⅳ型超敏反应)，以抗原刺激后局部皮肤出现一系列的皮肤炎症细胞浸润、炎症介质释放为主要特征[1]。ACD是目前世界上职业性皮肤病的最大难题之一，据统计约占职业性疾病发病率的20%[2]，这种职业性的接触性过敏不仅存在于产业工人中，也常见于医护人员、银行职员中[3]，在中国ACD的发病率也呈逐年上升趋势[4]。目前，关于ACD的分子机制和细胞通路研究多基于动物模型的接触性超敏反
中华临床免疫和变态反应杂志 2016年3期2016-04-11
- 黄曲霉毒素B1半抗原分子设计与抗原合成及抗体特性研究进展
黄曲霉毒素B1半抗原分子设计与抗原合成及抗体特性研究进展王亚楠1,2,王晓斐3,牛琳琳1,2,雷 壮1,2,张海棠1,2,王自良1,2,*(1.河南科技学院动物科技学院,河南新乡 453003;2.动物病毒病防控与药残分析河南省高校重点学科开放实验室,河南新乡 453003;3.河南科技学院新科学院,河南新乡 453003)本文综述了国内外半抗原分子设计方法、基本要求、应遵循原则、抗原合成方法等方面的研究进展,尤其是对黄曲霉毒素B1(AFB1)半抗原分子设
食品工业科技 2016年23期2016-02-09
- 新型喹乙醇残留标志物人工半抗原的设计及其在动物组织残留检测中的应用
残留标志物人工半抗原的设计及其在动物组织残留检测中的应用白玉惠，王鹤佳，刘智宏*，黄耀凌，徐士新(中国兽医药品监察所，北京100081)为提高酶联免疫方法测定喹乙醇残留标志物(MQCA)的检测性能，设计了一种新型MQCA人工半抗原，该半抗原既完整保留MQCA分子特征性基团和结构，又具有便于和蛋白质载体偶联的基团-NH2。通过三步化学反应合成该半抗原，将其与蛋白质载体偶联成为免疫抗原后，进一步制备特异性抗体,研制了MQCA酶联免疫试剂盒，灵敏度高，特异性好，
中国兽药杂志 2016年2期2016-02-07
- 水胺硫磷半抗原分子的设计及其免疫效果*
计合成了ICP半抗原，并制备了抗ICP多克隆抗体。1 材料与方法1.1 实验材料与仪器1.1.1 主要试剂弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂、牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、3，3'，5，5'-四甲基联苯胺(TMB)，美国Sigma公司;水胺硫磷及其相关标准品，德国Dr.Ehrenstorfer GmbH;羊抗兔IgG-HRP，购于博士德公司;三氯硫磷，西亚试剂公司;二环已基碳二亚胺(DCC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、N，N-二甲基甲酰胺(DM
食品与发酵工业 2015年8期2015-12-25
- 芴完全抗原和多克隆抗体制备与鉴定
键性一步。芴是半抗原，相对分子质量224.26，只具有反应原性，不能刺激机体产生抗体，与载体蛋白偶联，制备完全抗原是制备芴抗体以及进一步建立免疫学检测方法的前提。本实验制备了针对芴的两种完全抗原，并制备出多克隆抗体，以期为ELISA和免疫胶体金试纸条等检测方法的建立奠定基础。1 材料与方法1.1 动物与试剂2 只SPF级6～8 周龄雌性BALB/c小鼠，购于吉林大学白求恩医学院动物实验中心，合格证号为2011-0003，动物使用许可证号为长春生物制品研究所
食品科学 2015年9期2015-12-13
- 一种新的沙丁胺醇人工抗原的合成及单克隆抗体的制备
4-溴丁酸乙酯半抗原合成人工抗原可制备灵敏度高、特异性好的单克隆抗体.【方法】将硫酸沙丁胺醇(SAL)与4-溴丁酸乙酯反应制备半抗原(SAL-HS);通过N-羟基琥珀酰亚胺活化酯法合成免疫原与包被原，用聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外光谱和质谱方法对沙丁胺醇免疫原及包被原进行鉴定.免疫原免疫Balb/c小鼠，采用融合技术产生杂交瘤细胞株，体内诱生腹水法制备单克隆抗体，并鉴定其免疫学特性.【结果和结论】筛选出1株杂交瘤细胞株，其细胞培养上清液效价达1∶128 000
华南农业大学学报 2014年1期2014-09-10
- 半抗原DNP修饰自体肿瘤疫苗治疗晚期恶性黑色素瘤的临床研究
瘤二科临床研究半抗原DNP修饰自体肿瘤疫苗治疗晚期恶性黑色素瘤的临床研究陈殿君 李晓松 赵辉 付艳 胡佳 祁楠 石秀丽 杜楠作者单位：100048 北京 解放军总医院第一附属医院肿瘤二科目的 探讨半抗原二硝基氟苯（dinitrophenyl，DNP）修饰自体肿瘤疫苗在晚期恶性黑色素瘤治疗中的作用。方法 84例Ⅲ期或Ⅳ期可切除恶性黑色素瘤患者随机分为半抗原DNP修饰瘤苗组和半抗原DNP未修饰瘤苗组，每组42例，分别采用半抗原DNP修饰的自体肿瘤疫苗和半抗原D
中国癌症防治杂志 2014年3期2014-04-30
- 小分子半抗原直接包被ELISA用于虾肉氯霉素检测
000）小分子半抗原直接包被ELISA用于虾肉氯霉素检测赛娜1，吴蕴棠1，孙忠1，乌兰图雅2，黄国伟1，*（1.天津医科大学公共卫生学院营养与食品卫生学系，天津300070；2.锡林郭勒职业学院信息技术工程系，内蒙古锡林浩特026000）探讨新型氨基化小分子半抗原直接包被ELISA方法检测食品中氯霉素残留的可行性。采用氨基化氯霉素直接包被在经戊二醛活化后的酶标板表面，并通过生物素-链霉亲和素放大系统进一步提高该检测方法的灵敏度。结果表明，氨基化小分子半抗原
食品研究与开发 2014年18期2014-03-21
- 真菌毒素人工抗原制备方法研究进展
础。真菌毒素；半抗原；人工抗原；制备真菌毒素（mycotoxin）是由真菌（青霉属、曲霉属和镰孢属等）产生的具有毒性的次生代谢产物[1-2]，通过直接污染农产品和食品、饲料，间接污染动物产品（乳、肉、蛋）等方式进入食物链，威胁人类健康安全。目前对农产品和食品污染和危害 较大、检出率较高的真菌毒素主要包括黄曲霉毒素（aflatoxin，AF）[4-5]、赭曲霉毒素A（ochratoxin A，OTA）[6]、伏马菌素（fumonisins）[7]、玉米赤霉烯
食品科学 2014年5期2014-01-19
- 呋喃唑酮代谢物人工抗原的合成及抗体的制备
代谢物结构得到半抗原，采用N－羟基琥珀酰亚胺活化酯法制备了人工抗原，抗AOZ特异性抗体的制备为免疫检测方法的建立与优化奠定了基础。1 材料与方法1．1 材料及主要仪器 AOZ，华南农业大学兽医学院药理实验室合成;对醛基苯甲酸、钯碳、1－乙基3－(3－二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N－羟基琥珀酸亚胺(NHS)，阿拉丁试剂公司;牛血清白蛋白(BSA)、鸡卵清白蛋白(OVA)，上海金穗生物科技有限公司;羊抗兔IgG－HRP、弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂，
中国兽药杂志 2013年6期2013-10-09
- 酶联免疫吸附法检测除草剂异丙甲草胺
草剂作为小分子半抗原物质，不具有免疫原性，需要化学衍生或重头合成合适的半抗原，然后还需化学偶联制备出人工抗原才能免疫动物，除草剂抗体的制备过程较大分子全抗原物质的抗体制备步骤更为繁复，其中半抗原的设计、合成及人工全抗原的制备成为影响除草剂抗体制备、免疫分析方法建立的关键。Schlaeppi等[8]采用重头合成法，经过六步化学反应，获得苯环上带一个羧基的异丙甲草胺半抗原，尽管制备出了抗体，但半抗原合成步骤过于复杂，对生物分析工作者难度较大，不易实施；Feng
食品科学 2013年10期2013-08-07
- 莱克多巴胺人工抗原的合成与鉴定
团的莱克多巴胺半抗原，经碳二亚胺法与载体BSA蛋白偶联制备莱克多巴胺人工抗原，采用紫外光谱扫描法、蛋白质电泳法和胶体金免疫层析法检测偶联物。莱克多巴胺半抗原的结构经气相质谱联用仪确证。结果表明：莱克多巴胺人工合成抗原连接成功，与抗莱克多巴胺抗体有特异性反应，具有抗原性。该方法合成的莱克多巴胺人工抗原结构未见报道、稳定性优越，可作为莱克多巴胺免疫检测方法中包被抗原用于莱克多巴胺检测，也可作为免疫源性抗原用于制备抗莱克多巴胺抗体。莱克多巴胺；半抗原；人工抗原；
食品科学 2013年18期2013-03-06
- 百草枯半抗原分子设计合成及表征
7 Da，属于半抗原，只具有反应原性，而无免疫原性。由于百草枯自身没有可供偶联的活性官能团（如氨基、羧基等），因此，必须对百草枯分子结构进行修饰，使其具有活性基团——羧基，然后与大分子载体蛋白质交联，才能刺激动物产生特异性免疫应答。由于百草枯分子结构中，联吡啶环上两氮原子均连有甲基，不易直接连入带有一段碳连的羧基。为此，作者选取百草枯的结构类似物—4，4’-联吡啶，通过控制反应先在其一侧氮原子上加入甲基，然后再在另一氮原子上连入带有一段碳连的羧基，即为百草
食品与生物技术学报 2013年5期2013-02-19
- 呋喃西林代谢物多克隆抗体制备及酶联免疫吸附分析方法
设计合成的系列半抗原与牛血清白蛋白（BSA）偶联制备免疫原并免疫新西兰大白兔，筛选获得源于新颖半抗原H3的具有高亲和力、高特异性抗SEM多克隆抗体。同时，基于设计合成的系列同/异源包被抗原，考察了不同结构包被原对ELISA灵敏度的影响，发现H4-OVA作为异源包被原建立SEM的ELISA检测方法可获得最佳的检测效果，结果显示：ELISA方法的半抑制浓度（IC50）为12.37ng/mL；定量检测线性范围（IC20～IC80）为0.439～110.78ng/
食品工业科技 2012年5期2012-11-15
- 兔抗MyosinⅩ多克隆抗体的制备及初步应用
；多克隆抗体；半抗原1 材料与方法1．1 动物新西兰大白兔，由北京华阜康动物中心提供，雌性，体重约2k g．1．2 M y oⅩ分子N端多肽抗原的合成参考H i r o s h i T o k u o和M i t s u o I k e b e的报道［10］，根据M y oⅩN端1000～1021氨基酸序列设计并合成多肽作为半抗原，多肽序列为N′－D D D D A F K D S P N P S HE GH S D QR T S－C′．免疫用抗原为C端交
东北师大学报（自然科学版） 2012年1期2012-09-08
- 格列本脲人工抗原的合成与鉴定
基苯甲酸法制备半抗原，将半抗原分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)通过碳二亚胺法偶联制备免疫原(Gli-BSA)和包被原(Gli-OVA)，利用紫外扫描进行抗原的化学鉴定，通过免疫原免疫Balb/c小鼠，间接酶联免疫吸附法测定抗血清进行生物鉴定。结果：制备了Gli-BSA、Gli-OVA的人工抗原，经紫外光谱扫描，偶联比分别为4:1和17.7:1。免疫小鼠后获得抗血清的效价均达到32000以上，半抑制质量浓度为10μg/mL。结论：成功合成了格
食品科学 2012年1期2012-04-01
- 对甲基苯甲酸连接的氯霉素全抗原合成与鉴定
-对甲基苯甲酸半抗原(CAP-MBAⅠ、CAP-MBAⅡ)，再与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备全抗原;通过紫外、荧光光谱扫描定性鉴定合成成功;bradford法结合TNBS法定量计算出全抗原表面半抗原密度(HD)。再将CAP-MBAⅡ与卵清蛋白(OVA)合成包被抗原(CAP-MBAⅡ-OVA)，间接竞争ELISA计算其抑制率。研究结果表明，半抗原全抗原偶联效率优于CAPMBAⅠ，MCB与CAP反应合成的半抗原CAP-MBAⅡ更适合蛋白偶联。采用CAP-MB
食品工业科技 2011年3期2011-11-06
- 两种特异性氰戊菊酯人工抗原的合成与鉴定
，成功合成两种半抗原Fen1和Fen2，并与牛血清蛋白(bovine serum albumin，BSA)偶联合成了两种氰戊菊酯免疫特异性人工抗原Fen1-BSA、Fen2-BSA，经紫外分光光度仪扫描，人工抗原的紫外图谱相对于半抗原和载体蛋白有明显差异，测得偶联比分别约为9:1和10:1，经SDS-PAGE电泳检测表明偶联成功。氰戊菊酯；半抗原；人工抗原；合成氰戊菊酯(fenvalerate，Fen)是拟除虫菊酯类农药的一种，也是目前使用最普遍、蔬菜农药
食品科学 2011年7期2011-10-27
- 新烟碱杀虫剂噻虫嗪免疫学特性研究
,TMX）人工半抗原,采用碳二亚胺法（EDC）将该抗原与牛血清蛋白和卵清蛋白偶联成功制备了分子结合比合理的免疫抗原（TMX-BSA）和包被抗原（TMX-OVA）.对经TMX-BSA免疫的6周龄Balb/c实验鼠的免疫抗血清进行了间接ELISA和阻断ELISA,初步明确了抗噻虫嗪多克隆抗体（TMX-pAb）的免疫学特性,为噻虫嗪残留免疫学快速检测技术开发和检测产品研制奠定了坚实基础.噻虫嗪；单克隆抗体；残留；酶联免疫吸附测定法噻虫嗪（thiamethoxam
河南科技学院学报(自然科学版) 2011年5期2011-06-09
- 孔雀石绿抗原的合成及多克隆抗体的制备
羧基的孔雀石绿半抗原(CMG)，并用液-质联用法进行分析鉴定。半抗原经重氮化法处理后分别偶联两种载体蛋白BSA和OVA，并通过紫外分光光度法进行鉴定。与CMG标准品和两种载体蛋白的紫外吸收光谱相比，偶联物的吸收峰发生了明显的偏移，计算得免疫原的偶联比为10.6:1，说明偶联成功。通过免疫制备多克隆抗体，并通过间接ELISA法对CMG抗血清的效价进行检测，并进一步检测抗体的特异性，两只兔子的IC50值分别为8.1ng/mL和4.6ng/mL。孔雀石绿；抗原；
食品科学 2011年7期2011-04-01
- 中药有效成分半抗原抗体制备技术的研究进展
免疫原性，属于半抗原。由于分子量太小，半抗原结构中含有较少的抗原表位，不能刺激机体产生抗体，故必须和特定的高分子量的蛋白类或多肽结合，形成半抗原-载体复合物(完全抗原)，经动物免疫程序才能制备针对半抗原的特异性抗体。近年来，国内外科研人员在中药有效成分半抗原的抗体制备这一领域做了大量的探索和研究，并开始将中药有效成分半抗原抗体应用到中药现代化领域。本文主要对近年来中药有效成分半抗原的抗体制备过程中的研究情况作一综述。1 中药半抗原的结构特点中药有效成分半抗
中成药 2011年6期2011-02-12
- 大黄素-BSA不同表位构型的免疫原性和特异性研究
散法;大黄素;半抗原-载体偶联法;表位制备抗中药成分抗体,运用抗原抗体检测技术定性或定量测定中药成分,对于鉴定中药材品质和控制中药制剂质量,具有广阔的应用前景。中药的有效或标志性成分,多数是小分子半抗原,须与大分子载体偶联成半抗原-载体复合物,才具免疫原性,方能制备抗体。在制备半抗原-载体复合物时,选择中药小分子成分（半抗原）与蛋白载体连接的偶联方法,决定着半抗原的表位构型,直接影响着其免疫原性和特异性。大黄素为蒽醌类化合物,是蓼科中药材中常见的有效成分和
中国免疫学杂志 2011年5期2011-02-06
- 百菌清人工抗原的制备与鉴定
菌清的衍生物(半抗原)；采用活化酯法与混合酸酐法分别将半抗原与载体蛋白(牛血清蛋白、卵清蛋白)进行偶联，制备百菌清的人工抗原，同时通过免疫新西兰大白兔获得抗血清，用酶联免疫吸附法(ELISA)测定其效价。利用红外光谱(IR)、质谱(MS)、核磁共振波谱(NMR)对百菌清半抗原进行表征，并用紫外扫描的方法对人工抗原进行鉴定。结果表明，成功制备出百菌清半抗原及人工抗原，并且半抗原与载体蛋白的偶联比分别为27.86:1和12.32:1，抗血清效价约为1:1.28
食品科学 2010年13期2010-10-27
- 两种方法制备氟苯尼考人工抗原及其鉴定
法制备两种人工半抗原(HP1和HP2)。将两种半抗原与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)通过活泼酯法和戊二醛法进行偶联，制备人工免疫原和人工包被原，分别命名为HP1-BSA、HP1-OVA、HP2-BSA和HP2-OVA。分别将两种方法合成的人工免疫原用于动物免疫，用两种人工包被原对获得的两种抗血清进行评价。结果：经质谱、紫外光谱表征，氟苯尼考两种半抗原均合成成功，并且与载体蛋白的偶联比分别为12.4:1(HP1-BSA)、8.5:1(HP1-O
食品科学 2010年15期2010-09-13
- T-2毒素人工抗原的制备
有羟基的小分子半抗原，其本身不具有免疫原性，不能像细菌等天然抗原一样可单独用于动物免疫，刺激其产生特异性抗体。因此，获得T-2抗体的关键是将T-2半抗原与蛋白质大分子偶联，转变成 T-2完全抗原。本实验采用琥珀酸酐法制备T-2毒素抗原，即T-2BSA和T-2OVA，预备用来免疫动物以获得 T-2抗体。通过紫外和SDS聚丙烯酰胺电泳分析确定人工抗原的分子量。由于半抗原抗体的特异性不仅取决于半抗原整个分子或部分结构的性质，还与其人工抗原中载体上连接的半抗原数目
化学与生物工程 2010年9期2010-06-05
- 半抗原免疫分析在食品安全检测中的应用
723000)半抗原免疫分析在食品安全检测中的应用张小莺1，赵津子1，陈 琛2，韩水仲1，田泽华1(1.西北农林科技大学动物医学院，陕西 杨凌 712100；2.陕西理工学院 陕西省资源生物重点实验室，陕西 汉中 723000)综述近几年来关于小分子半抗原的设计、人工抗原合成的研究，以及人工抗原合成中尚存在的问题和计算机模拟技术在半抗原合成中的应用；介绍多克隆抗体、单克隆抗体、卵黄抗体及基因工程抗体在食品安全检测中的应用，分析近年来ELISA、胶体金免疫层
食品科学 2010年17期2010-03-23