尿囊
- 绵羊肺炎支原体不同分离株的致病性比较
变化,取死亡鸡胚尿囊液,记录感染组鸡胚死亡率。1.2.6 尿囊液Mo检测 无菌取死亡鸡胚尿囊液,与0.85%生理盐水等体积混合,2 000 r/min离心10 min,取上清按细菌基因组DNA提取试剂盒说明提取DNA,进行PCR检测。根据Mo16S rRNA基因设计引物,上游引物:5′-TGGCAAAAGTCACTAGCACAG-3′,下游引物:5′-ACCTAACATCTCACGACACGA-3′,产物大小258 bp。反应体系为20 μL:2×ESTa
动物医学进展 2023年10期2023-10-24
- 乙状结肠原位新膀胱技术改良与实践(“大家泌尿网”观看手术视频)
成回肠或回结肠储尿囊与尿道的吻合，且乙状结肠较长者可选择乙状结肠原位膀胱术。然而，目前对于最理想的新膀胱类型仍无定论。我中心在长期实践的基础上，通过对比不同肠管及不同方式的原位尿流改道术，认为乙状结肠原位新膀胱术有一定优势[8-9]，因此目前多采用乙状结肠来构建新膀胱储尿囊。理想的新膀胱应能最大限度地接近正常膀胱的生理功能，即要求有合适的容量、储尿期低压、顺应性好、尿控正常、残余尿少、对机体代谢影响小、对上尿路功能具有良好的保护作用等。乙状结肠作为解剖上与
现代泌尿外科杂志 2022年12期2022-12-27
- 一株H1N1病毒的分离鉴定
h后死亡鸡胚的尿囊液。培养72 h结束，取出剩余存活鸡胚，4℃冰箱保存12 h，收取鸡胚液，立即进行红细胞凝集试验。其中，有1份病料在盲传第2代接种时，得到的鸡胚尿囊液可见明显的红细胞凝集，效价为1∶128，对鸡胚进行解剖，胚体出现了水肿和出血点等病理变化，结果见图1、图2。图1 正常对照鸡胚图2 接种H1N1病毒的鸡胚1.2 病毒的克隆与纯化依据有限稀释的方法对分离株病毒进行纯化，用生理盐水将血凝阳性的尿囊液稀释成10-4、10-5、10-6和10-7
中国猪业 2022年4期2022-09-20
- 银耳多糖浸泡肉鸡种蛋对肉鸡鸡胚尿囊膜血管生成、雏鸡生长性能和抗氧化性能的影响
期藏鸡和肉鸡鸡胚尿囊膜上血管生成相关基因VEGF的表达量，促进血管的生成，从而提高血液的运输效率。人类学相关研究也发现，VEGF基因表达量影响血管的发育，而且其基因表达量和血管数量及血管面积成正相关。另外，机体的生长发育是由生长激素及其受体GHR调控的。GHR广泛分布于全身，在肝脏中含量最高，其通过与靶器官上的受体结合诱导产生IGFs，进而调节机体的生长发育。研究发现，蛋内注射IGF-1可显著提高鸡胚胎期的胸肌和腿肌的生长发育和出雏后的饲料转化率。银耳多糖
江苏农业科学 2022年15期2022-08-11
- 一种H9 亚型禽流感病毒的临床鉴定方法
毫升/胚的剂量经尿囊腔途径接种10 日龄SPF 鸡胚。 置36℃～37℃恒温恒湿箱内培养。 每日照蛋，弃去24 小时内死亡的鸡胚。取培养48～72 小时的死亡以及存活的所有鸡胚，每胚取样测定红细胞凝集价。2.2 病毒含量测定将收集的鸡胚尿囊液用无菌PBS 作10 倍系列稀释，取10-7、10-8、10-93 个稀释度，分别经尿囊腔内接种10 日龄SPF 鸡胚5 枚，0.1 毫升/胚，置36℃～37℃培养，24 小时以内死亡的鸡胚弃去不计，24～120 小时
北方牧业 2022年22期2022-02-14
- 日本鹌鹑胚胎发育的形态学特征
织的羊膜、浆膜、尿囊膜发生了急剧的组织形态学变化，以适应不同发育阶段胚胎的变化和营养物质吸收进入胚体。胚胎外组织的形态学变化过程相对恒定，并且对应于胚胎正常发育的特定阶段，对应于其在蛋壳的特定分布区域。这个特性被利用于鸡鸭鹅等家禽的人工孵化作业中，在孵化的特定时间点通过“照蛋(Candling)”的工序，观察胚蛋表面的血管分布以及胚胎投影变化和内容物透光情况，以了解胚胎发育情况[1-2]。同时，禽类胚胎是发生学研究比较热门的材料，尤其胚体外的绒毛尿囊膜(C
中国兽医杂志 2021年8期2022-01-17
- 神经型犬瘟热病毒鸡胚培养实验
采用卵黄囊接种和尿囊腔接种的方法。1.2.3 胚液提取方法弃去48h内死亡鸡胚，将接种5天后未死亡鸡胚放入冰箱冻死。将收获的鸡胚从冰箱取出，在无菌环境下提取胚液。按照75%酒精—碘酒—75%酒精的顺序消毒蛋壳，再用镊子打开鸡胚气室，撕开气室膜和尿囊腔膜使用注射器吸取胚液，将胚液置于干净抗生素瓶中，放于冰箱冷藏保存。1.3 实验设计第1~3批采用的是卵黄囊接种不同剂量研磨液。第1批中，将培养出来的正常的鸡胚，随机编号分组，分别接种0.1mL、0.15mL、0
湖南畜牧兽医 2021年3期2021-07-20
- 日粮中添加NCG对妊娠前期鄂尔多斯细毛羊血液、尿囊液和羊水中氨基酸浓度的影响
提高母羊子宫液和尿囊液中Arg和瓜氨酸含量，改善胚胎存活率。Lassal等[11]研究多胎母羊灌注Arg试验发现，出生羔羊死亡率降低23%，羔羊存活率增加59%，四胞胎出生体重提高23%。目前，国内外关于NCG对母羊妊娠前期营养调控方面的研究鲜有报道。因此，本试验在日粮中添加不同剂量的NCG，研究NCG对妊娠前期鄂尔多斯细毛羊血液、尿囊液和羊水中氨基酸浓度的影响，为鄂尔多斯细毛羊妊娠期繁殖性能的提高提供科学依据。1 材料与方法1.1 试验动物选择体况良好，
家畜生态学报 2021年1期2021-01-07
- 鸡传染性支气管炎病毒分离与鉴定
2.3 传代鸡胚尿囊液的血凝检测结果分析1%鸡血红细胞与收取每代鸡胚尿囊液做血凝实验,反应均呈阴性,每代鸡胚尿囊液均不能使鸡外周血红细胞发生凝集。这表明鸡胚尿囊液中不含有其他能使鸡外周血红细胞凝集的病毒。2.4 传代鸡胚尿囊液的荧光PCR 检测结果分析尿囊液PCR 检测结果显示IBV 阳性,其余能检测到其他病毒均为阴性,诊断该病造成的感染由鸡传染性支气管炎病毒所至[3]。2.5 鸡胚病变情况病料除菌接种鸡胚后,24h 内无鸡胚死亡。存活的鸡胚病变情况表现为
中国畜禽种业 2020年9期2020-12-16
- 某种鸡场传染性喉气管炎病毒的分离与鉴定
与鉴定，鸡胚绒毛尿囊膜接种、琼脂扩散试验和PCR鉴定结果显示，该种鸡群发病为ILTV感染。1 材料与方法1.1 材料与试剂 PCR引物由英潍捷基(上海)贸易有限公司合成；EasyPure Viral DNA/RNA Kit提取试剂盒、PCR反应试剂盒、2 000 bp Marker、琼脂糖、TAE，均购自北京全式金生物技术有限公司。ILTV标准阳性血清，购自中国兽医药品监察所。ILTV疫苗株作为阳性对照，购自英特威公司，批号为94150010，有效期至20
中国兽医杂志 2020年7期2020-12-08
- 2株鹌鹑H9N2亚型流感病毒的分离鉴定
2日龄SPF鸡胚尿囊腔，每一样品接种5枚鸡胚。于37 ℃、56%湿度条件下在孵育箱中孵育2～3 d。弃去24 h内死亡的鸡胚，收集24～72 h的鸡胚尿囊液。收获的尿囊液分别滴3～4滴于大孔塑料版的不同孔中，加等量的1%鸡红细胞，摇匀后静置于4 ℃ 30 min观察结果，如出现血凝，则可进一步测定血凝滴度并鉴定。如血凝阴性，按上述方法盲传3代，如仍为阴性，则弃之。1.2.3 病毒初步鉴定 采用血凝(HA)与血凝抑制(HI)试验。对具有血凝性的病毒，分别与新
中国兽医杂志 2020年4期2020-09-28
- 上海地区猪流感病毒的分离与鉴定
日龄SPF鸡胚，尿囊腔接种0.2 mL/枚，每份样品接种3枚鸡胚，37 ℃培养72 h，弃去24 h内死亡的鸡胚，收集剩余未死或死亡鸡胚的尿囊液，并经SPF鸡胚盲传2代。1.2.3 病毒鉴定血凝素凝集试验：对收获的第一代细胞上清液、第二代和第三代鸡胚尿囊液进行血凝素凝集试验。第六项工作是课程评价。在课程评价时，须注意处理好过程与结果、个人与小组、规范与创新、阶段与整体几对关系。病毒电镜观察：将血凝阳性的第三代病毒尿囊液液经0.22 μm微孔滤膜过滤处理，送
畜牧与兽医 2020年7期2020-07-13
- 基于新城疫活疫苗LaSota研究血凝试验影响因素
可用HA试验检测尿囊液中病毒是否具有血凝性，在HA试验结果基础上可以进行血凝抑制试验，进而明确该养禽场的新城疫抗体水平。HA试验具有操作简便、快速和实用性强等特点，但影响因素较多[4]。涉及1%红细胞悬液的保存时间、抗凝血在4 ℃保存时间、抗原冻融次数、冻融的抗原在4 ℃保存时间、不同稀释液对HA结果的影响，延长1%红细胞悬液的保存时间等问题。为了减少影响因素的干扰，同时也为实际操作提供参考建议，本文对HA试验上述诸多影响因素进行了研究。1 材料与方法1.
畜牧与兽医 2020年6期2020-06-08
- 减蛋综合征病毒（EDS76）的分离和鉴定
处理好的病料，经尿囊腔分别接种10日龄鸭胚，0.2 mL·胚-1，每个样品接种5枚，置37℃孵育观察。1.2.3 胚液收获及传代孵化至96 h取出，置4℃冰箱过夜，收取尿囊液。将收获的鸭胚尿囊液接种10日龄鸭胚，继续盲传2代，对于有凝集效价的样品，继续传代到10代。1.2.4 血凝实验（HA）对每次收获的鸭胚尿囊液进行血凝实验，按《兽药典》血凝实验方法进行。1.3 病毒分离株（E10代）免疫学试验鉴定1.3.1 琼脂扩散实验（AGP）将含病毒鸭胚尿囊液，3
饲料博览 2020年2期2020-04-21
- 鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定
SPF 鸡胚，在尿囊腔中注入0.1ml/胚。观察鸡胚死亡情况，舍去一日内死亡的鸡胚，对1～6d 内死鸡胚进行打蛋观察鸡胚的病变[1]。无菌条件下收集1～6d 内死鸡胚的尿囊液，接种10 日龄SPF 鸡胚20 枚，连续传3 代，再传至10 代进行备用。分离第3 代毒尿囊液，用肌肉注射的方式接种20 只SPF 鸡，0.1ml/只，观察SPF 鸡的发病率和死亡率，对死亡鸡进行剖检并观察病理变化。2.2 毒价测定第3 代分离毒尿囊液用经灭菌后的生理盐水依次作10
中国畜禽种业 2019年11期2019-12-27
- M蛋白携带TC标签的重组新城疫病毒的构建及生物学特性鉴定
种9 日龄的鸡胚尿囊腔，72 h 时收集尿囊液采用红细胞凝集试验(HA)[8]检测其HA 效价。收获HA 效价高于4 log2 的尿囊液，提取其RNA，采用引物M5155/M6915 进行RT-PCR 扩增并测序。获得的病毒命名为LaSota-M-CTC，分装后-70℃冻存。1.6 La Sota-M-CTC 的纯化 采用有限稀释法纯化拯救病毒。用PBS 将La Sota-M-CTC 10 倍倍比稀释，将其中10-7～10-9共3 个稀释度的尿囊液分别接种
中国预防兽医学报 2019年8期2019-10-10
- 3 型鸭病毒性肝炎的诊断与病毒的分离鉴定
滤,并将滤过液经尿囊腔接种10 日龄易感鸭胚10 枚,0.2 mL/枚,置37 ℃孵化器孵育,记录鸭胚死亡情况,收获48 -144 h 死亡鸭胚的尿囊液,并进行无菌检验。将无菌检验合格的尿囊液,按同样方法接种鸭胚盲传2 代,即获得第3 代尿囊液。1.6 病毒纯化 使用终点稀释法对病毒进行纯化[5]。具体方法如下:将第3 代尿囊液用无菌生理盐水做10 倍系列稀释,取10-3、10-4和10-5三个稀释度,每个稀释度经尿囊腔接种10 日龄鸭胚5 枚,0.1 m
中国兽医杂志 2019年12期2019-06-17
- 金银花等多味中药对鸡胚中新城疫病毒复制的抑制效果研究
各试验组所有鸡胚尿囊液，按微量凝集法检测每组鸡胚尿囊液内病毒的血凝效价。记录各实验组尿囊液血凝价，并计算其平均值。2 结果2.1 各试验组鸡胚死亡情况实验结果表明黄芩对病毒复制抑制效果极显著，金银花和板兰根的抑制效果次之，连翘最差（见表1）。2.2 不同中草药对鸡胚尿囊液中NDV血凝效价的影响结果显示，尿囊液中的病毒含量显著低于强毒组表明金银花、板兰根、黄芩和连翘对病毒的复制都有很强的抑制作用（见表2）。3 小结实验结果能够表明中草药在阻断病毒的吸附、穿入
新农民 2019年36期2019-03-05
- H9亚型HP株禽流感病毒繁殖规律的探索
不同死亡时间段的尿囊液效价进行测定，以期探索该毒株在非免鸡胚中的繁殖规律，得出鸡胚的最佳培养时间和尿囊液收获时间，最大限度提高单位体积尿囊液中的病毒含量，为制备高效疫苗提供数据支持。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 病毒 禽流感病毒（H9亚型HP株）种毒代次F2，批号DZ20140306，由福州大北农生物技术有限公司提供。1.1.2 试验动物 非免鸡胚，由扬州康威提供，福州大北农生物技术有限公司进行孵化至10日龄。SPF鸡胚，山东济南斯帕法斯SPF鸡场
福建畜牧兽医 2019年1期2019-02-25
- H9N2亚型禽流感疫苗株的筛选
接种鸡胚后收集的尿囊液的病毒含量进行测定。将尿囊液作10倍系列稀释，取10-7、10-8、10-93个稀释度，尿囊腔内接种于10日龄SPF鸡胚，测定各鸡胚尿囊液的凝集效价。根据尿囊液HA测定结果按Reed-Muench法计算鸡胚半数感染量(EID50)[7]。1.5 病毒的纯化 选择HA效价较高(HA>29)的4株病毒，分别进行5轮有限稀释纯化(10-5-10-9)，将纯化好的上述病毒尿囊液分别按10-5稀释后，接种9～11日龄SPF鸡胚(0.2 mL)1
中国兽医杂志 2017年11期2018-01-11
- 一起蛋鸡滑液囊支原体病的诊断
日龄SPF鸡胚，尿囊腔途径接种2枚，绒毛尿囊膜途径也接种2枚。每6h照胚1次，24h内死亡鸡胚弃去，其它鸡胚每日观察，鸡胚死亡则分别收取尿囊液和绒毛尿囊膜，120h还未死亡胚，置4℃冻死，同法收胚，分别收取鸡胚尿囊液和绒毛尿囊膜悬液。尿囊液用来做血凝试验(HA)并提取RNA，绒毛尿囊膜悬液反复冻融三次后8000r/min×10min，吸取上清500µl提取DNA。剖检鸡体的同时取病变较明显的喉头和腿部积液置于不含有抗生素的PBS(pH7.2)中，4℃过夜后
山东畜牧兽医 2017年11期2017-11-29
- 禽流感病毒（H9亚型）LN株的分离鉴定及生物学特性研究
m微孔滤器除菌，尿囊腔接种10日龄非免疫鸡胚。每份病料接种8枚鸡胚，每枚鸡胚接种0.2 ml，同时作不接种对照，37℃孵育。弃去24 h内死胚，无菌收集48 h的鸡胚尿囊液，-40℃保存备用。病毒分离后需要在SPF鸡胚上进行3次终点有限稀释克隆纯化，即每一次均取最高稀释度有血凝价鸡胚尿囊液作为下一次传代纯化的种毒，如此经三次纯化后，以10-3稀释接种9～11日龄SPF胚，48小时后收取鸡胚尿囊液，经菌检证明无污染，分装于小管中作为种毒贮存于-70℃。（二）
兽医导刊 2017年7期2017-04-19
- 孵化条件不当对孵化效果的影响
贫血、心脏肥大和尿囊充血等状况。（2）温度偏高对孵化效果的影响。温度偏高若发生在尿囊合拢之前，会促进胚胎的生长发育；若发生在尿囊合拢之后，却会抑制胚胎的生长发育。若温度偏高发生在孵化的前两天，在孵化的第5～6天会出现胚蛋粘壳现象；若温度偏高发生在孵化的第3～5天，尿囊会提前合拢；若温度偏高发生在孵化后期，并长时间作用，则会提早出壳时间。幼雏未完成收脐就开始出壳，导致出雏持续时间变长，破壳后的死亡率提高。解剖会发现蛋壳中残留有还没有被利用的浅黄色的黏稠蛋白，
当代畜禽养殖业 2017年9期2017-04-13
- 鸡传染性支气管炎实验室诊断技术
。经典方法是通过尿囊腔途径接种鸡胚，37℃培养48～72h，取出部分尿囊液进行血清学或分子生物学检测，其余鸡胚继续培养6～7d，观察侏儒胚变化。初次分离的病毒往往需要盲传3～5代或以上才能出现明显和有规律的鸡胚矮小化现象。若为阳性，需进一步通过病毒理化特性、病原性和抗原性检测进行鉴定。1.2 干扰试验鸡传染性支气管炎病毒在鸡胚中能干扰鸡新城疫病毒产生血凝素，且这种干扰作用可以被同型特异抗血清所抑制，特异性强，敏感性强，操作简便。具体做法是：取9～11日龄鸡
兽医导刊 2017年6期2017-04-04
- 奶牛子宫积液的病因分析和诊疗方法
宫积液的10%。尿囊积水的情况更加常见，并且经常伴随着以胎盘子叶数量减少和不定形胎盘形成为特点的异常胎盘形成（子宫内膜与尿囊绒毛膜之间的多处粘连，表现为胎盘子叶缩小）。因此，通常认为尿囊积水是母体胎盘形成异常而导致的情况，而羊水过多则更倾向于胎儿异常。尿囊积水经常会导致动物腹部急性（几天至几周）扩张，此时从患畜身后可看到其腹部滚圆，而羊水过多一般导致腹部缓慢变大，最后呈梨形。双胞胎或多胞胎与尿囊积水关系较为密切，胎儿异常与羊水过多常常伴发。营养缺陷也可能导
黑龙江动物繁殖 2017年2期2017-02-28
- 膀胱尿囊囊肿破裂合并脐膨出1例
30006)膀胱尿囊囊肿破裂合并脐膨出1例刘小丽，周爱云 (南昌大学第一附属医院超声科，江西 南昌 330006)膀胱尿囊囊肿；脐膨出；超声检查，产前患者女，27岁，孕5产1，孕18+2周常规产前超声检查于胎儿下腹部脐下方探及约3.9 cm×3.9 cm囊性回声团，边界清晰，内透声好，该囊性回声团经一宽约0.52 cm交通口与盆腔内膀胱想通，呈“哑铃状”，凸向腹壁外；CDFI可见左、右侧脐动脉沿膀胱两侧走行，并包绕该囊性回声团，脐动脉于该囊性回声团顶部入脐
中国介入影像与治疗学 2017年12期2017-01-14
- 潍坊地区鸡场禽腺病毒分离鉴定
接种鸡胚后，提取尿囊液DNA，使用腺病毒特异性引物扩增出片段，并在NCBI上比对与I群腺病毒IV型相似度最高。因此诊断为腺病毒感染引起。本报道确诊了腺病毒在该地区养殖场中流行情况，给该病毒的预防和治疗提供理论依据。禽腺病毒(Fowl Adenovirus, FAV)根据群特异性抗原的不同分为三个群，I群禽腺病毒(Fowl Adenovirus Group I, FAVI)具有共同的群抗原，包括传统的禽腺病毒及其它禽类分离物，共12个血清型，代表株为鸡胚致死
山东畜牧兽医 2016年12期2016-04-06
- 奶牛子宫积水的诊治
可分为羊膜积水、尿囊积水，也有胎儿积水，常在奶牛妊娠的后3个月发生。奶牛子宫积水的诊断方法有直肠检查或腹部超声检查，有多种治疗方案可供选择，如手术疗法、激素疗法及对症治疗等。1 病因奶牛子宫积水或水肿作为一种散发性疾病，通常发生在妊娠后3个月。羊膜积水是由于胎儿畸形阻碍了胎儿对羊水的吞咽或者妨碍了羊水在肠道内输送，这种情况约占子宫积水病例的10%。尿囊积水是更为常见的情况而且经常伴随有胚胎畸形，其特点是胚胎块和外膜胎盘数量的减少(在子宫内膜和尿囊绒毛膜之间
黑龙江动物繁殖 2016年5期2016-03-10
- 鸡新城疫病毒抗原制备参数优化相关性研究
种培养因素对鸡胚尿囊液收量和血凝效价的影响。试验选择 9、10、11 日龄非免疫鸡胚以3个接种剂量分别接种NDV Lasota株病毒液于鸡胚尿囊腔中。结果表明，选用10日龄鸡胚接种剂量为0.1ml／枚时获得尿囊液量和血凝效价为最高。新城疫病毒 鸡胚尿囊液 接种剂量 血凝效价新城疫(Newcastle disease, ND)是威胁养禽业发展的一种重要传染病，给养禽业造成巨大经济损失，OIE将其与高致病性禽流感一起列为危害养禽业必须报告的疫病，该病在我国时有
山东畜牧兽医 2015年7期2015-11-23
- 一例鸡传染性喉气管炎病毒的分离鉴定
料,接种鸡胚绒毛尿囊膜进行痘斑检查和琼脂扩散试验。结合临床、剖检和实验所得的结果可确认该病原为传染性喉气管炎病毒,并提出相应防治措施。鸡传染性喉气管炎病毒;分离;鉴定1 送检病鸡2014年1月江苏金坛某农户送至动物医院发病死亡鸡，通过问诊，可知鸡场饲养近900只鸡，死亡40只，有出现张口呼吸，发病率不高，每日均可见10～20只鸡出现张口呼吸，咳嗽。2 临床症状和剖检症状发病鸡主要表现为精神沉郁、食欲不振、伸颈张口呼吸、咳嗽，产蛋下降。剖检鸡只可见喉头气管黏
兽医导刊 2015年16期2015-08-11
- 大型生物制药厂的病毒鸡胚培养
型生物制品厂采用尿囊腔接种法培养病毒液用于生产疫苗，生产实践早已证明，种蛋的质量、抗原生产工艺对生成尿囊液量及其效价高低起决定作用，直接影响产品质量和鸡免疫后的抗体水平。本文结合某些大型兽用生物制品企业生产案例，对病毒鸡胚培养进行阐述。疫苗生产；鸡胚培养法；尿囊液量；病毒含量近年来灭活苗的应用越来越广泛，对禽病的防制也起着越来越重要的作用。虽然组织培养和生物工程技术的发展很快，但是鸡胚培养技术仍因其来源充足、操作简单和投入少等优点被广泛地用于病毒的分离、鉴
当代畜禽养殖业 2015年10期2015-03-22
- 海兰褐蛋鸡痘病毒的分离与鉴定
龄SPF鸡胚绒毛尿囊膜(CAm)，采用侧面“开天窗”法，共接种15枚，每胚接种0.2ml；同时设置6枚接种等量生理盐水作为对照。连续观察一周，观察胚的死亡情况及死亡鸡胚绒毛尿囊膜变化，弃去24h以内的死亡鸡胚，收取死亡和未死鸡胚的绒毛尿囊膜。将绒毛尿囊膜病料处理，继续接种9日龄SPF鸡胚，盲传3代。1.5 病毒的鉴定 病毒的PCR鉴定。（1）PCR引物设计：鸡痘病毒引物根据GenBank已发表序列用Primer Premier 5.0软件设计并由英潍捷基生
山东畜牧兽医 2015年1期2015-03-18
- 鸡新城疫的症状与实验室诊断
鸡胚，接种于绒毛尿囊膜或尿囊内。照蛋，划出气室位置，在鸡胚胎面观看胚胎活动，选择无大血管处标一记号。在气室顶部和标记处用碘酊和酒精消毒，并各钻一小孔。用较干的碘酊棉球涂布小孔。用1 mL注射器吸取上述处理过的材料，插入小孔内约3mm，缓缓注入0.1～0.2mL，拔出针头。用融化石腊封口，在蛋壳上标明日期。置37℃温箱培养，每天照蛋二次，至全部或大部分鸡胚发生死亡为止(24h内死亡的胚弃之)。将死胚收藏于4℃冰箱内，气室向上，6～24h获尿囊液。收获尿囊液时
现代畜牧科技 2015年4期2015-03-02
- 改良式乙状结肠直肠储尿囊术的临床效果评价
式乙状结肠直肠储尿囊术的临床效果评价张长胜，孙天明，党乾元，苟成毅，张志鹏，曲小勇，高永峰(定西市人民医院泌尿外科，甘肃定西 743000)目的 评价改良式乙状结肠直肠储尿囊术的临床效果。方法 1992年2月至2014年6月，对48例肌层浸润性膀胱癌患者行根治性膀胱全切，在原Mainz膀胱Ⅱ式手术基础上进行可控尿流术式，即改良式乙状结肠直肠储尿囊术。结果 术后随访3个月到5年结果显示： B超检查34例患者有单侧肾盂轻度扩张2.5 cm，排尿稳定可控，最大容
现代泌尿外科杂志 2015年3期2015-02-23
- 输尿管回肠储尿囊吻合口狭窄的腔内治疗
1）输尿管回肠储尿囊吻合口狭窄是根治性膀胱全切回肠代膀胱术后常见并发症之一，可致进行性肾功能损害和上尿路感染。2011～2014年，我们采用经皮肾顺行输尿管软镜联合经回肠储尿囊输尿管镜逆行狭窄扩张加支架置入术治疗输尿管回肠储尿囊吻合口狭窄的积水肾共13例，效果满意，现报告如下。1 资料与方法1.1 一般资料 根治性膀胱全切回肠代膀胱术后输尿管回肠储尿囊吻合口狭窄患者9例，男7例，女2例，均无放疗病史，年龄42～73岁；4例为双侧，5例为单侧，狭窄共13处，
现代泌尿外科杂志 2015年9期2015-02-20
- 一株GPV的分离鉴定及致病性研究
经常规处理后，经尿囊腔接种发育良好的12日龄鹅胚，0.2 mL/枚，10枚/组。对照组接种无菌生理盐水。37 ℃培养，每隔8h观察鹅胚生长情况。去除24 h内死亡的鹅胚，无菌收集24 ～120 h之间死亡鹅胚尿囊液，冷冻保存备用，并连续传5代。1.8 雏鹅回归试验检测无母源抗体的1日龄雏鹅，随机分为2组，10只/组。第1组肌肉接种分离毒株尿囊液；第2组接种生理盐水作对照组，0.2 mL/只。两组雏鹅均分别隔离饲养观察。1.9 分离毒株电镜观察取出现病变的鹅
家畜生态学报 2014年1期2014-09-01
- IBD毒株的卵黄培养方法研究
次分离以鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)接种为首选，卵黄囊接种次之。本试验将经CAM驯化的鸡胚适应毒转卵黄囊(Yolk sac)驯化培养，培养结果显示卵黄囊接种的方法，CAM、胚体及尿囊液混合物中的病毒含量高于CAM接种方法的病毒含量，提示该接种方法可用于规模化培养。IBDV毒株 卵黄培养 病毒含量 产量鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)能在鸡胚上生长增殖，Hitchner[1]证明9～11日龄鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)是分离病毒最敏感的接种途径，感染的鸡胚通常在3～
山东畜牧兽医 2014年6期2014-05-06
- H9N2亚型猪流感病毒的增殖及毒力测定
养方法，其中鸡胚尿囊腔接种法是目前最常用的病毒增殖方式。本研究采用鸡胚尿囊腔增殖法对试验用H9N2－SIV毒株进行增殖，在病毒增殖后进一步测定其对鸡胚和小鼠的毒力。1 材料和方法1.1 材料1.1.1 病毒和主要试剂H9N2亚型猪流感病毒A／swine／HeBei／012／2008 （H9N2） （H9N2－SIV）由本课题组分离，经中国农业科学院哈尔滨兽医研究所鉴定，河北北方学院动物科技学院预防兽医学实验室保存。其他试验药品均为分析纯，试剂由课题组自配。
河北北方学院学报（自然科学版） 2013年6期2013-11-29
- 抗菌肽对蜜蜂细菌性病原的抑菌作用研究
0 min后，经尿囊腔接种活力旺盛的9日龄鸡胚5枚，0.2 mL/枚，37 ℃培养。同时设正常鸡胚对照。无菌收集尿囊液，并盲传5代。1.4 分子病毒学鉴定1.4.1 引物设计根据CSBV广州株基因组序列（GenBank登录号：AF469603）设计扩增CSBV-CQ编码序列的引物。引物由生工生物工（上海）有限公司合成。引物序列见表1。1.4.2 总RNA的提取表1 用于CSBV RT-PCR扩增的引物取3 00 μL尿囊液加入7 00 μL Trizol混
中国蜂业 2013年3期2013-11-28
- 改良鸡胚尿囊膜肿瘤实验动物模型及其生物学行为观察
用。近年来，鸡胚尿囊膜(chick chorioallantoic membrane，CAM)模型在肿瘤血管方面的研究受到关注。因鸡胚发育的9～14 d，免疫系统并没有完全形成，排斥反应尚未建立，有利于建立各种移植肿瘤模型。相比裸鼠等哺乳动物模型，利用鸡胚CAM建立肿瘤模型，建模周期短，便于观察。肿瘤细胞种植到CAM相对无血管的区域后3～5 d，肉眼可见肿瘤形成，且生长迅速。国内外已有学者利用鸡胚尿囊膜成功建立了前列腺癌［1］、卵巢癌［2］、肾癌［3］及
中国比较医学杂志 2013年8期2013-11-27
- 鸽副黏病毒Ⅰ型(川沙株)的分离与鉴定
阴性的病料上清液尿囊腔接种于10日龄 SPF鸡胚，0.1 mL/胚。置37℃孵箱孵育，弃去24 h死亡鸡胚，以后每6 h观察一次，并随时取出死亡鸡胚，置4℃冰箱中过夜，收集尿囊液并观察鸡胚病变，并盲传5代(E1～E5)，收集死亡鸡胚尿囊液。2.2 病毒鉴定2.2.1 血凝(HA)试验 应用β-微量法，对收集的各代尿囊液进行血凝试验，检测有无血凝性及血凝效价。2.2.2 血凝抑制(HI)试验 分别应用NDV阳性血清、AIV-H5、AIV-H9和AIV-H7阳
中国兽药杂志 2013年11期2013-11-23
- 鹅副粘病毒YF株的分离鉴定与生物学特性研究
℃作用4 h后，尿囊腔接种10日龄SPF鸡胚(鸭胚)，0．2 mL/枚，弃去24 h 内死亡鸡胚(鸭胚)，将24～96 h死亡的鸡胚(鸭胚)置4℃过夜后无菌采集尿囊液，并观察鸡胚(鸭胚)病变情况，收集的尿囊液进行HA、HI测定。取尿囊液，送解放军军事医学科学院军事兽医研究所进行电镜观察。1．2．2 病毒的血清学鉴定 将分离毒用灭菌生理盐水稀释至 105．0ELD50/0．1mL，分别与 10 倍稀释并经56℃30 min灭活的抗鹅副粘病毒高免血清、NDV阳
中国兽药杂志 2013年2期2013-10-09
- 鸡胚背根神经节神经元在体内培养的研究
经细胞。鸡胚绒毛尿囊膜层是天然的培养基［1－2］，将孵化13～15d的鸡胚背根神经节神经元种植于正在孵化的鸡胚的绒毛尿囊膜层，使神经细胞的培养环境得到进一步改善，从而提高神经细胞生长、分化及再聚集并发育成正常神经网络组织的成功率。1 材料及方法1．1 种蛋的选择及消毒 选择表面清洁、蛋壳均质、蛋形规范、质量50～60g、气室、气孔均匀受精鸡胚；种蛋用温水清洗、擦干，于1∶1 000新洁尔灭液中浸泡3min后擦干放入消毒蛋托备用；蛋托采用废弃的经消毒的六孔培
中国实用神经疾病杂志 2013年5期2013-08-20
- 鸡新城疫病毒分离鉴定及其部分生物学特性的研究
变，同时无菌采集尿囊液，-20℃保存。1.2.3 血凝和血凝抑制试验 按常规微量法（25μL）［4］测定无菌收集尿囊液的血凝价，再用 NDV阳性血清和AIV阳性血清进行血凝抑制试验。1.2.4 血清中和试验 将2个分离株第3代的鸡胚尿囊液分别用灭菌生理盐水稀释1 000倍，各取1 mL病毒稀释液分别与等量10倍稀释的新城疫标准阳性血清和AIV标准阳性血清充分混均后于37℃作用1h，同时设置上述灭菌生理盐水稀释1 000倍尿囊液作为对照组，每组接种10日龄鸡
动物医学进展 2013年4期2013-08-14
- 鹅源坦布苏病毒的分离及初步鉴定
器除菌，滤过液经尿囊腔接种13日龄鹅胚6枚，0.2mL／胚；同时接种灭菌PBS作为对照。每天观察3次，弃24h内死胚。收集24～120h死亡鹅胚的尿囊液，进行无菌检查和鸡红细胞凝集试验后，－20℃保存备用。1.4 病毒在番鸭胚的传代 将鹅胚的尿囊液接种10日龄番鸭胚4枚，0.2mL／胚；同时接种灭菌PBS作为对照。每天观察3次，弃24h内死胚，收集24～96 h死亡鸭胚的尿囊液，进行无菌检查和鸡红细胞凝集试验后，－20℃保存备用。1.5 鸭胚半数致死量（E
中国兽医杂志 2012年12期2012-11-23
- 一株鸡呼吸型传染性支气管炎病毒的分离鉴定
1日龄SPF鸡胚尿囊腔,0.2 mL/胚,用石蜡封住注射部位,并标注日期和时间（见图1、图2）.然后将其放置于37℃温箱.每天照蛋2次,将死胚放置于4℃冰箱过夜,弃去24 h内死胚,收取48～72 h内死胚尿囊液（见图3）.死胚尿囊液接种另一组鸡胚,未死鸡胚至接种120 h后置4℃冰箱冻死,观察鸡胚病变,连续盲传5代[7].图1 接种Fig.1 Vaccination图2 封口 Fig.2 Seal 图3 收集尿囊液Fig.3 Collect allant
河南科技学院学报(自然科学版) 2012年6期2012-10-16
- 广东地区鸭黄病毒QS株的分离和初步鉴定
保留滤液。滤液经尿囊腔途径接种9日龄鸭胚(由广东永顺生物制药有限公司提供)8只，每只0．3 mL。接种后置37℃温箱孵化，每天照胚4次，连续观察7 d。观察死亡鸭胚病变，收获死亡鸭胚尿囊液，无菌检查后命名为QS株，然后连续传代，同时开始进行鸡胚传代。1．3 血凝试验 参照文献［4］，配制1%鸭、鸡红细胞悬液，分别进行微量血凝试验。1．4 PCR、RT－PCR鉴定和序列测定分析 根据实验初步结果，分别针对鸭瘟病毒UL6基因，禽流感病毒M基因，禽副粘病毒Ⅰ型F
中国兽药杂志 2012年7期2012-10-09
- 鸡传染性支气管炎病毒上海株的分离与鉴定
微孔滤膜除菌。经尿囊腔接种10日龄SPF鸡胚，每胚接种0.2 mL，37℃孵育，弃去24 h内死亡鸡胚。96 h后，无菌收集尿囊液再接种10日龄SPF鸡胚，如此连传3代。1.3 鸡胚半数感染量(EID50)的测定 取30枚10日龄SPF鸡胚，分6组，每组5枚鸡胚。将病毒液稀释成10-2～10-7倍，每个稀释度接种5枚SPF鸡胚，0.2 mL /枚。每天照蛋2次，观察鸡胚状况并记录死亡情况，死亡鸡胚放4℃保藏。孵化至15日龄，无菌收集尿囊液。按Read-Mu
中国动物传染病学报 2012年4期2012-08-21
- 1株鸽新城疫病毒的分离、鉴定及生物学特性研究
72h内死亡胚的尿囊液。测定尿囊液是否有血凝性，并盲传6代，每代测HA效价。1.2.2 血凝抑制（HI）试验以常规方法测定F2、F6代尿囊液的HA效价，并以抗ND、禽流感 (H5、H7、H9亚型)、EDSV76标准阳性血清进行血凝抑制（HI）试验。首先将收获的尿囊液配成4HAU抗原，取96孔V型微量反应板，每孔加入25μL生理盐水，第1排加25 μL标准阳性血清，每种血清做2个重复，然后将血清进行2倍系列稀释至第10孔，从第10孔吸取25μL弃去。稀释后每
养禽与禽病防治 2012年3期2012-08-01
- 六株传染性支气管炎病毒的生物学特性鉴定及遗传进化分析
滤膜过滤除菌后，尿囊腔接种10日龄的SPF鸡胚，每胚0.2mL，接种后置于37℃温箱孵育，弃去24h之内死胚，60h后收集尿囊液，继续尿囊腔接种10日龄的SPF鸡胚，如此盲传5代，每一代对收获的尿囊液做血凝（haemagglutination，HA）测定，并观察鸡胚病变。1.2.2 鸡胚矮小化试验 将传代后的分离株尿囊液通过尿囊腔途径接种于9日龄～10日龄的SPF鸡胚，37℃孵育144h，观察胚体发育情况。1.2.3 新城疫病毒干扰试验 取各IBV分离株传
动物医学进展 2012年4期2012-06-29
- 鸭肝炎病毒现场分离株单克隆抗体的研制
经动物试验、鸭胚尿囊腔接种、PCR诊断，确诊为Ⅰ型鸭肝炎病毒[5-6]。试验动物BALB/c小鼠由中国军事医学科学院试验动物中心提供；SP2/0骨髓瘤细胞由中国军事医学科学院分子病原研究室提供；抗体亚类试剂盒购自Gibco公司；10日龄鸭胚及1日龄雏鸭购自北京三江宏利牧业有限公司。1.2 抗原制备及鉴定1.2.1 DHV抗原的纯化将临床发病鸭的肝脏制成悬液，通过尿囊腔接种10日龄鸭胚，收集接种后4～5 d死亡的鸭胚尿囊液，反复冻融后，4 ℃ 6 000 r
湖南农业大学学报（自然科学版） 2011年1期2011-03-07
- 牦牛子宫基质细胞与上皮细胞的标记物
子宫内，CK7在尿囊内层细胞（EE）和部分腔上皮细胞（LE）为阳性（图 1-E、I），在腺上皮（GE）、基质细胞（SC）、滋养层（TR）和尿囊外层（EM）呈阴性（图 1-A、E、I）；CKs在腺上皮（GE）、腔上皮（LE）、尿囊内层（EE）和尿囊外层（EM）为阳性（图1-B、F、J），在基质细胞（SC）为阴性（图 1-B、J）；Vimentin在基质细胞（SC）和尿囊外层（EM）为阳性，在滋养层（TR）、腔上皮（LE）和腺上皮（GE）为阴性。连续切片显示，
湖南农业大学学报（自然科学版） 2011年1期2011-03-07
- 肉鸭感染新城疫病毒的诊断
ml/胚的剂量，尿囊腔接种9～11日龄SPF鸡胚；弃24h内死胚，36h后收集尿囊液备用。（4）将收集鸡胚尿囊液与1%的红细胞进行血凝试验。（5）将收集的鸡胚尿囊液与H7亚型、H5亚型、H9亚型标准阳性血清、ND、EDS-76血清进行血凝抑制（6）采健康公鸡的血液作血琼脂培养基，从病鸭肝脏中分离致病菌接种于血琼脂培养基上，37 ℃温箱中培养。2 结果（1）将上述病料处理后所得病毒做健康公鸡红细胞凝集试验，结果显示该病毒具有血凝性。可以怀疑鸭群患新城疫、禽流
中国畜牧兽医文摘 2011年5期2011-02-12
- Jagged 1在生理性和病理性新生血管形成中的表达变化
研究建立鸡胚绒毛尿囊膜模型，动态观察血管发育不同时期Jagged 1的表达，探讨Jagged 1与血管发育的关系，并在正常的结直肠组织和不同大小结直肠癌组织中观察Jagged 1的表达，为肿瘤的治疗寻找新的靶点。1 材料与方法1.1 实验材料人脐静脉内皮细胞株EA.HY926，由中南大学湘雅医学院细胞中心引进。种蛋购自衡阳联合养鸡公司，选用新鲜、大小适中的优质种蛋，半自动孵化箱自行孵育。在解放军169医院批准同意和告知患者家属同意后，收集解放军169医院外
中国医药科学 2011年13期2011-01-25
- 鼻咽癌细胞鸡胚绒毛尿囊膜移植瘤模型的建立△
,费用昂贵。鸡胚尿囊膜模型是最近开发的移植瘤模型之一,具有简单、方便、价廉、快速等优点,国内外已有学者把该项技术应用于黑色素瘤[2]、神经母细胞瘤[3]、子宫内膜腺癌[4]等肿瘤的研究。但用于鼻咽癌研究的尚未见报道。本课题旨在研究鼻咽癌鸡胚绒毛尿囊膜(chorioallantoic membrane,CAM)模型的建立,为今后进一步开展有关鼻咽癌的研究创建技术平台。1 材料与方法1.1 材料 鼻咽癌细胞株 5-8F购自中南大学湘雅医学院中心实验室细胞库 。
微创医学 2010年5期2010-08-31
- 鹅源新城疫病毒云南流行毒株的鉴定理化试验
验 分离病毒毒株尿囊液经4.8%氯仿在4℃处理10min，20%乙醚在4℃处理24h后，分别尿囊腔接种9日龄鸡胚10枚，每胚0.1mL，并设对照组10枚，每胚接种未经氯仿乙醚处理的分离病毒株尿囊液0.1ml(殷震等，1997)，观察结果。1.2.2 甲醛灭活试验 分离病毒株尿囊液经0.1%和0.5%的甲醛处理后，分别尿囊腔接种9日龄鸡胚10枚，每胚0.1mL，并设对照组10枚，每胚接种未经甲醛处理的分离病毒株尿囊0.1mL，观察结果。1.2.3 病毒热稳定
山东畜牧兽医 2010年11期2010-08-15
- 小鹅瘟的诊断与防治
4日龄鹅胚的绒毛尿囊腔内或绒毛尿囊膜上，鹅胚经5～7d死亡。在鹅胚连续通过多代以后，致死的日程可以稳定在3d左右。来自免疫母鹅的胚和雏对病毒的感染有抵抗力，在分离病毒时应注意。本病毒能凝聚黄牛精子，并为特异抗体血清所致。本病毒对不良环境的抵抗力较强，在-20℃下至少能存活2年。能抵抗56℃达3h。2 流行病学本病在自然传染条件下只有雏鹅感染发病，各种品种的雏鹅易感性相似。最早发病的雏鹅一般在4～5日龄开始，数日内波及全群，病死率可达70%～95%以上。雏鹅
山东畜牧兽医 2010年11期2010-08-15
- 中药复方口服液体外抗鸡新城疫病毒的试验研究
教研室提供，鸡胚尿囊液的HA效价为8log2。1.1.3 药品：中药复方制剂由贯叶连翘、香薷组成，制成含生药2g/ml的口服液，所用中药购自泰州仁济中药饮片有限公司；金刚烷胺，由江苏倍康药业公司提供，配成0.2mg/ml浓度，灭菌后备用。1.2 试验分组：10日龄鸡胚60个，随机分为4组。具体分组情况见表1。表1 实验分组情况1.3 试验方法1.3.1 测定半数致死量：将尿囊液稀释不同倍数，接种非免鸡胚，得出胚胎半数致死量。经过测定，尿囊液半数致死量的稀释
当代畜禽养殖业 2010年11期2010-08-08
- 1株鹅副黏病毒的生物学特性分析
O/GD/05株尿囊液用灭菌生理盐水稀释1 000倍,尿囊腔接种9～11日龄SPF鸡胚5枚,0.2 mL/枚,37℃孵育72 h,逐日观察,期间弃去24 h以内死亡的鸡胚,最终无菌收集尿囊液,作为第1代尿囊液毒。如此反复传代至第3代,收集第3代尿囊液毒作为工作用种毒,-80℃保存备用。1.5 鸡胚半数感染量(EID50)的测定 将61/GO/GD/05株尿囊液用灭菌生理盐水作连续10倍稀释(10-6～10-10),每个稀释度经尿囊腔接种8枚10日龄的SPF
中国兽医杂志 2010年12期2010-06-01
- K6SiNiW11O39对碱性成纤维细胞生长因子诱导的血管生成的影响
、管形成以及鸡胚尿囊膜血管形成等体内外生物学实验观察SiWNi对bFGF诱导的血管生成的影响。结果:SiWNi能够剂量相关性的抑制bFGF诱导的ECV-304细胞增殖;在SiWNi与bFGF(100 μ g/L)摩尔比为1∶1的观察点,SiWNi能够明显抑制 bFGF诱导的 ECV-304细胞的浸润、迁移、管形成以及鸡胚尿囊膜血管形成。结论:SiWNi对bFGF诱导的血管生成有明显抑制作用。血管生成;K6SiNiW11O39;碱性成纤维细胞生长因子;细胞增
河南大学学报（医学版） 2010年2期2010-04-06