ＨＰＶ－ＤＮＡ１６、１８检测在宫颈病变筛查中的应用

黄美琼　李北坤　陆翠群

【摘要】 目的 探讨高危型人乳头瘤状病毒(HPV)DNA16、18检测在宫颈病变筛查的临床价值。方法 对妇科门诊875例慢性宫颈炎患者均采用HC₂方法检测HPV-DNA16、18，同时进行阴道镜下活检组织病理学检查，以病理学诊断为金标准。结果 875例妇女患者，HPV 16、18阳性者有259例，占29.6%。经阴道镜下定位活检病理确诊患者中HPV16、18阳性率分别为慢性宫颈炎15.5%(80/515),宫颈湿疣38.7%(74/191),宫颈上皮内瘤变CINⅠ型61.9%(39/63),CINⅡ型58.7%(44/75),CINⅢ型62.5%(15/24)，宫颈癌100%(7/7)。CINⅠHPV感染率高于CINⅡ(P<0.05),具有显著性差异。结论 HC₂-HPV-DNA检测为一种先进有效的宫颈病变的筛查方法,具有积极的意义。

【关键词】高危型人乳头瘤状病毒；宫颈病变；第二代杂交捕获试验

Application of human pappilomavirus16,18 testing in cervical lesions

HUANG Mei-qiong，LI Bei-kun，LU Cui-qun.Ying de City Womeny and Childrens Hospital and Health Institute，Guangdong 513000，China

【Abstract】 Objective Discussion of the high-risk human papillomavirus(HPV)DNA16,18 detection in cervical lesions the clinical value of screening.Methods 875 cases of gynecologic patient are used in patients with chronic cervicitis HC₂used to detect HPV-DNA16,18 and Colposcopy biopsy histopathological examinati-on,With pathological diagnosis for the gold standard.Results In 875 cases of women patients,HPV 16,18 have positive 259 cases,accounting for 29.6%.By biopsy under colposcopy patients diagnosed HPV16,18 positive rate,chronic cervicitis was 15.5%(80/515),Cervical condyloma was 38.7%(74/191),CINⅠ61.9%(39/63),CINⅡ58.7%(44/75),CINⅢ62.5%(15/42),cervical cancer was 100%(7/7).CINⅠHPV inf-ection rate is higher than CINⅡ(P<0.05).Conclusion HC₂-HPV-DNA testing is an advanced and effective screening method of cervical lesions,with a considerable positive significance.

【Key words】High-risk human papillomavirus； Cervical lesions； Hybrid capture 2 test

高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染已公认为引起宫颈癌及癌前病变的主要原因。99.7%的宫颈癌患者的宫颈病变组织中可检测到HPV-DNA的存在。由于宫颈癌存在一个较长的、可逆转的癌前病变期，对宫颈癌癌前病变的早期诊断和治疗，可预防宫颈浸润癌的发生。现将本院对有症状的慢性宫颈炎患者采用第二代杂交捕获试验(HC₂)进行高危型HPV-DNA16、18检测，同时行阴道镜下活检组织病理学检查，并作一回顾性分析，报告如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料 2007年1月至2008年12月在本院妇科门诊就诊有白带异常、接触性出血史的慢性宫颈炎患者或疑有宫颈病变者共875例， 知情同意行HC₂-HPV-DNA 检测及阴道镜下定位活检。均有3年以上性生活史、目前无妊娠、无宫颈手术史及盆腔放化疗史者。年龄19~75岁，平均36.8岁。

1.2 检查方法

1.2.1 高危型HPV-DNA16、18检测 采集HC₂-HPV标本前3 d停止阴道用药或冲洗，窥阴器暴露宫颈，采用美国Digene公司生产的HPV专用毛刷，毛刷头全部伸入宫颈内，逆时针转动3圈，停留10 s取出后连带毛刷全部放进有专用保存液的小瓶内，盖好盖子，标记好送检验室检测。通过基因捕获技术检测已知致癌型HPV-DNA 16、18。诊断阳性指标为HPV DNA≥1.0 pg/ml。

1.2.2 阴道镜下官颈活检 对所有HC₂-HPV-DNA检查患者使用深圳金科威公司的SLG-2000型电子阴道镜，有专门妇产科主治医师进行阴道镜下活检组织病理学检查，如镜下未发现明显异常或图像不满意者，则常规行3、 6、 9、 12点作4个点活检或颈管搔刮，其组织分瓶送病理科作病理检查。

2 结果

2.1 阴道镜下定位活检病理检查结果 875例患者均行阴道镜检查，定位活检病理确诊慢性宫颈炎515例，宫颈湿疣191例；CINⅠ63例，CINⅡ75例，CINⅢ24例，宫颈癌7例，见表1。

2.2 高危型HPV-DNA检测结果 875例患者中，高危型HPV-DNA检测阳性者共259例，阳性率29.6%(263/875)。经阴道镜下定位活检病理确诊患者中高危型HPV-DNA 阳性率分别为慢性宫颈炎15.5%(80/515),宫颈湿疣38.7%(74/191),宫颈上皮内瘤变CINⅠ61.9%(39/63),CINⅡ58.7%(44/75),CINⅢ62.5%(15/24)，宫颈癌100%(7/7)。CINⅠHPV感染率高于CINⅡ(P<0.05),具有显著性差异。

3 讨论

HPV是一组双股DNA病毒，HPV是公认的宫颈癌的致病因素，在已确认的宫颈癌病例中大约90%~100%可检测到HPV-DNA^[1]，DNA序列分析发现HPV有200多个基因型,其中与宫颈癌的发病关系最密切的是癌基因E6、E7及其编码的蛋白质产物^[2],HPV感染细胞并最终导致宫颈癌发生、发展的主要机制是通过其E6、E7基因组整合于宿主细胞的DNA中，最终导致宿主细胞肿瘤抑制蛋白的产生及下调(主要是肿瘤抑制蛋白p53和视网膜神经胶质瘤基因产物PRB)。高危型HPV感染宿主细胞后，能够影响其蛋白质的功能和细胞基因产物的表达；高危型HPV的E6和E7蛋白同宿主细胞的p53以及PRB具有高度的亲和力,能影响其功能及基因的稳定性，最终引起细胞癌变^[2]。

近年来宫颈癌的发病率呈年轻化的上升趋势,我国每年约有2~3万妇女死于宫颈癌。生殖道感染高危型HPV是妇女宫颈癌和子宫颈上皮内瘤变(CIN)高发的主要危险因素。国外许多关于HPV感染与宫颈癌危险性关系的病例-对照研究,结果均显示HPV感染与宫颈癌有明显的相关性,HPV感染阳性率50%~90%左右。在宫颈癌癌前病变和宫颈癌中，以HPV16型最常见，其次为HPV18型^[3]。年轻而性活跃的女性HPV感染率最高，感染高峰年龄为18~30岁，30岁以下女性多属于一过性感染。当机体感染HPV，病毒基因可整合至宫颈细胞中，机体免疫系统可识别感染细胞并加以清除。80.0%HPV感染在8~12个月后可以自然清除，随年龄增长，HPV感染率下降，持续感染率增加。从本文资料中可以看出35~50岁女性持续感染HPV，是宫颈癌好发的高危人群,CINⅢ和宫颈癌患者无一例年龄在50岁以上，从而也提示宫颈癌目前年轻化趋势。而生殖道HPV感染与宫颈癌的关系最早由德国病毒学家ZurHaus-en提出^[3-5]，通过研究，明确高危型HPV持续感染为宫颈癌癌前病变和浸润性宫颈癌发生的必要条件。子宫颈癌HPV感染国外报道阳性率50%~90%左右，其中HPV16型占40%~80%左右，18型占10%~30%左右。李洁等^[6]报道我国14省市815例子宫颈癌组织HPV总检出率53.5%，其中HPV16和58型检出率最高，分别是31.9%和7.6%，HPV11和18型的检出率分别是2.3%和1.O%。本实验资料显示HPV16、18在慢性宫颈炎组、宫颈湿疣组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组和宫颈鳞癌组中的感染率分别为15.5%、38.7%、61.9%、58.7%、62.5%和100%。随着宫颈上皮病变的加重，HPV16、18阳性率逐渐升高，具有统计学意义(P<0.01)，CINⅠ~Ⅱ组、CINIlI组和宫颈鳞癌组的HPV16、18的阳性率均显著高于宫颈炎组。CINⅢ组和宫颈鳞癌组的HPV16、18的阳性率差异无统计学意义，说明子宫颈鳞癌和CIN与HPV16、18的关系密切，子宫颈鳞癌发展必然经过CIN阶段，两者感染率的相似性也表明了CIN发展成鳞癌过程的延续性和继承性。从感染HPV后导致细胞分化失调致重度不典型增生，最后发展成官颈浸润癌，约需15年^[7],对于有3年性生活以上的女性，有必要行宫颈防癌筛查。

杂交捕获HPV-DNA分析法是由Digene公司推出的HPV-DNA检测系统,基本原理是应用高效的液相RNA:DNA杂交方法捕获样品中的HPV-DNA,采用碱性磷酸酶标记抗RNA：DNA抗体-化学发光信号显示系统。HC₂检测结果敏感性高，其检测低限为HPV-DNA 0.2~1.0 ng/L^[8]。该检测方法显著提高了识别高危病变的灵敏度和特异度,大大降低了假阴性率，可用于人群筛查操作简易，其检测HPV-DNA对CINⅡ以上病变的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为97.8%、95.3%、10.9%和100%。因此,HC₂-HPV-DNA检测值得临床作为宫颈癌初筛的一种手段，结合细胞学、阴道镜下活检，早期发现宫颈癌前病变及早期浸润癌，以及时治疗，提高患者生活质量。

参 考 文 献

［1］ BOSCH F X，I ORINCZ A,MUNOZ N,et al.The causal relatlon between human papillomavlrus and cervical cancer.J Clin Pathol，2002，55(4)：244-265.

［2］ Munoz N，Bosch FX，de Sanjose S，et al．Epidemiologic classification of human papillomavirus types associated with cervical cancer．N Engl J Med,2003，348：518-527.

［3］ Bekkerss R L,Massuger L F,Bulten J,et al.Epidem iological and clinical aspects of human papillomavirus detection in the prevention of cervical cancer.Rev Meal Virol,2004,14：95-105.

［4］ Schiffman M H，Bauer H M，Hoover R N，et al．Epidemiology of cervical carc1nogenesis．Cancer，1995，76：1888-1895.

［5］ Zur Hausen H Papillomavirus causing cancer：EVasion frOm hostcell Control in early events in carcfnogenesis．J Natl Cancer I nst，2000，92：690-698.

［6］ 李洁，刘宝印,Zur-Hausen H，等．中国妇女子宫颈癌组织中人乳头瘤病毒感染及其地理分布的调查．中华实验和临床病理学杂志，1996，10(1)：50-55.

［7］ Zur H．Papillomavirus infections a major cause of human cancers.Biochin Biophys Acta，1996，1288(2)：55-88.

［8］ 刘翠华．人乳头瘤病毒的诊断研究进展．国外医学．妇产科学分册，2002，29(4)：213.