河南汉族缺血性脑血管病患者半胱氨酸蛋白酶抑制因子Cystain C Rs2897119(-177C/T)基因多态性检测△

路 燕 刘炯波 董 蕾 滕军放

1)河南新乡市中心医院 新乡 453000 2)河南淇县人民医院 淇县 456750 3)郑州大学一附属神经内科 郑州450052

近年来缺血性脑血管病(ischemic cerebrovascular diseases,ICVD)的病因及发病机制研究已取得很大的进展,半胱氨酸蛋白酶抑制因子C(Cystain C)也受到越来越多研究者的关注。作者通过病例对照研究,采用多聚酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性技术(PCR-RFLP)方法,探讨Cystatin C Rs2897119(-177C/T)基因与ICVD的关系。

1 对象和方法

1.1 对象 185例缺血性脑血管病(ICVD组)和111例对照组来自2008-10～2009-04郑州大学第一附属医院神经内科住院患者及门诊体检者,均为河南汉族人。ICVD组符合1995年第四届全国脑血管病学术会议修订的急性缺血性脑血管病的诊断标准,并经头颅CT和(或)MRI检查确诊;对照组为无缺血性脑血管病史,无临床血管事件发生的神经内科其他住院患者及健康体检者。2组均排除脑出血、蛛网膜下腔出血等出血性脑血管疾病,均无帕金森病、痴呆史,甲状腺疾病,肝脏及肾脏疾病等及服用叶酸、维生素B12、美多芭等药物史。ICVD组185例,男122例,女63例,年龄36～86岁。对照组111例,男71例,女40例,年龄32～87岁。各组年龄及性别差异均无统计学意义(χ2=0.120,P＞0.05;t=1.748,P＞0.05)。

1.2 多态性检测 采用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法。取EDTA抗凝静脉血2 m L采用CBM公司基因提取试剂盒提取基因DNA。参照文献[3]设计引物,上游引物:5'-AGAGCCAGTGACTGAAGAACC-3',下游引物:5'-GATTTACAGCCAAGGAACATG-3',扩增目的片段长度为474 bp。PCR反应体系为30μL:PCR magic m ix 2.0酶15μL,上下游引物各2.0μL,模板DNA 2.0μL,ddH2O补至30μL。PCR扩增条件:95℃预变性5 min;95℃变性45 s,55℃复性45 s,72℃延伸55 s,循环30次;72℃延伸5 min。取3 uL PCR产物经20 g/L琼脂糖凝胶电泳30 m in,EB染色检验扩增结果。酶切反应体系为30 μL,包括PCR扩增产物10μL,Sma I 2.0μL,10×Buffer Tango 2.0μL,ddH2O 16μL。……