几种新型消毒剂抗猪瘟病毒效果比较

臧莹安，金纬虎，杨展基，李春玲

(1．仲恺农业工程学院动物科学系，广东广州510225；2．广东省梅州市大浦县畜牧局，广东大浦 514200；3．广东省农业科学院兽医研究所，广东广州510640)

消毒是预防和扑灭传染病最为有效的措施之一，是传染病防治工作中的一个重要环节，选择理想的消毒剂是做好传染病防治工作的关键。近年来消毒剂的研制开发受到研究者的极大关注。猪瘟病毒属披膜病毒科成员，对外界抵抗力强，对许多消毒剂有抵抗力。本试验选择猪瘟病毒为研究对象，研究百迪Ⅲ，百迪康，迪威安，迪威宁，力保健和消特灵对猪瘟病毒兔体试验的效果，以期为猪瘟病的防治寻找有效的新型消毒剂。

一、试验材料

（一）消毒剂 百迪Ⅲ（主要成分戊二醛、双链季铵盐），百迪康（主要成分戊二醛、癸甲溴铵），迪威安（主要成分碘），力保健（主要成分过硫酸氢钾、氯化钠），消特灵（主要成分二氯异氰脲酸钠）。均由广州迈高化学有限公司提供。

（二）猪瘟兔化疫苗农业部兰州生物药厂生产的猪瘟弱毒疫苗毒(C株),20倍稀释后使用。

（三）禽巴氏杆菌由广东省农科院兽医研究所分离鉴定和保存。

（四）中和剂硫代硫酸钠，甘氨酸，吐温-80，氢氧化钠。

（五）试验动物体重2～3 kg的健康家兔，由南方医科大学提供。

（六）胰蛋白胨大豆肉汤培养基(TSB)广东省农科院兽医研究所实验室自配。

（七）基本实验仪器恒温箱(36±1℃)、干燥箱、高压灭菌器、试管、恒温水浴箱(46±l℃)、平皿(90)、吸管 (1 ml、10 ml)、酒精灯、灭菌棉签等常用设备和器材。

二、试验方法

本次试验均按照兽用消毒剂技术规范( 试行 ) 进行。

（一）中和剂的选择残留消毒剂的去除通常采用化学中和法：向消毒液中加入适量的中和剂，使消毒剂浓度得到稀释，并且消毒作用受到化学中和。将巴氏杆菌复苏计数，配成浓度为109/ml，然后稀释至106/ml按下述方法进行涂板计数。试验分为6组：

A：未接种的培养基，证明培养基是否污染。

B：菌液接种于培养基，证明菌种与培养基是否适宜。

C：中和剂1ml＋菌液1ml，证明中和剂是否有抑菌作用。

D：消毒剂1ml＋菌液1ml，证明消毒剂在试验浓度下是否有杀菌或抑菌作用。

E ：（ 消 毒 剂 1 ml＋ 菌 液 1 ml）＋中和剂1 ml，消毒剂1 ml和菌液1 ml先作用5 min后再加入中和剂1 ml作用10 min后涂板计数；证明中和剂能否中和残留消毒剂的抑菌作用。

F：（ 消 毒 剂1 ml＋ 中 和 剂1 ml）＋菌液1 ml，消毒剂1 ml和中和剂1 ml作用10 min后再加入菌液1 ml作用5 min后涂板计数；证明消毒剂与中和剂的反应物有无抑菌作用。

分别取事先准备好的平板，按上述方法将中和剂、消毒剂和菌液分别混合作用，然后用移液枪各吸100 ml涂板计数，D和E组接原液；B、C和F组按1:10稀释至第3管涂板；每组2个平行样本。

结果判定：如A组不长菌，B、C、F组菌落数为90～110个，D组不长菌，通过第E组可判别所选中和剂及其浓度适宜。

选用中和剂时要遵循下面一些原则：试验所用试验指标菌应为消毒试验选用菌株中抵抗力最弱者，所用试剂、培养基及其他材料都应一致，应以消毒剂未用中和剂中和时的最低有效浓度作为试验浓度。酚类消毒剂（3.0%～5.0%）、碱类消毒剂、酸类消毒剂、戊二醛、过氧乙酸（0.1%～0.5%）、含氯消毒剂（0.1%～0.5%）、季铵盐类消毒剂（0.1%～0.5%）的常用中和剂分别为：吐温80（3.0%～ 5.0%）、等当量酸、等当量碱、甘氨酸、硫代硫酸钠（0.1%～0.5%）、硫代硫酸钠（0.1%～1.0%）、吐温80（0.1%～3.0%）。

（二）消毒剂抗猪瘟病毒兔体试验

1.将不同消毒剂分别稀释到不同浓度：百迪康、百迪Ⅲ和力保健稀 释 为1:800、1:1000和1:1500；迪威安稀释为1:300、1:500和1:800；消特灵稀释为200 mg/L、100 mg/L和50 mg/L。

2.将不同浓度的消毒剂4.5 ml与一万只家兔最小感染量的猪瘟兔化疫苗0.5 ml混合。同时设生理盐水作为空白对照组：将4.5 ml生理盐水与一万只家兔最小感染量的猪瘟兔化疫苗0.5 ml混合；病毒对照组：猪瘟兔化疫苗5.0 ml。分别20℃水浴5 min。

3.分别取上述溶液1 ml于另外的灭菌试管，并向其中加入中和剂9 ml，混合后作用10 min。

4. 以上各混合液耳静脉注射家兔两只，1 ml/只，所有家兔连续6 d测体温，3次/日。试验兔接毒后36～48 h，测量体温超过注射前体温0.5℃以上2个温次者表明该浓度的消毒剂不能有效杀灭猪瘟病毒。

体温反应标准如下：

定型热反应（＋＋）：潜伏期48～96 h，体温上升呈明显曲线，至少有3个温次超过常温1℃以上，并稽留18～36 h可判为定型热。

轻热反应（＋）：潜伏期48～96 h，体温上升呈明显曲线，至少有2个温次超过常温0.5℃以上，并稽留12～36 h。

可 疑 反 应（±）：潜 伏 期48～96 h，体温曲线起伏不定，稽留不到12 h；或潜伏期在24 h以上，不足48 h及超过96 h至120 h出现热反应。

无反应（－）：体温正常。

三、试验结果

（一）平板培养基上细菌菌落数

（二）中和剂种类及浓度根据细菌平板计数结果(表1)，选定百迪康、百迪Ⅲ、力保健、迪威安、消特灵适用的中和剂分别为甘氨酸（0.008%）和吐温-80（0.08%）、甘氨酸（0.008%）和吐温-80（0.08%）、硫代硫酸钠（1%）、硫代硫酸钠（1%）和NaOH（0.2%）、硫代硫酸钠（1%）。

（三）兔体试验 见表2。

由试验结果可以看出：当百迪Ⅲ、百迪康、迪威宁、消特灵的浓度分别 ≥ 1:800、1:1000、1:300、1:700、1:800、200mg/L时，均可有效杀灭猪瘟病毒。

表1 平板培养基上细菌菌落数（个）

四、讨论与分析

本次试验通过对几种新型消毒剂对抗猪瘟病毒兔体试验研究比较，发现同一种消毒剂的浓度不同，其体温反应也不一样。大多数消毒剂在高浓度时起杀菌作用，低浓度时则只有抑菌作用。所以当消毒液浓度不同时对猪瘟病毒作用效果不一样，当浓度达到一定程度后可以杀猪瘟病毒，所以在生产临床中对消毒药的应用要注意浓度。在临床实践中，还要考虑消毒剂的成本、具体的消毒地点、消毒剂的保存及抗药性等因素而选择消毒药。

戊二醛复合消毒剂是一种新型复合型消毒剂，其主要活性成分为二甲基可可氯苯甲胺(季胺盐)和戊二醛。季铵盐是表面活性类消毒剂，能迅速渗透入胞浆膜脂质体和蛋白质体，改变细胞膜通透性，具有较强的杀菌力。它能形成离子化凝胶和胶囊，具有导电性，能影响蛋白质表面的溶解度，能使蛋白质变性沉淀，从而破坏酶的活性。戊二醛可以和胞壁脂蛋白发生交联，和胞壁磷壁酸中的酯联残基形成侧链，从而封闭细胞壁，阻碍微生物对营养物质的吸收和废物的排出。从表2可看出当百迪康的浓度≥1:1000时可有效地杀灭猪瘟病毒；当百迪Ⅲ的浓度≥1:800时可有效杀灭猪瘟病毒。

含氯消毒剂的作用机制为氧化作用和氯化作用，而干扰细胞代谢。一般说来，有效氯浓度越高，作用时间越长，消毒效果越。超氯消毒剂是新一代氯制剂，具有高效、广谱，无毒无副作用等特点，可用以带畜消毒，饮水消毒。从表2可看出当力保健的浓度≥1:800时可有效的杀灭猪瘟病毒。

碘主要以分子（I2）形式发挥杀菌作用，其原理是碘化和氧化菌体蛋白的活性基因，并与蛋白的氨基结合而导致蛋白变性和抑制菌体的代谢酶系统。试验中迪威安中的碘分子与表面活性剂结合，制成碘附溶液，当用水稀释时将缓慢释放出碘分子，因而是一种高效的杀微生物消毒剂。对引起家畜和家禽主要疾病的病毒、细菌和真菌有杀灭作用。由表2可看出当迪威安的浓度≥1:300时可有效的杀灭猪瘟病毒。

消特灵粉是由二氯异氰酸钠配制而成的粉剂，其有效氯含量大于20%。具有高效、广谱、快速、低残留等特点，现已广泛应用于畜禽生产。由表2可看出当消特灵的浓度≥200 mg/L时可有效杀灭猪瘟病毒。但据报道，动物连续大量摄入含氯消毒剂可在体内蓄积并引起机体慢性中毒，这一点值得养殖生产者注意。

表2 抗猪瘟病毒兔体试验

本次试验只是几种新型消毒剂抗猪瘟病毒的初步试验，进一步的研究还有待于深化。

（略）