沙利度胺对伊立替康及其代谢物SN-38在大鼠体内药动学的影响Δ

史爱欣，胡艳玲，胡 欣

（卫生部北京医院药学部，北京市 100730）

伊立替康（CPT-11）为选择性拓扑异构酶Ⅰ抑制剂，用于治疗转移性结肠直肠癌复发和恶化，也可单用或与其它药物联合用于小细胞肺癌、非小细胞肺癌等其他肿瘤的治疗。迟发型腹泻是影响伊立替康应用的最重要的不良反应之一，伊立替康的体内活性代谢产物SN-38的浓度与伊立替康引起的迟发型腹泻有很大相关性[1～3]，一般认为SN-38可引起肠道黏膜损害，导致肠道内离子转运异常，向肠腔分泌水和电解质过多而引发迟发型腹泻。因此，控制SN-38的浓度成为减轻肠毒性的新研究方向。沙利度胺具有抗血管形成、免疫调节和抗肿瘤作用，小规模临床试验证实沙利度胺可以减轻伊立替康的肠毒性[4，5]。本研究以SD♂大鼠为受试对象，考察伊立替康联用沙利度胺后对伊立替康及SN-38体内药动学的影响，为临床减轻伊立替康的肠毒性及促进其合理用药提供参考。

1 材料

1.1 试药

伊立替康对照品（批号：160711012，纯度：＞98%）、SN-38对照品（批号：20071024，纯度：＞99%）均由江苏恒瑞制药公司提供；内标苯磺贝他斯汀对照品（天津田边制药有限公司提供，批号：06-02，纯度：＞99.0%）；盐酸伊立替康注射液（英国安万特公司，商品名：开普拓，批号：D6D261，规格：100 mg·5 mL－1）；沙利度胺片（常州制药厂有限公司，批号：0710081，规格：每片25 mg）；乙腈、甲醇均为色谱纯；乙酸、醋酸铵、甲酸、甲酸铵均为质谱级；二甲亚砜为分析纯；水为超纯水。

1.2 仪器

2795型高效液相色谱系统、Quattro Premier串联质谱（MS）检测器（美国Waters公司）；D-37520 Biofuge高速离心机（德国Kendro公司）；LDZ5-2型离心机（北京医用离心机厂）；AT201十万分之一分析天平（瑞士METTLER-TOLEDO公司）。

1.3 动物

SD♂大鼠，体质量220～250 g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，实验动物许可证编号：SCXK（京）2007-0001。实验前禁食12 h，不禁水。

2 方法与结果

2.1 伊立替康及SN-38血药浓度测定方法学考察

2.1.1 建立LC-MS/MS法测定大鼠血浆中伊立替康及SN-38浓度的LC-MS条件，详见文献[6]。

2.1.2 溶液的制备。伊立替康对照品溶液：精密称取伊立替康对照品适量，置于50 mL棕色容量瓶中，加入适量甲醇使其完全溶解，用甲醇定容，即得200 μg·mL－1的伊立替康贮备液。

SN-38对照品溶液：精密称取SN-38对照品适量，置于50 mL棕色容量瓶中，加入二甲基亚砜30 mL使其完全溶解，用甲醇定容，即得200 μg·mL－1的SN-38贮备液。

内标溶液：精密称取苯磺贝他斯汀对照品适量，置于100 mL棕色容量瓶中，滴加适量甲醇使其完全溶解，用纯水定容，即得100 μg·mL－1的内标贮备液。以上所有溶液于4℃避光保存，并于临用前取出放至室温。

沙利度胺溶液：取适量沙利度胺片，置于研钵中研碎，混匀，精密称取适量，置于50 mL容量瓶中，加二甲亚砜稀释至刻度，震荡摇匀，即得10 mg·mL－1的溶液，静置。

2.1.3 方法专属性。采用固相萃取方法进行样品预处理。在本试验条件下，血浆样品中药物与基质中的其它组分得到良好分离，不受内源性物质的干扰。空白血浆、空白血浆+伊立替康（1000 ng·mL－1）+SN-38（50 ng·mL－1）+内标和大鼠尾静脉注射伊立替康（10 mg·kg－1）及沙利度胺+伊立替康（10 mg·kg－1）4 h后血浆样品的LC-MS/MS图见图1。

2.1.4 线性关系、精密度、准确度、回收率、稳定性、基质效应及过程有效率、样品稀释误差考察[6]。血浆中伊立替康和SN-38的线性回归方程（Y：样品与内标的峰面积之比，C：样品浓度）分别为Y＝0.4540C+0.1972（r＝0.9996）；Y＝0.0030C+0.0011（r＝0.9999）。伊立替康及SN-38线性范围分别为1～2000、0.5～100 ng·mL－1，定量下限分别为1、0.5 ng·mL－1。批内精密度分别为4.6%～6.4%、3.5%～4.9%，批间精密度分别为5.9%～6.7%、5.8%～8.1%；相对回收率分别为（96.09±2.96）%～（100.57±4.54）%、（98.04±3.43）%～（100.84±4.35）%。伊立替康及SN-38血浆处理后在4℃样品室中至少能稳定放置24 h，RSD分别为4.11%、4.62%；在室温环境下至少能稳定放置1.5 h，RSD分别为2.83%、3.29%；在－70℃冰冻环境下至少能稳定放置30 d，RSD分别为2.66%、2.47%；在反复冻融3次后仍保持稳定，RSD分别为2.35%和3.53%。伊立替康、SN-38和内标的基质效应均接近100%，RSD分别＜1.6%、＜4.7%、＜2.5%。伊立替康稀释5倍的准确度与精密度分别为99.06%、2.25%，稀释10倍后分别为99.00%、3.29%；SN-38稀释5倍的准确度与精密度分别为100.08%、0.75%，稀释10倍后分别为99.83%、0.66%。表明样品经空白血浆稀释后不影响测定准确度和精密度。

2.2 给药方法

实验分为伊立替康10、20 mg·kg－12个剂量组；每一剂量组均设1个对照组。实验组为伊立替康与沙利度胺联用，对照组单用伊立替康。实验组先腹腔注射沙利度胺药液20 mg·kg－1，0.5 h后尾静脉注射伊立替康注射液；对照组先腹腔注射与沙利度胺药液同体积的二甲亚砜，0.5 h后尾静脉注射伊立替康注射液。于给药前和给药后0.083、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10、12 h颈静脉插管采血1 mL，置于肝素化抗凝试管中，3000 r·min－1离心5 min，分离血浆，于－70 ℃冰箱中保存待测。

2.3 血药浓度数据结果

各组给药后伊立替康、SN-38血药浓度均值-时间曲线见图2。

由图2A可见，2个剂量的伊立替康与沙利度胺合用后伊立替康血药浓度及AUC0～t均明显高于单用伊立替康；由图2B可见，伊立替康（10 mg·kg－1）剂量组与沙利度胺合用后与单用伊立替康组比较，SN-38血药浓度-时间曲线变化不明显，而伊立替康（20 mg·kg－1）剂量组与沙利度胺合用后SN-38血药浓度、AUC0～t明显低于单用伊立替康组。

图1 LC-MS/MS图Ⅰ-A、Ⅱ-A、Ⅲ-A.空白血浆；Ⅰ-B、Ⅱ-B、Ⅲ-B.空白血浆+伊立替康+SN-38+内标；Ⅰ-C、Ⅱ-C、Ⅲ-C.大鼠尾静脉注射伊立替康后4 h血样；Ⅰ-D、Ⅱ-D、Ⅲ-D.大鼠尾静脉注射沙利度胺+伊立替康后4 h血样；Ⅰ.伊立替康；Ⅱ.SN-38；Ⅲ.内标Fig 1 LC-MS/MS chromatogramsⅠ-A，Ⅱ-A，Ⅲ-A.blank plasma；Ⅰ-B，Ⅱ-B，Ⅲ-B.blank plasma+irinotecan+SN-38+internal standard；Ⅰ-C，Ⅱ-C，Ⅲ-C.blood sample of rats at 4 h after administration of irinotecan via tail vein；Ⅰ-D，Ⅱ-D，Ⅲ-D.blood sample of rats at 4 h after administration of thalidomide+irinotecan via tail vein；Ⅰ.irinotecan；Ⅱ.SN-38；Ⅲ.internal standard

2.4 药动学参数分析结果

血药浓度数据经DASver2.0软件拟合计算，比较实验组和对照组的药动学参数，结果见表1及表2。

2.5 统计分析

采用SPSS13.0软件，对主要的药动学参数AUC0～t、AUC0～∞、Cmax及t1/2进行统计分析。统计分析结果见表3。

图2 各组给药后伊立替康、SN-38血药浓度均值-时间曲线A.伊立替康；B.SN-38Fig 2 Mean plasma concentration-time curve of irinotecan and SN-38 of those groups after medicationA.irinotecan；B.SN-38

表1 伊立替康10 mg·kg－1剂量给药后伊立替康及SN-38的药动学参数Tab 1 Pharmacokinetic parameters of irinotecan and SN-38 in rats after administration of 10 mg·kg－1irinotecan

表2 伊立替康20 mg·kg－1剂量给药后伊立替康及SN-38的药动学参数Tab 2 Pharmacokinetic parameters of irinotecan and SN-38 in rats after administration of 20 mg·kg－1irinotecan

表3 伊立替康及SN-38主要药动学参数的统计分析结果（P值）Tab 3 Analysis of main pharmacokinetic parameters of irinotecan and SN-38（P value）

由表1、表2、表3可知，联用沙利度胺后，与单用伊立替康比较，伊立替康10 mg·kg－1剂量组中其 AUC0～t、AUC0～∞、Cmax显著增加（P＜0.05），t1/2缩短，但无统计学意义；20 mg·kg－1剂量组中Cmax显著增加（P＜0.05），AUC0～t及AUC0～∞虽有增加，但无统计学意义；对于SN-38，与对照组比较，2个实验组的AUC0～t、AUC0～∞均显著减少（P＜0.05），20 mg·kg－1剂量实验组的Cmax显著降低（P＜0.05），这说明沙利度胺可以增加伊立替康的AUC0～t同时减少SN-38的AUC0～t及Cmax。

3 讨论

伊立替康为前体药物，在体内经过羧酸酯酶转化为活性代谢物SN-38，后者活性较伊立替康强100～1000倍。SN-38经肝脏尿苷二磷酸葡醛酰转移酶（UGT）灭活，生成葡萄糖醛酸化SN-38（SN-38G）。SN-38G经肠道细菌产生的β-葡萄糖醛酸酶作用转化为SN-38，造成肠道黏膜损害，导致迟发型腹泻的发生[1～3]。肠道内SN-38可造成肠道结构和功能的损害，造成肠道黏膜受损，引起肠道内离子转运异常，导致向肠腔分泌水和电解质过多而引发迟发型腹泻。

本实验以大鼠为对象，研究了联用沙利度胺时伊立替康的药动学特征，拟合得到大鼠体内伊立替康和SN-38的药动学参数。迄今为止国内未见联用沙利度胺对伊立替康的药动学影响的研究报道。

联用沙利度胺后，在增加伊立替康的AUC0～t同时减少SN-38 的 AUC0～t及 Cmax，此结果与国外文献结果相似[4，7]：国外文献中，伊立替康合用沙利度胺后，其AUC0～t、AUC0～∞分别增加 32.50%、39.02%，同时 SN-38 的 AUC0～t、AUC0～∞下降了24%、42%。说明沙利度胺与伊立替康合用后改变了伊立替康及其代谢物SN-38的药动学特征。

本研究结果从药动学方面解释了沙利度胺能减轻伊立替康致迟发型腹泻的作用机制，为进一步减轻伊立替康的肠毒性及促进其合理用药提供参考和数据支持。

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