骨髓基质干细胞诱导分化滑膜样细胞移植预防屈肌腱粘连的实验研究

利春叶 吴丽妮 朱肖奇 王爱琴 贾赛雄

(南方医科大学附属深圳宝安医院 广东深圳 518101)

1 动物实验材料、方法

1.1 实验动物

材料及仪器:新西兰大白兔90只,雌雄不限,5～7周龄,体重2.5kg左右,其中3只用于提供BMCS以及关节滑液来源,其余用于研究防止肌腱粘连。

1.2 研究方法

MSCs的诱导分化:将MSCs移入含地塞米松1×10-7mol/L、关节滑液1×10-7mol/L、bFGF-23ng/mL、维生素C100mg/L的胎牛血清DMEM,诱导MSCs向滑膜细胞分化,通过离心、纯化后鉴定(光镜、透射电镜以及免疫组化等鉴定)。然后培养扩增备用。

滑膜样细胞移植:选用84只大白兔,每只兔的右后肢作为实验组,左后肢为对照组。将诱导分化的细胞悬液移植入大白兔右后肢损伤的跟腱处,术后用管形石膏将下肢固定于膝关节屈曲15°,踝关节背伸l5°,足趾自然位。

检测指标:术后l、2、4、8周取材。第1周每组各3只动物6条跟腱进行大体标本粘连等级评定、组织学观察(包括光镜和透射电镜观察);后3周每组各6只动物12条跟腱,随机取6条跟腱进行生物力学测试,6条进行大体标本粘连等级评定及组织学观察。

表1 肌腱粘连分布(等级资料的秩和检验)

表2 肌腱的断裂载荷(单位:N)

2 结果

2.1 滑膜样细胞的鉴定

BMSCs传代培养初期可见大量悬浮细胞,48h后可见有散在纺锤形贴壁细胞,经多次半量换液后,未贴壁细胞逐渐被去除。4d后可见成簇、贴壁的纺锤形细胞逐渐增多,但仍存在混杂细胞。经多次传代后,细胞逐渐纯化,并且细胞初期多以集落形式增长,第6代后细胞呈形态均一的纺锤形,分布均匀。

在bFGF-2、关节滑液等诱导条件下,BMSCs逐渐向滑膜样细胞形态分化。……