兔抗B16黑素细胞多克隆抗体的制备及对黑素细胞增殖的影响①

陈菊萍 马 樱 罗志娟 魏大鹏 (扬州大学第二临床医学院皮肤性病科,扬州 225001)

色素减退性疾病白癜风是严重影响患者生活质量的一种疾病,其发病机制目前未完全明了,许多研究表明可能和自身免疫有很大关系[1-5],但自身免疫是初始原因还是继发原因,一直未有定论,也有研究表明和遗传、自由基对细胞的损伤等有关。

本实验通过制备兔抗B16黑素细胞多克隆抗体,利用免疫组织化学和 Western blot鉴定多克隆抗体;并通过亲和层析法纯化抗血清,得到IgG,检测其对黑素细胞增殖的影响,为进一步研究此抗体对黑素细胞生长及色素代谢的影响奠定基础,从另一方面探讨免疫因素特别是自身免疫在色素减退性疾病白癜风发病机制中所起的作用,为寻找白癜风的动物模型打下了基础。

1 材料和方法

1.1 材料 健康家兔,雄性,体重2 kg,四川大学华西实验动物中心提供。B16黑素细胞购自中国科学院上海生命科学研究所,辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG,生物素化山羊抗兔IgG等试剂购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.2 方法

1.2.1 B16黑素细胞培养、收集、爬片及固定 B16黑素细胞复苏后,使用含10%小牛血清的1640培养基于37℃、5%CO2条件下常规培养。收集对数生长期的黑素细胞,接种入6孔板,每孔加入4%多聚甲醛1 ml,固定后室温保存备用。

1.2.2 B16黑素细胞颗粒性抗原免疫家兔 经75%酒精固定后的B16黑素,Hank's液离心清洗细胞,最后用生理盐水悬匀成5×107ml-1免疫用B16黑素细胞混悬液。经家兔耳缘静脉注射B16免疫用黑素细胞混悬液1.0ml做第一次免疫。……