Rho激酶抑制剂Y-27632对胶质瘤细胞生长与迁移能力的影响

薛进展,范 波,邢群智,李 涛

胶质瘤约占中枢神经系统原发性肿瘤的40%,对化疗、放疗不敏感。由于其良恶性的相对性,造成手术全切除率低、复发率高[1]。因此,能否抑制胶质瘤的局部浸润成为提高胶质瘤手术全切除率的关键。近年来发现细胞Rho/ROCK信号转导通路在细胞骨架重组、细胞运动、黏附、增殖、凋亡、转化、细胞周期进展以及恶性肿瘤细胞的浸润和转移等方面具有重要的调节作用[2]。 Rho亚家族是一组分子量为20 ～30 kD的鸟苷酸核结合蛋白,具有GTP酶活性。它的最重要的效应因子是Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(Rho associated coiled coil forming protein kinase),简称Rho激酶或ROCKS。本研究利用Rho激酶特异性抑制剂Y-27632作用于体外培养的U87胶质瘤细胞, 探讨Rho/ROCK信号系统在U87胶质瘤细胞生长、迁移中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料人U87胶质瘤细胞株购于中国科学院上海细胞生物研究所, DMEM培养基、0.25%胰蛋白酶、DMSO购自美国Sigma公司,胎牛血清购自杭州四季青公司, Y-27632 购自美国Santa Cruz公司,Transwell培养板购自美国Corstor Corning公司, Rho-Kinase活性测定试剂盒购自日本Cyelex公司,超净工作台为苏州净化集团空气技术公司产品,二氧化碳培养箱为美国Harris公司产品,倒置显微镜为日本Nikon公司产品。

1.2 实验分组实验分为对照组与实验组,实验组中Y-27632浓度分别为5、10、25、50、100 μmol/L。

1.3 细胞培养人U87胶质瘤细胞系,购自中国科学院上海细胞生物研究所。培养基为含10%胎牛血清、100 U青霉素、100 U链霉素的DMEM高糖培养基,于37℃、5%CO2培养箱内培养。

1.4MTT法检测Y-27632对U87胶质瘤细胞生长的影响细胞进入对数生长期后,倒去细胞培养液,用0.25%胰酶消化细胞1 min,然后加入10 m L培养液。……