线形程序性坏死在不同肿瘤局部微环境中分布的初步观察*

刘艳荣 古 强 张丹芳 孙 涛 张诗武 赵秀兰 韩春荣 孙保存

经典理论认为，细胞凋亡是程序化的主动死亡过程[1]，而细胞坏死则是突发性的、被动的死亡形式[2]。目前研究表明,在某些情况下坏死也可能是群体细胞在基因调控下发生的主动性死亡过程[3]。在小鼠黑色素移植瘤HE染色切片中可观察到肿瘤组织内出现线形分布或网状分布的一群胞核深染、胞浆浓缩且细胞间彼此分离的瘤细胞，这些条带结构按一定的空间距离分布且彼此连接，免疫组化和电镜观察结果提示这些瘤细胞可能为肿瘤细胞的一种特殊的程序性死亡形式，笔者将其命名为“线形程序性坏死”（linearly patterned programmed cell necrosis，LPPCN）[4]。本研究通过建立荷瘤小鼠缺血模型和生物力学模型，初步探讨肿瘤局部微环境对肿瘤细胞发生LPPCN的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物和细胞系 实验动物采用6~8周龄，20~22 g，C57BL小鼠，雄性，SPF级，购自中国医学科学院实验动物研究所；鼠源性黑色素瘤细胞B16（C57BL/6小鼠来源黑色素瘤）单细胞悬液由天津医科大学病理教研室提供。

1.2 方法

1.2.1 制作小鼠缺血后肢移植瘤模型 腹腔注射氯氨酮40 μL麻醉小鼠。乙醇消毒小鼠局部皮肤,在其左侧鼠蹊部横行切开小鼠皮肤分离肌肉,见股动脉及其分支。游离左侧股动脉主干,6.0号丝线分别结扎股动脉远端和近端,从中间剪断股动脉,4.0号丝线毯边缝合伤口,碘伏清洁伤口。股动脉结扎术后5 h,取冻存B16单细胞悬液,复苏后将0.2 mL瘤细胞悬液(注射细胞数为0.2×107)接种至小鼠左右后肢。接种时由小鼠大腿向脚踝方向进针,以防瘤细胞接种至鼠蹊部。……