黄芪总黄酮对佐剂性关节炎模型大鼠IL-4、IFN-γm RNA表达影响的研究*

陕西中医学院(咸阳 712046)杨晓航 史传道 叶峥嵘 贾文鹏

类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一种以关节滑膜炎为特征的自身免疫性疾病,目前认为辅助性 T细胞(Th)亚群 Th1与 Th2及其分泌的细胞因子平衡紊乱和失调是 RA发病的重要因素[1]。黄芪总黄酮(Flavonoids of ast ragalus,TFA)是中药黄芪茎叶中提取的有效成分中含量较高的一类单体组分。本次研究是在前期 TFA对 Th1与 Th2相关细胞因子白介素 4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)血清含量影响的研究基础上[2],进一步开展的 TFA对模型大鼠外周血单个核细胞(PBMC)分泌的 IL-4、IFN-γ转录水平影响的研究。

材料与方法

1 实验动物及分组 Waster大鼠 30只,雄性,10～12周龄,体重约 150～180g,购自第四军医大学实验动物中心。将 30只大鼠随机分为正常组、模型组、实验组(治疗组),每组 10只。

2 主要仪器与试剂 PCR扩增仪(美国 ABI公司 2720型扩增仪),凝胶图像分析系统(美国 Bio-Rad公司);Trizol(Invitrogen公司),逆转录酶 M-MLV试剂盒 (美国 GIBCO),Taq DNA聚合酶、d NTP(Promega公司),RPMI1640(Hy Clone产品 ),淋巴细胞分离液(d=1.083,中国医学科学院生物医学工程研究所生产),引物由上海生工生物公司合成。TFA由成都科伦药物研究所提供,完全弗氏佐剂(FCA,购自美国 GIBCO),DNA Marker为 DL2000(宝生物公司 )。

3 动物模型制备及处理 适应性喂养 3 d后,在乙醚轻度麻醉下,用微量注射器于右后足跖皮内注射环磷酰胺(FCA)0.1 ml,约 14 d左右可诱发成功佐剂性关节炎模型[3]。模型组:上法造模成功后,第 15 d生理盐水灌胃 3 m1/次,1次 /d,连续 14 d;治疗组:上法造模成功后,TFA 250mg/kg体重灌胃,3 m1/次,1次/d,连续 14 d;正常组:适应性喂养结束后,用生理盐水灌胃 3m1/次 ,1次 /d,连续 28 d。

4 外周血 PBMC分离方法 在超净台中,按无菌操作分离 PBMC细胞。步骤如下:①取 1 ml肝素……