自动分析方法测定血浆维生素C

张静春,石晓群,林 伟,荣墨克*

(1.吉林大学中日联谊医院 检验科,吉林 长春 130033;2.吉林大学中日联谊医院放疗科,吉林 长春 130033;3.吉林大学中日联谊医院 康复科,吉林 长春 130033)

自动分析方法测定血浆维生素C

张静春1,石晓群2,林 伟3,荣墨克1*

(1.吉林大学中日联谊医院 检验科,吉林 长春 130033;2.吉林大学中日联谊医院放疗科,吉林 长春 130033;3.吉林大学中日联谊医院 康复科,吉林 长春 130033)

*通讯作者

维生素C(Vitamin C,Vc)是人体内重要的水溶性氧化剂,其作用是清除体内自由基,防止及降低致病基因的突变,减少生物协同因子和基质的作用[1-3]。血清Vc的水平反映人体内生物反应的变化过程,对估价体内的营养水平有重要参考价值。Vc的测定方法有HPLC和化学法等[4,5],均不适于临床常规应用,通过应用抗坏血酸氧化酶使抗坏血酸变成脱氢抗坏血酸,与邻苯二胺呈显色反应,用自动生化分析仪,快速,准确地测定血浆Vc含量。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂 Beckman Synchron CX9自动生化分析仪。抗坏血酸(AA),抗坏血酸氧化酶(AO),邻苯二胺(OPDA),偏磷酸(MPA),二硫苏糖醇(DTT)均购自Sigma公司,磷酸氢二钠,磷酸二氢钠购自北京化工厂。

1.2 试剂配制 ①蛋白沉淀剂贮存液(MPA 5.0 mol/L/DTT 51.2 mmol/L):称取MPA 400 g,DTT 800 mg加水至 100 ml;蛋白沉淀剂应用液(MPA 500 mmol/L/DTT 5.12 mmol/L):将贮存液用蒸馏水稀释10倍。②抗坏血酸标准贮存液(2.84 mmol/L):精确称取AA 50 mg,加MPA/DTT液至 100 ml;抗坏血酸标准应用液:将贮存液用MPA/DTT液稀释成283、113、56.6 和 5.68 μ mol/L。 ③磷酸盐缓冲液(0.10 mol/L):称取NaH2PO41.155 g,Na2HPO4◦7H2O 388.5 mg,加80 ml蒸馏水,调酸碱度至pH 6.5,再以蒸馏水稀释至100 ml。④抗坏血酸氧化酶贮存液(200 kU/L):按购买的AO活性单位以磷酸盐缓冲液溶解AO至200 kU/L;抗坏血酸氧化酶应用液(8 kU/L):取100 μ l贮存液以2.4 ml磷酸盐缓冲液稀释。……