IKKβ真核表达载体的构建及表达

张冬梅,杨媚婷,刘 瑛,于春雷,乌 垠,李玉新,,鲍永利*

(1.东北师范大学药物基因和蛋白筛选国家工程实验室,吉林长春 130024;2.东北师范大学 生命科学学院;3.白城市中心医院)

IKKβ真核表达载体的构建及表达

张冬梅1,杨媚婷2,刘 瑛3,于春雷1,乌 垠1,李玉新1,2,鲍永利1*

(1.东北师范大学药物基因和蛋白筛选国家工程实验室,吉林长春 130024;2.东北师范大学 生命科学学院;3.白城市中心医院)

目的构建核转录因子κ B抑制蛋白激酶(inhibitor of kappa B kinase,IKK)β真核表达载体,以便进一步探讨其生物学作用。方法从人正常肝细胞L02中提取RNA,并利用IKKβ特异性引物通过RT-PCR方法扩增了IKKβ cDNA,并克隆入pcDNA3载体中,构建重组载体pcDNA3-IKKβ。将重组载体转染入HEK293细胞中,并通过免疫印迹方法检测IKKβ的表达。结果酶切及测序结果显示,重组质粒构建成功;免疫印迹结果显示,瞬时转染重组质粒的人胚肾细胞HEK293中可有效表达IKK β。结论本研究成功构建了IKK β真核表达载体,并能够在真核细胞中进行表达,为进一步研究IKKβ的生物学功能奠定了基础。

IKK β;载体构建;真核表达

(Chin J Lab Diagn,2010,14:0977)

近年来的研究表明,核转录因子κ B(nuclear factor-kappa B,NF-κ B)通过调控多种基因的表达,参与细胞生长、发育、凋亡等多种生理功能,并在细胞恶性转化、纤维化等方面起重要作用[1]。NF-κ B抑制蛋白激酶(inhibitor of kappa B kinase,IKK)β 是NF-κ B激活通路中的关键激酶。外部刺激因子如TNF-α、IL-1、LPS、双链 RNA 和病毒通过激活 IKK[2],诱发Iκ B 的磷酸化而降 解失活 。NF-κ B 失去 Iκ B 抑 制而活化,从细胞质转移到细胞核内,与靶基因κ B位点结合,迅速诱导靶基因的转录[3,4],包括负反馈机制的自身抑制蛋白 Iκ Bα和 Iκ Bβ、各种细胞因子和趋化因子、抗凋亡基因、c-myc和 cyclin D1等,从而影响免疫、炎症和细胞周期调控等[5]。……