NF-κB(P65)/CyclinE通路在大鼠慢性萎缩性胃炎发生机制中的作用

杨岚岚,王术丰,刘连昌

(1.吉林大学第二医院消化科介入病房,吉林 长春 130041;2.榆树市周学综合门诊)

NF-κB(P65)/CyclinE通路在大鼠慢性萎缩性胃炎发生机制中的作用

杨岚岚1,王术丰2,刘连昌1

(1.吉林大学第二医院消化科介入病房,吉林 长春 130041;2.榆树市周学综合门诊)

近年来在许多肿瘤中发现,细胞周期蛋白E的表达增强与肿瘤的进展、预后有关[1,2],同时它又是NF-κ B(P65)的靶基因。本研究通过检测慢性萎缩性胃炎(CAG)动物模型胃粘膜上皮细胞中NF-κ B(P65)和细胞周期蛋白E(Cyclin E)的表达,以探讨NF-κ B信号转导通路在CAG发生机制中的作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物

清洁级成年雄性Wistar大鼠(由吉林大学白求恩医学院动物中心提供)20只,体重150-200 g。随机分为模型组(n=14)及对照组(n=6),室温23±2℃,自由进食和饮水。每日光照12 h。

1.2 模型制备及分组

制备大鼠慢性萎缩性胃炎模型[3]。对照组:不附加任何条件,清洁自来水自由饮用,标准饲料饲养,共6个月。实验结束时迅速断头处死已经成模大鼠及对照组大鼠并取胃粘膜,置于-80℃保存备用。

1.3 仪器与试剂

DEPC、Trizol(Sigma)、Oligo(dT)、dNTP、Taq 酶 、M-MuLV逆转录酶、DL2000 DNAMarker及琼脂糖均购自宝泰克生物试剂公司。TUNEL试剂盒,北京金桥生物技术有限公司。

1.4 胃粘膜上皮细胞中NF-κ B和cyclin E mRNA的表达

按Trizol试剂说明书进行总RNA的提取,逆转录合成cDNA。以逆转录产物cDNA为模板,根据文献报道,分别使用由北京紫金生物公司合成的引物进行PCR反应,其序列见表1。

PCR总反应体积为25 μ l,共30个循环,产物以1.5%的琼脂糖进行凝胶电泳检测。

1.5 TUNEL法检测细胞凋亡

每组各3只大鼠按照TUNEL试剂盒说明书,进行细胞凋亡检测操作,在共聚焦显微镜400倍下选择5个有代表性的视野,拍照,计数。……