含H5N1禽流感病毒核酸序列的病毒样颗粒的制备及应用*

戚宇华,崔仑标,史智扬,葛以跃,李 显,张文帅,单 军,汪 华

含H5N1禽流感病毒核酸序列的病毒样颗粒的制备及应用*

戚宇华,崔仑标,史智扬,葛以跃,李 显,张文帅,单 军,汪 华

目的构建耐RNase酶的内含禽流感病毒 H5N1亚型部分核酸序列的病毒样颗粒。方法构建中间载体pET32a-MS2,将禽流感病毒H5N1亚型的HA、NA和M基因片断连接到中间载体上,构建原核表达载体pET32a-MS2-HA,pET32a-MS2-NA和pET32a-MS2-M,分别转化宿主菌,诱导表达制备病毒样颗粒。结果表达载体经PCR、酶切鉴定和测序分析后证实构建成功。电镜观察到了病毒样颗粒,荧光定量RT-PCR试验表明颗粒稳定性良好。结论成功构建了含禽流感病毒H5N1部分核酸序列的病毒样颗粒且稳定性良好,可作为禽流感H5N1亚型RNA检测的标准品和质控品。

MS2噬菌体;禽流感病毒 H5N1;病毒样颗粒;原核表达

近年来禽流感病毒在世界范围内的流行引起了人们的高度重视,每年冬春季是禽流感爆发的高峰期,其中H5N1亚型的死亡率特别高,为高致病性禽流感病毒〔1-2〕。除禽类外它可以感染包括人在内的许多哺乳动物〔2-3〕。2009年初,中国就出现了8例人感染禽流感H5N1亚型的散发病例,其中5人死亡,给人民生命财产造成重大危害。对禽流感病毒的快速实验室检测并确诊,对于挽救病人生命,及时处理续发病例,有效控制疾病的流行起着非常重要的作用。目前,世界各国广泛应用RT-PCR的方法来检测禽流感H5N1亚型病毒感染的临床标本〔3-4〕。然而RNA病毒在PCR基础上的定性和定量检测中,常会有假阴性的出现,在临床检测中人们关心的是检测试剂盒中的阳性是否有传染性,或者能否起到全程监控的作用。……