富集文库-菌落原位杂交法筛选仿刺参微卫星标记

卢 超,包振民,彭 薇,鄢婧婧,吕雅萌,胡景杰

(中国海洋大学海洋生物遗传育种教育部重点实验室,海洋生命学院,山东青岛266003)

富集文库-菌落原位杂交法筛选仿刺参微卫星标记

卢 超,包振民,彭 薇,鄢婧婧,吕雅萌,胡景杰＊＊

(中国海洋大学海洋生物遗传育种教育部重点实验室,海洋生命学院,山东青岛266003)

应用微卫星富集文库—菌落原位杂交的方法,筛选得到了33个仿刺参的微卫星标记。富集文库中900个重组克隆经过菌落原位杂交后,415个(46.1%)为阳性克隆。随机挑取100个阳性克隆进行测序,结果显示这些克隆都含有微卫星位点。设计了57对特异性PCR引物,33对能扩增出清晰的条带。利用48个野生仿刺参个体对33个微卫星位点进行评价,结果显示位点都具有多态性。33个多态位点共获得222个等位基因,平均每个位点获得6.7个等位基因。观测杂合度(Ho)和期望杂合度(He)的范围分别为0.050 0～1.000 0和0.203 2～0.915 9。结果表明,富集文库—菌落原位杂交法筛选微卫星标记比较高效,获得的微卫星标记可以用于仿刺参的分子遗传学研究。

仿刺参;富集文库;菌落原位杂交;微卫星标记;多态性

仿刺参(A postichopus japonicus)又名刺参,是食用海参中最为名贵的一种,主要分布于我国北方、日本、朝鲜半岛及俄罗斯的远东地区[1]。近些年来,刺参的市场消费量逐年增加,刺参养殖业也得到迅猛发展, 2008年我国的刺参总产量达到9万t,经济总产值超过200亿元,刺参养殖业已经成为我国海水养殖的支柱产业之一。良好的苗种是刺参养殖业健康发展的保障,而传统的育种方法有其局限性。……