人参与五灵脂配伍后药效及有效成分分析

李艳玲,梁 鹤

(1.郑州牧业工程高等专科学校药物工程系,河南郑州450011;2.河南中医学院,河南郑州450008)

人参,五加科植物人参(Panax ginseng C.A Mey)的干燥根,传统名贵药材,其用药已有两千多年的历史。其中人参皂苷是公认的有效成分,具有增强免疫力、抗肿瘤、抗衰老、益智、强心等药理学作用。人参与五灵脂配伍为传统中药“十九畏”内容之一,近年来,有些人从药理、临床方面对这两组中药的配伍进行研究,研究的结果存在分歧。有人认为五灵脂和人参配伍可以增强疗效;有人认为五灵脂的加入降低了人参的药效。为了进一步了解人参、五灵脂配伍实质,本试验通过药效学比较和有效成分分析,初步观察了人参和五灵脂配伍的相关问题。

1 试验材料

高效液相色谱仪(Waters2695,美国Waters公司),电磁炉,恒温水浴锅,恒温培养箱,粉碎机,酸度计,分析天平;人参、五灵脂(安徽亳州药材市场购得,经河南中医学院曹继华教师鉴定均为正品)。人参皂苷 Rg1(批号：110703-200424)、Rb1(批号：110704-200420)、Re(批号：110754-200421)均由河南省药品检定所提供。实验动物：昆明系小鼠。

2 药理试验方法与结果

2.1 抗疲劳试验 健康小鼠50只,体重18～22 g,雄雌各半,随机均分5组,分别灌胃生理盐水、1 g/mL人参、1 g/mL人参五灵脂混煎液(1∶1)、1 g/mL人参五灵脂混煎液(1∶2),1 g/mL人参五灵脂混煎液(2∶1),每日2次,连续7 d。试验时,在动物尾部负重(重量为体重的 1/10),置入水深19 cm、水温10℃的水槽中,测其游泳时间,结果见表1。

表1 人参及其与五灵脂配伍对小鼠游泳时间的影响

2.2 常压耐缺氧试验 动物、给药方法同试验2.1。试验时,将动物置入150 mL磨口瓶中(内置5 g钠石灰),记录小鼠缺氧死亡时间,结果见表2。

2.3 对幼鼠免疫器官重量的影响 健康小鼠50只,体重 13～15 g,分组及给药同试验 2.1,试验时摘眼球放血处死,称体重,摘出胸腺及脾脏称重,以胸腺或脾脏重量(mg)与体重(g)之比作为胸腺或脾指数,结果见表3。

表2 人参及其与五灵脂配伍对小鼠耐缺氧时间的影响

3 人参皂苷含量测定方法与结果

3.1 样品制备 精确称取人参5 g,分别加入2.5 g、5 g、10.0 g的五灵脂。加150 mL水浸泡45 m in,煎煮两次,每次1 h,离心,合并上清液,浓缩至干,加150 mL甲醇超声1 h,滤去药渣,浓缩,定容至25 mL量瓶中,备用。药渣加 150 mL甲醇超声1 h,滤去药渣,浓缩,定容至25mL量瓶中,备用。

表3 人参及其与五灵脂配伍对小鼠脾脏及胸腺指数的影响

3.2 对照品的制备 精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品及人参皂苷Rb1对照品,加甲醇制成每1mL各含0.2mg的混合溶液,摇匀,即得。

3.3 色谱条件 以十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂,以乙腈为流动相A,以水为流动相B,按表4进行梯度洗脱;检测波长为203 nm,理论塔板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于6 000。

表4 色谱条件

3.4 线性关系考察 精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品及人参皂苷Rb1对照品,加甲醇制成每1mL各含0.2mg的混合溶液,按上述色谱条件分别进样 4.0μL、8.0μL、12.0μL、16.0 μL、20.0 μL,记录峰面积,以峰面积为纵坐标,人参皂苷的进样量为横坐标作标准曲线,计算回归方程,结果人参皂苷Rg1的回归方程为y=-664x+905 000,相关系数r=0.999 8,线性范围0.24～6.32 μg;人参皂苷Re的回归方程为y=4 720x-154 000,相关系数r=0.999 4,线性范围0.21～5.10μg;人参皂苷Rb1的回归方程为y=5 110x-172 000,相关系数r=0.999 9,线性范围0.13～4.32μg。

3.5 样品的测定 精密吸取各样品溶液10.0μL注入液相色谱仪,测定,结果见表5、表 6。

4 讨论

人参与五灵脂配伍是传统的“十九畏”内容之一,两者伍用会降低人参的疗效。我们通过药理学试验也证实了这一传统内容。从药理试验结果可以看出,单独服用人参,均可以延长小鼠的抗疲劳时间和耐缺氧时间,和生理盐水组相比均有极显著差异(P＜0.01)。人参还可以增加脾脏指数和胸腺指数,和空白组相比有显著性差异(P＜0.05)。但人参和五灵脂配伍以后,无论剂量是1∶1、1∶2还是2∶1,其抗疲劳时间和耐缺氧时间还是脾脏指数和胸腺指数与生理盐水组相比均没有显著差异。

表5 人参及其与五灵脂配伍上清液中人参皂苷含量

表6 人参及其与五灵脂配伍药渣中人参皂苷含量

在药理试验的基础上,我们又对其起作用的物质基础化学成分进行了分析。人参中主要发挥药理作用的是人参皂苷Rg1、Re和Rb1,我们主要观察了这3个成分的存留位置和量的变化。在上清液中,人参和五灵脂配伍以后,和单独人参水煎液相比,人参皂苷Rg1、Re和Rb1的量急剧下降,单独人参上清液中Rg1、Re的量是人参和五灵脂配伍以后的4～5倍,而Rb1在人参五灵脂1∶2配伍以后,上清液中已经检测不到了。人参和五灵脂配伍后,这3种人参皂苷的含量下降可能有如下原因：(1)五灵脂中的某些化学成分抑制了人参皂苷的溶出,使部分皂苷留在了药渣中。(2)五灵脂中的某些物质和人参皂苷发生了反应,破坏了人参皂苷。因此,我们也观察了药渣中这3种皂苷的含量,发现单独人参的药渣有一定量的人参皂苷存在,但和五灵脂配伍以后,药渣中Rg1的量配伍后是不配伍的2倍多,而Re和Rb1在药渣中根本检测不到,在图谱中显示出现了几个原来没有的峰,可能是五灵脂中的某些成分破坏了人参皂苷Re和Rb1,又形成了其他的化合物。由此可以看出,五灵脂和人参配伍后,五灵脂一方面抑制了人参皂苷的溶出,另一方面对人参皂苷也有破坏作用,从而影响了人参的疗效。因为五灵脂中的成分比较复杂,究竟是哪些成分抑制或破坏了人参皂苷,还需要进一步的研究。