秀丽隐杆线虫体内脂滴的油红O染色观察

姬云涛，王亦舒，李星辰，屈长青

(1.抗衰老中草药安徽省工程技术研究中心，安徽 阜阳 236041;2.安徽师范大学 生命科学学院，安徽 芜湖 241000)

秀丽隐杆线虫体内脂滴的油红O染色观察

姬云涛1，王亦舒2，李星辰1，屈长青1

(1.抗衰老中草药安徽省工程技术研究中心，安徽 阜阳 236041;2.安徽师范大学 生命科学学院，安徽 芜湖 241000)

目的 通过油红O染色对秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)肠道脂类物质沉积的形态学变化进行观察。方法 在NGM培养基中加入油红O染液，对正常生理状态中的秀丽隐杆线虫体内的脂滴进行染色。结果72 h后发现线虫的肠道普遍被染成红色。结论 油红O染液可以对活体线虫的脂滴进行染色，为后续研究线虫脂肪沉积的调控机制奠定基础。

秀丽隐杆线虫;油红O;脂滴;染色

秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)属于线虫动物门、线虫纲动物，是研究发育生物学、神经生物学和老年衰老学的理想模型生物［1］。两性成虫只有959个体细胞，雄性成虫只有1 031个体细胞。其肠道是由咽和肠两部分组成，是脂类物质沉积的主要场所，由于线虫虫体透明，所以在显微镜下可以很清楚地看到从头部到尾部的整个肠道。

脂肪是重要的生命物质，但脂肪过多对动物也会带来很大的危害。所以对动物体内的脂肪组织进行分析研究具有极为重要的意义。油红O为脂溶性染料，在脂肪内能高度溶解，进而着色，能较好的显示组织中的脂肪滴［2］。本文以油红O为染色试剂，对秀丽隐杆线虫体内的脂肪组织进行染色，为后续研究线虫脂肪沉积的调控机制奠定基础。

1 材料

N2野生型秀丽隐杆线虫，由中科院等离子体物理研究所吴李君研究员惠赠;大肠杆菌OP50作为秀丽隐杆线虫的食物。种子培养基、NGM培养基和各种缓冲液的配制参照文献［3］。

油红O染液:取油红0.1 g，加磷酸三乙酯至100 mL，放入60℃水浴中加温溶解30 min，配成油红O储备液。取油红O储备液与饱和β-环糊精溶液1∶1混合配制成工作液，用微孔滤器过滤除菌后备用。

2 方法

2.1 大肠杆菌(E.coil)的培养

从冰箱中取出静置保存的大肠杆菌悬液，振荡，接种于盛有种子培养基的锥形瓶中，放入37℃振荡培养箱中培养过夜。

2.2 虫体的培养

线虫于16℃下采用标准程序培养于NGM琼脂糖培养皿［3］中。

2.3 虫体的染色

用冰M9缓冲液将虫体洗下，置于4℃，20 min，弃上清，沉淀物用M9缓冲液重悬后置于4℃，20 min，弃上清。取沉淀物 200μL与油红 O染液600μL混合后，接种于涂有大肠杆菌OP50的NGM培养基中，置于16℃生化培养箱中培养72 h后，取1%盐酸四咪唑溶液10μL滴于NGM平板的虫体上，约5 min虫体麻醉后，用M9缓冲液将虫体洗下，置于载玻片上，观察，拍照。

3 结果

72 h后，将麻醉后虫体置于显微镜下观察发现线虫的肠道普遍被染成红色(图1A)，而没有染色的对照组线虫则为透明的(图1B)。

4 讨论

秀丽隐杆线虫是一种较为理想的模式生物，身体透明，利用其作为生物学实验对象有着非常明显的优势。肠道是线虫一个比较典型的器官，也是其脂肪沉积的主要场所，由均匀对称、排列在管腔内表面的20个大上皮细胞构成，每对细胞都可以形成一个肠环。Kimura等［4］用苏丹黑染色观察到其体内的脂滴(呈黑色)，Ashrafi等［5］用荧光染料尼罗红和BIDIPY也获得较好的脂滴图像，但目前尚未见用油红O对线虫脂肪染色观察的报道。油红O属于偶氮染料，难溶于水，是一种很强的脂溶剂和染脂剂，与甘油三酯结合呈红色小脂滴状，在研究脂肪细胞增殖与分化中具有非常直观的优势［6］。因其难溶于水，所以在染色过程中易形成结晶，经过摸索与实践，我们把油红O与β-环糊精溶液混合，经β-环糊精包合后，染色，获得理想的效果，证明线虫体内的脂滴亦可用油红O染色，本实验为后续研究线虫脂肪沉积的调控机制奠定了基础。

图1 秀丽隐杆线虫油红O染色图(×100)Fig.1 Morphology of C.elegans( ×100)

［1］Brenner S.The genetics of Caenorhabditis elegans［J］.Genetics，1974，77:71-94.

［2］屈长青，张国华，陈粉粉，等.猪前体脂肪细胞的原代培养［J］.农业生物技术学报，2005，13(5):649-653.

［3］庞林海，杜爱芳，李孝军，等.秀丽隐杆线虫培养特性与保存方法研究［J］.浙江农业学报，2007，19(1):34-36.

［4］Kimura K D，Tissenbaum H A，Liu Y，et al.daf-2，an insulin receptor-like gene that regulates longevity and diapause in Caenorhabditis elegans［J］.Science，1997，277:942-946.

［5］Ashrafi K，Chang F Y，Watts JL，et al.Genome-wide RNAi analysis of Caenorhabditis elegans fat regulatory genes［J］.Nature，2003，421:268-272.

［6］屈长青，李东伟，朱茂英.一种改进的培养脂肪细胞染色法［J］.中国组织化学与细胞化学杂志，2008，13(3):329-330.

Visualization of fat droplets of Caenorhabditis elegans

JI Yun-tao1，WANG Yi-shu2，LI Xing-chen1，QU Chang-qing1
(1.Engineering Technology Research Center of Anti-aging Chinese Herbal Medicine，Fuyang 236041，China;2.School of Life Science，Anhui Normal University，Wuhu 241000，China)

R965.1

A

1005-1678(2011)02-0141-02

2010-03-12

安徽省高校省级优秀青年人才基金资助项目(No.2010SQRL142)

姬云涛，女，博士，副教授;屈长青，通信作者。