肝癌细胞中IL-18表达及其调控机制的研究

杨贤子 程甜甜 骆志国 蒋 飞 柴海霞

白介素18(IL-18)具有强烈诱导IFN-γ的能力，能够促进Th1细胞的分化和Th1细胞因子的产生。无活性的IL-18前体(24 kD)需要经过IL-1β转化酶(ICE，caspase-1)的剪切才能形成有活性的成熟IL-18(18 kD)[1]。IL-18前体还可以通过粒细胞蛋白水解酶(PR-3，proteinase-3)的酶切产生活性。但IL-18前体若被caspase-3剪切则失去生物学活性[2]。近年来研究发现，IL-18通过巨噬细胞、NK细胞和T细胞产生其他抗肿瘤因子，加强机体对肿瘤的免疫力，在抗肿瘤免疫调节中备受关注，在临床应用中有重要价值。本研究旨在观察IL-18及其相关的正负调节基因在正常人类肝细胞和肝癌细胞中表达情况，从而进一步阐述IL-18在人类肝癌细胞中的作用机制，为原发性肝癌的基因治疗提供新的靶点和理论依据。

1 材料与方法

1.1 细胞株

正常人类肝细胞株QSG-7701(来源于一位女性肝癌患者的癌旁组织)，购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库。人类原发性肝癌细胞株MHCC97-L和HCCLM3，由武汉大学中南医院肿瘤防治研究中心免费提供。这3种人类细胞株均培养于含10%胎牛血清(杭州四季青生物公司)、100 U/ml青霉素和100 mg/ml链霉素的RPMI-1640培养液中(GIBCO公司)，培养条件为37℃，体积分数为5%CO2。

1.2 RT-PCR检测细胞株中IL-18及其正负调节基因mRNA的表达

应用Primer Premier 5.0软件，设计目的基因和内参照基因GAPDH的PCR反应引物。引物序列和PCR反应条件(表1)，均由上海生工生物工程公司合成。QSG-7701、MHCC97-L和HCCLM3细胞株，均以每瓶2×106个细胞接种于标准的培养瓶中。当细胞处于对数生长期时，按照Trizol试剂(MRCGENE公司)说明书提取细胞总RNA，紫外分光光度法检测RNA纯度和浓度后，按照RevertAid First Strand cDNA Synthesis成套试剂盒(MBI Fermentas公司)操作合成cDNA。……