GDNF在先天性肺囊性腺瘤样畸形中的表达及其意义

周玲玲，王宗敏，赵志光，王利群

（1.温州医学院附属第二医院 病理科，浙江 温州 325027；2.西安市第四医院 病理科，陕西 西安710000）

先天性肺囊性腺瘤样畸形（congenital cysticadenomatoid malformation of lung，CCAM）是一种较少见但严重影响儿童肺组织发育的先天性肺组织畸形。CCAM的确切病因尚不完全清楚，目前国际国内对其临床和影像诊断的报道比较多，而对于其发病机制的研究鲜见报道。本研究通过观察CCAM组织中胶质细胞源性神经营养因子（Glial cell line derived neutrotrophic factor，GDNF）和细胞增殖指数（Ki-67）的表达，从临床病理学和分子生物学角度讨论其在CCAM病理诊断、病理分型及发生、发展过程中的作用及其相关机制。

1 材料和方法

1.1 材料 CCAM组标本为2000-2008年我院及浙江省儿童医院年龄≤15岁CCAM患者（CCAM组）手术切除标本的存档蜡块58例（CCAM I型35例，CCAM I I型15例，CCAM I I I型8例）。同时取同期我院因其他疾病尸检的儿童肺组织10例作为对照组1（CG1组），CCAM囊肿周围相对正常肺组织10例作为对照组2（CG2组）。切片均由主任医师复诊确认。

1.2 试剂 标本用10%中性甲醛固定，常规脱水、石蜡包埋，切片厚度为4 μm。浓缩型兔抗GDNF多克隆抗体购自美国Santa Cruz生物技术公司；免疫组化EliVision法检测试剂盒和DAB显色剂购自福州迈新生物技术开发公司；GDNF原位杂交检测试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司；Ready-touse PCR kit 购自BIO BASIC INC；GDNF mRNA的多相寡核昔酸探针序列为：①5’-CGGGC AGCGG GAAGG CGGAC GCGGT GTGGA-3’；②5’-GCATA TTTGA GTCAC TGCTC AGCGC GAAGG-3’；③5’-TTGGT TTCAT AGCCC AGACC CAAGT CAGTG-3’。 引物参照人的GDNF基因（GenBank收录号为L19063）用引物设计软件Primer Premier 5.0自行设计，序列为GDNF，扩增长度为453 bp，引物如下：上游引物：5’-CGC AGG GAG CCC AGG CTT AAC-3’，下游引物：5’-CAA ACC AGC GCG TGT CAC T-3’；β-actin：上游引物：5’-CGT GGACA TCCGCAAAGAC-3’，下游引物：5’-CATC TGCTGGAA GGTGGACAG-3’。GDNF引物及β-actin引物，由上海生物工程公司合成。

1.3 方法 免疫组化和原位杂交操作步骤参照说明书，用已知阳性片作为阳性对照，用PBS缓冲液液取代一抗和探针杂交液作为阴性对照。……