荧光光谱法研究橙皮甙与牛血清白蛋白的相互作用*

尚永辉 孙家娟 刘 静 耿 薇

(咸阳师范学院化学与化工学院，咸阳 712000)

药物进入人体后首先与血清白蛋白结合,通过血浆的存储和运输,到达受体部位产生药理作用[1]。通过测定血清白蛋白的变化,可为疾病诊断、疗效观察等提供有价值的资料及数据。荧光光谱法是目前研究蛋白质与药物分子相互作用的重要手段之一。

橙皮甙(Hesperidinum)属黄酮类化合物，具有抗炎，抗病毒以及降低毛细血管脆性，防止微血管破裂出血等多种功效，是目前治疗高血压和心肌梗塞的常用药物之一。实验在pH 7.40的Tris-HCl缓冲介质中运用荧光光谱技术研究了橙皮甙与BSA的相互作用，并对其作用机理进行了初步分析。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

荧光分光光度计：RF-5301型，日本岛津公司；

电子分析天平：HA-180MF型，日本日立公司；

牛血清白蛋白(BSA)：Amresco.0930，分子量为65 000；

橙皮甙：对照品，中国药品生物制品检定所；

Tris-HCl缓冲溶液：pH 7.40；

Tris、HCl：分析纯；

实验用水为双重蒸馏水；

以Tris-HCl缓冲溶液为溶剂分别配制浓度均为1.0×10-3mol/L的BSA标准溶液和橙皮甙标准溶液，两种标准溶液均在0～4℃的冰箱中保存，实验所需浓度由此稀释而得。

1.2 实验方法

在10 mL比色管中依次加入Tris-HCl缓冲溶液2.0 mL、1.0×10-3mol/L BSA溶液0.1 mL以及一定量橙皮甙溶液，采用双重蒸馏水稀释至刻线，摇匀，分别在295、303、310、315K 4个实验温度下恒温1 h，采用1 cm石英比色皿，以285 nm为激发波长，绘制300～500 nm的荧光光谱和Δλ=60 nm，Δλ=15 nm的同步荧光光谱，测定中入射狭缝与出射狭缝宽度均为3 nm。

2 结果与讨论

2.1 荧光猝灭光谱

按照1.2方法分别测定了实验温度下橙皮甙对BSA的荧光猝灭光谱(310 K的荧光光谱见图1)。……