NCAM L1小基因模型的建立及其剪接模式研究

张 薇，沈 权，彭正羽

NCAM L1小基因模型的建立及其剪接模式研究

张 薇1，沈 权1，彭正羽2

(1.浙江大学城市学院医学与生命科学学院，浙江杭州310015;2.复旦大学生物医学研究院，上海200032)

目的：建立可用于前体mRNA可变剪接分析的NCAM L1小基因模型。方法：以人基因组DNA为模板，通过PCR扩增获得NCAM L1小基因片段，并将其克隆至真核表达载体中，构建小基因的质粒。在此基础上，用NCAM L1小基因模型转染HeLa、COS-1、PFSK及R28细胞，并用RT-PCR进行被剪接的小基因产物的半定量检测。结果：NCAM L1小基因在4种细胞中的剪接模式不同，在PFSK以及Hela细胞中，存在2种剪接亚型，而在COS-1以及R28细胞中只有一种剪接亚型存在。结论：所构建的NCAM L1小基因可用于细胞水平的基因剪接分析。

Hela细胞;质粒;遗传载体;剪接体;NCAM L1;小基因;前体mRNA;可变剪接

［JZhejiang Univ(Medical Sci)，2011，40(4):427-431.］

前体mRNA的剪接是基因表达调控中的重要环节，目前已知两种互相关联的剪接方式:组成性剪接和可变剪接［1］。在组成性剪接中，剪接位点不因细胞种类发育阶段或环境而改变，因而最终形成的基因及其表达产物也是不变的。而可变剪接则不然，通过可变剪接过程可以将前体mRNA的外显子选择性地组合、连接在一起，并最终表达出功能各异的、甚至完全相反的蛋白质亚型［2］。前体mRNA的剪接是在“剪接复合体”中进行的，剪接复合体包含snRNPs(small nuclear ribonucleoproteins)、hnRNPs(hetero-geneous nuclear ribonucleoproteins)和 SR(serine/arginine-rich)蛋白及其相关蛋白［3-4］。调控可变剪接的因素包括顺式元件和反式调节因子［5-6］。

在前体mRNA可变剪接的研究中，小基因模型是一种新发展起来的有效的研究手段［7-8］。所谓小基因是基因中的一个片段，可用于基因的功能以及表达调控机制研究，因其片段短而得名。……