补骨防疏煎剂对骨质疏松症大鼠血清骨钙素的影响

冼华，曹文富（重庆医科大学中医药学院，重庆市 401331）

补骨防疏煎剂对骨质疏松症大鼠血清骨钙素的影响

冼华＊，曹文富#（重庆医科大学中医药学院，重庆市 401331）

目的：研究补骨防疏煎剂对骨质疏松症大鼠血清骨钙素（BGP）的影响。方法：采用维甲酸ig复制大鼠骨质疏松模型，酶联免疫法检测大鼠血清BGP，并观察骨组织形态学。结果：高、中、低浓度补骨防疏煎剂可显著增高模型大鼠血清BGP含量（P＜0.01），明显改善模型大鼠骨病理形态变化。结论：补骨防疏煎剂可明显改善模型大鼠的骨质疏松症状，其机制可能与提高血清BGP水平、改善骨病理变化有关。

补骨防疏煎剂；骨质疏松症；骨钙素

骨质疏松症是一种严重威胁中老年人健康的常见骨疾病。其特征是骨量减少和（或）骨组织结构破坏，进而骨强度降低，骨脆性增加，引起全身性的骨折[1]。临床多用钙剂、活性维生素D、性激素、降钙素、双磷酸盐和氟化物等对其进行治疗，虽有一定疗效，但费用昂贵、副作用大。中药补骨防疏煎剂是临床治疗骨质疏松的经验方，具有较好疗效。为了进一步研究该方的作用机制，笔者利用维甲酸诱导制备大鼠骨质疏松模型，并用该方进行干预治疗。结果显示，该方能提高骨质疏松症大鼠血清骨钙素（BGP）的含量，刺激成骨，改善骨破坏。

1 材料

1.1 试药

补骨防疏煎剂由龟板、熟地、当归、牛膝、淫羊藿等13味中药组成，全部药材均购自重庆桐君阁大药房，经重庆医科大学中医药学院中药教研室鉴定为真品并制为浓缩液，每1mL含生药2g；维甲酸（山东良福集团制药有限公司，批号：20090405）；大鼠血清BGP试剂盒（上海西唐生物科技有限公司）。

1.2 动物

六月龄Wistar大鼠72只，♂，体重190～231g，由重庆医科大学动物实验中心提供（动物合格证号：SCXK（渝）200220001）。普通饲料饲养，自由饮水。

2 方法

2.1 模型的复制

以维甲酸70mg·kg-1ig复制骨质疏松模型大鼠，每天1次，连续2周。

2.2 分组与给药

实验分为4组，即正常对照（生理盐水10mL·kg-1）、模型对照（生理盐水10mL·kg-1）和补骨防疏煎剂高、中剂量（40、20g·kg-1）组。复制模型成功后ig给药，每天1次，分别于ig药物后4、8、12周每组各处死6只大鼠。

2.3 标本的收集

麻醉大鼠，股动脉取血，静置待血液凝固后分离血清，以2500r·min-1离心后取上清液，备用。处死大鼠后，取其L2椎体和左胫骨上端，去除软组织后置于4%多聚甲醛固定液中24h，10%EDTA/PBS（pH 7.4）脱钙后常规切片。

2.4 骨组织形态学观察

将骨组织切片行苏木精-伊红染色，光学显微镜下观察骨小梁的形态结构并照相。

2.5 酶联免疫法（双抗体夹心法）测定血清BGP

以标准品1000、500、250、100、50、0ng·mL-1的吸光度（OD）值在坐标纸上作图，制备标准曲线。将所有OD值减除空白值后根据样品OD值在该曲线图上查出相应BGP含量。

2.6 统计学方法

所有数据均使用SAS9.0统计分析软件及Excel完成统计。计量资料以±s表示；多组资料比较经检验方差齐同，采用单因素方差分析，随后的组间两两比较采用Studentnewmankeuls检验。P＜0.05为差异有显著性。

3 结果

3.1 大鼠骨组织形态学观察

维甲酸ig 2周后模型对照组大鼠骨体积、骨小梁厚度与数目均较正常对照组明显减少，骨小梁间隙明显增宽，说明模型复制成功。用补骨防疏煎剂干预后，高、中剂量补骨防疏煎剂组大鼠骨体积、骨小梁厚度与数目均较模型对照组增多，小梁间隙变窄，骨小梁明显增粗，骨小梁表面成骨细胞明显增多。大鼠骨组织形态学切片见图1。

3.2 大鼠血清BGP的变化

复制模型2周后，模型对照组大鼠血清BGP显著高于正常组（P＜0.01），表明骨质疏松大鼠模型复制成功。经药物干预后，补骨防疏煎剂高、中剂量组大鼠血清BGP值显著高于模型对照组（P＜0.05）。复制模型2周后的大鼠血清BGP值见表1；药物干预后的血清BGP值见表2。

图1 病理切片（HE，×100）A.正常对照组；B.模型对照组；C.补骨防疏煎剂中剂量组；D.补骨防疏煎剂高剂量组Fig1 Pathological slice（HE，×100）A.normal control group；B.model control group；C.Bugu fangshu decoction medium-dose group；D.Bugu fangshu decoction high-dose group

表1 复制模型2周后的大鼠血清BGP值Tab1 BGPlevels in serum 2weeks after modeling

表2 药物干预后的血清BGP值Tab2 BGPlevels in serum after treatment

4 讨论

目前临床常用于治疗骨质疏松的药物虽有一定疗效，但存在副作用大、价格昂贵的弊端，而中医药则为临床治疗骨质疏松症提供了新的方法和思路。中医文献没有明确提出“骨质疏松症”这一病名，现代多数学者认为历代文献中的“骨痿”与现代医学的骨质疏松症极其相似[2]。

补骨防疏煎剂是临床经验方，临床观察提示该方在改善骨质疏松症状方面有较好疗效。其组方原则是补益肝肾、健脾益气补血，符合中医学对骨质疏松的病机认识，即肾虚、脾虚、气血亏虚。方中补骨脂既补肾填精又温补脾胃，与改善骨质疏松症肾虚脾虚的病理相一致；且现代药理研究证实，补骨脂具有较强的雌激素样作用，能促进骨的钙化[3]。淫羊藿温补肾阳，对骨骼系统有明显的调节作用[4]。刘海江等[5]研究发现，淫羊藿能促进犬骨的骨髓基质细胞增殖以及促进骨髓基质细胞合成碱性磷酸酶，从而促进成骨。于波等[6]也发现淫羊藿对成骨细胞的生长增殖具有促进作用。此外，研究还发现淫羊藿可减少破骨细胞的形成，抑制破骨细胞的骨吸收功能以及诱导破骨细胞凋亡，从而发挥抗骨质疏松的作用[7，8]。李东晓等[9]研究认为，淫羊藿本身或其代谢产物在一定剂量和条件下可诱导骨髓基质干细胞的成骨分化，其机制与提高相关成骨因子在体液中的浓度有关。气血亏虚在骨质疏松的发病中占有重要地位，本方的另一论治立法基础即是健脾益气补血，方中用熟地、黄芪、茯苓等药健脾益气补血。盛莉等[10]研究认为，熟地水煎剂可抑制骨吸收，延缓去卵巢大鼠骨量丢失，对骨质疏松症有一定的防治作用。现代药理研究认为，黄芪能促进和调节免疫功能，促进蛋白质合成，并具有防治骨质疏松的作用[11]。

BGP是由成熟的成骨细胞合成分泌的非胶原蛋白，其生理功能与骨转换有关。血中BGP浓度可特异性地反应成骨细胞的活性，用于判断成骨细胞活性受抑制的程度。研究表明[12]，血中BGP水平与骨中BGP水平呈正相关。测定血清BGP对于评价药物治疗骨质疏松症的疗效具有重要意义。本研究结果显示，经维甲酸诱导的大鼠骨质疏松模型血清BGP明显增高，表明维甲酸导致大鼠骨形成与骨吸收均增加，呈高转换型骨质疏松，但骨吸收大于骨形成。这一结果与研究中大鼠经维甲酸ig 2周后其骨组织形态学的改变一致。而经补骨防疏煎剂治疗后，大鼠血清BGP含量明显高于正常对照组和模型对照组，结合大鼠骨组织形态学的变化，提示该方能刺激成骨细胞活性，使骨形成活动增强。血清BGP含量的变化直接反应成骨细胞的活性，也直接反应骨形成率。补骨防疏煎剂对血清BGP的影响出现较早，且随时间延长其效果越明显。本研究还显示，补骨防疏煎剂能明显改善骨质疏松大鼠骨病理性损害。

综上所述，补骨防疏煎剂能提高血清BGP的含量，增加成骨细胞活性，促进骨的形成，有效改善骨质疏松大鼠的骨病理改变，从而对骨质疏松起到改善作用。

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Effect of Bugu Fangshu Decoction on BGP in Serum in Osteoporosis Rats

XIAN Hua，CAO Wen-fu
（College of Traditional Chinese Medicine，Chongqing Medical University，Chongqing 401331，China）

OBJECTIVE：To investigate the effect of Bugu fangshu decoction on bone gla protein（BGP）in serum in osteoporosis rats.METHODS：The osteoporosis model was induced by intragastric administration of retinoic acid.BGP in serum were measured by ELISA and morphological changes of bone tissues were observed.RESULTS：High，medium and low concentrations of Bugu fangshu decoction increased BGP levels in serum significantly（P＜0.01），and pathological morphology of bone tissues were improved obviously.CONCLUSION：Bugu fangshu decoction could effectively improve osteoporosis symptom in model rats，which mechanism maybe associated with improving BGP levels in serum and pathological changes of bone tissues.

Bugu fangshu decoction；Osteoporosis；Bone gla protein

R285；R97

A

1001-0408（2011）19-1751-03

＊讲师，硕士。研究方向：骨代谢性疾病。电话：023-65712062

#通讯作者：教授，硕士研究生导师。研究方向：中西医结合治疗内分泌代谢病。电话：023-65712060

2010-08-14

2010-12-16）