平肝颗粒的质量标准研究

陈青竹，蔡永青，张 成，戴 青，刘松青

（第三军医大学第一附属医院药剂科，重庆市 400038）

平肝颗粒的质量标准研究

陈青竹＊，蔡永青，张 成，戴 青，刘松青

（第三军医大学第一附属医院药剂科，重庆市 400038）

目的：建立平肝颗粒的质量标准。方法：采用薄层色谱（TLC）法对方中半枝莲进行定性鉴别；采用高效液相色谱法对制剂中野黄芩苷进行含量测定。结果：TLC斑点清晰、分离度好、专属性强，阴性对照无干扰；野黄芩苷的进样量在10～40μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系（r＝0.9999），平均回收率为98.16%，RSD＝2.88%（n＝6）。结论：所建标准能有效控制平肝颗粒的质量。

平肝颗粒；半枝莲；野黄芩苷；薄层色谱法；高效液相色谱法；质量标准

平肝颗粒是第三军医大学第一附属医院院内制剂，临床应用20余年，系由半枝莲等3味药材组成的复方固体制剂，具有清热解毒、除湿利胆、活血化瘀的功效，用于治疗急、慢性肝炎重症黄疸者与淤胆型平肝患者。野黄芩苷为半枝莲的有效成分，故选其作为薄层色谱（TLC）鉴别和含量测定的指标，以控制本制剂的质量。

1 仪器与试药

聚酰胺薄膜（薄层层析用，浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂）；Agilent Technologics 1200series高效液相色谱（HPLC）仪（美国Agilent公司）。

平 肝 颗 粒（ 批 号 ：20091223、20091228、20100105、20100108、20100113、20100119，规格：每袋9g）及缺半枝莲阴性样品（批号：20091229）均由第三军医大学第一附属医院制剂室自制；野黄芩苷对照品和半枝莲对照药材（中国药品生物制品检定所，批号分别为121293-200402、110842-200605）；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2 半枝莲的TLC鉴别

取3批（批号：20091223、20091228、20100105）平肝颗粒各9g，加甲醇50mL，超声（60kHz）40min，甲醇补足失重，滤过，滤液蒸干，残渣加水10mL使溶解，用稀盐酸调pH值至2～3，用乙酸乙酯萃取2次，每次10mL，合并乙酸乙酯溶液；用水萃取乙酸乙酯溶液2次，每次20mL，合并水溶液，用稀盐酸调pH值至2～3；再用乙酸乙酯萃取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯溶液，将乙酸乙酯溶液蒸干，加2mL甲醇溶解，即得供试品溶液。称取半枝莲对照药材0.3g，同法制得对照药材溶液。取缺半枝莲药材的阴性样品，同法制成阴性对照溶液。取野黄芩苷对照品，加甲醇制得每1mL含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。按TLC法[1]试验，吸取上述4种溶液各3μ L，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（4∶3∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液，日光下检视。结果，供试品色谱中，在与对照品、对照药材相应的位置上显相同颜色的斑点；阴性对照无干扰。半枝莲的TLC见图1。

3 野黄芩苷含量测定

3.1 色谱条件

图1 半枝莲的TLC1.阴性对照；2.半枝莲对照药材；3～5.供试品；6.野黄芩苷对照品Fig1 TLC of Lobelia chinensis1.negative control；2.Herba Lobeliae Chinensis reference substance；3-5.test samples；6.scutellarin control

色谱柱：DiamonsiL钻石C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-乙酸-水（15∶5∶80）；流速：1.2mL·min-1；检测波长：335nm；柱温：30℃；进样量：10μL。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2000。

3.2 对照品溶液的制备

精密称取野黄芩苷对照品，加甲醇制得每1mL含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。

3.3 供试品溶液的制备

称取平肝颗粒0.20g，加入70%甲醇50mL，超声（60kHz）40min，70%甲醇补足失重，过滤，取续滤液1.5mL离心（13000r·min-1）5min，即得。

3.4 阴性对照溶液的制备

取缺半枝莲药材的阴性样品，按“3.3”项下方法制成阴性对照溶液。

3.5 方法专属性试验

分别吸取“3.2”、“3.3”、“3.4”项下溶液各10μL，按上述色谱条件测定。结果，供试品色谱中，在与野黄芩苷对照品色谱相同的保留时间处有色谱峰出现，与其他组分能达到基线分离；阴性对照无干扰。色谱见图2。

图2 高效液相色谱图A.对照品；B.供试品；C.阴性对照；1.野黄芩苷Fig2 HPLC chromatogramsA.substance control；B.test sample；C.negative control；1.scutellarin

3.6 线性关系考察

精密称取野黄芩苷对照品10.00mg，置于100mL容量瓶中，加入70%甲醇溶液定容，得100μg·mL-1的溶液。精密量取上述溶液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、4.0mL，置于10mL容量瓶中，70%甲醇定容，摇匀，即得。分别进样10μL，以进样量（X）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标，制备标准曲线，得回归方程为Y＝29.816X－3.7763（r＝0.9999）。结果表明，野黄芩苷进样量在10～40μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

3.7 重复性试验

精密称取同一批样品适量，照“3.3”项下方法平行制备6份供试品溶液，按上述色谱条件测定。结果，RSD＝1.80%（n＝6），表明方法重复性良好。

3.8 精密度试验

精密称取野黄芩苷对照品，加甲醇制得每1mL含20μg的溶液，按上述色谱条件进样测定6次。结果，RSD＝0.83%（n＝6），表明仪器精密度良好。

3.9 加样回收率试验

取已知含量的平肝颗粒6份，精密称定，分别精密加入一定量的野黄芩苷对照品溶液，按“3.3”项下方法制备供试品溶液，计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝6）Tab1 Results of recovery tests（n＝6）

3.10 样品含量测定结果

取6批平肝颗粒（批号：20091223、20091228、20100105、20100108、20100113、20100119）适量，各3份，分别按“3.3”项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件测定含量。结果，6批样品含量分别为1.1728、1.1636、1.1787、1.1326、1.1452、1.1812mg·g-1，平均含量为1.16mg·g-1。按其80%计算，本品每袋含野黄芩苷不得少于8.37mg。

4 讨论

TLC鉴别项下供试品溶液的制备中，比较了液-液萃取[2]、索氏提取[1]、固相萃取等方法。结果表明，液-液萃取干扰较小、斑点清晰且简便、快捷，故采用液-液萃取方法制备供试品溶液。

由于野黄芩苷与黄芩苷结构相似，故在黄芩苷TLC鉴别用的展开剂[3]基础上进行调整，最终得到分离效果较好的展开剂乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（4∶3∶1∶17）。

含量测定项下供试品溶液的制备过程中，为了保证样品中野黄芩苷充分提取，分别对不同浓度的提取溶剂和不同超声处理时间进行试验。结果表明，本品用70%甲醇为溶剂，超声处理时间为40min，提取效果好。

流动相考察了乙腈-水-乙酸、甲醇-水-乙酸、乙腈-水-磷酸、乙腈-水-磷酸二氢钾等，发现乙腈-水-乙酸的保留时间短、分离度较高、峰形好，故最终选择流动相为乙腈-水-乙酸（15∶80∶5）。

[1] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].2005年版.北京：化学工业出版社，2005：附录31、77.

[2] 陈冬利，龙 洪.热炎宁颗粒质量标准研究[J].中医药导报，2009，15（2）：723.

[3] 苗明三，李振国.现代实用中药质量控制技术[M].北京：人民卫生出版社，2000：872.

Quality Standard of Pinggan Granules

CHEN Qing-zhu，CAI Yong-qing，ZHANG Cheng，DAI Qing，LIU Song-qing
（Dept.of Pharmacy，The First Affiliated Hospital of Third Military Medical University，Chongqing 400038，China）

OBJECTIVE：To establish the quality standard of Pinggan granules.METHODS：TLC was employed to identifyLobelia chinensis，and the content of scutellarin in Pinggan granules was determined by HPLC.RESULTS：TLC spots were clear，well-separated and specific without interference from negative control.The linear range of scutellarin was 10～40μg（r＝0.9999）with an average recovery of 98.16%（RSD＝2.88%，n＝6）.CONCLUSION：Established standard is suitable for the quality control of Pinggan granules.

Pinggan granules；Lobelia chinensis；Scutellarin；TLC；HPLC；Quality standard

R284.2；R283.627

A

1001-0408（2011）19-1802-02

＊药师。研究方向：新药研发。电话：023-68765991。E-mail：chenqingzhu1113@163.com

2010-05-12

2010-08-20）