香烟提取物对人支气管上皮细胞表达 β-防御素 2的作用研究

刘蔺 王开绿 黄玲 李文军 郑晓凤 刘艳群 蒙琴

香烟提取物对人支气管上皮细胞表达 β-防御素 2的作用研究

刘蔺 王开绿 黄玲 李文军 郑晓凤 刘艳群 蒙琴

目的 探讨香烟提取物(CSE)对人支气管上皮细胞表达人β防御素2(hBD2)的影响。方法 利用不同浓度(4%和8%)的CSE刺激人支气管上皮细胞(16HBE),分别于0、6、12、24、48 h收集细胞总蛋白,运用酶联免疫吸附法(ELISA)测定hBD2的蛋白表达水平。结果 4%和8%CSE均诱导16HBE于6、12、24、48 h进行性hBD2表达下降。8%CSE干预组变化幅度大于4%CSE干预组。结论CSE抑制人支气管上皮细胞表达hBD2,此机制可能参与香烟对气道防御的抑制作用。

β防御素2;香烟提取物;支气管上皮细胞

吸烟是慢性阻塞性肺疾病(COPD)最重要的环境致病因素。研究发现 β防御素 2(BD 2)作为一种抗微生物肽,在黏膜上皮(包括气道上皮)炎症-免疫防御中起重要作用[1]。本实验目的在于探讨香烟提取物(CSE)对人支气管上皮细胞表达人β防御素2(hBD2)的直接影响。

1 材料与方法

1.1 实验材料 人支气管上皮细胞株(16HBE)由四川大学华西医院呼吸病学研究室提供,DMEM细胞培养基(高糖)购自美国英杰(Invitrogen)生命技术有限公司;hBD 2酶联免疫吸附法(ELISA)测试盒购自美国ADL公司;细胞总蛋白提取试剂盒购自北京百泰克生物技术有限公司;二喹啉甲酸(BCA)蛋白定量试剂盒购自美国Pierce公司。

1.2 香烟提取物(CSE)制备 参照Taussat的方法[2]制备CSE,每只香烟(尼古丁:1mg;焦油:14mg)完全燃烧产生的烟雾溶于5ml无血清DMEM培养基中,用无菌滤过器进行无菌化处理(0.22 um孔径滤过膜除菌),其定为100%CSE母液,pH值调至7.4,超低温(-80°C)保存备用。

1.3 细胞培养与实验分组[3]16HBE细胞按1×106个细胞接种于 25 cm2培养瓶中,取指数生长期细胞用于实验。……