IDO基因转染小鼠树突状细胞体外诱导Treg细胞增殖的研究*

谢启超,朱 波,陈正堂

(第三军医大学新桥医院全军肿瘤研究所,重庆 400037）

调节性T细胞(regulatory T cell,T reg)是T细胞中的一个亚群,极少量的Treg细胞便可以通过与T细胞直接接触的方式或产生某些抑制性细胞因子来抑制T细胞增殖、T细胞功能、甚至诱导T细胞凋亡,进而产生强烈的免疫抑制。研究表明,这种抑制作用与恶性肿瘤的转移关系密切。淋巴结作为人体免疫器官,是多种恶性肿瘤转移的重要发生部位,是导致癌症患者预后差的重要因素。前期研究中发现吲哚胺-2,3-双加氧酶(indoleam ine-2,3-dioxygenase,IDO)(+)树突状细胞(dendritic cells,DC)在发生或未发生的肺癌引流淋巴结中出现,猜测可能与肺癌的淋巴结转移有密切关系。本研究应用阳离子脂质体将IDO基因转染到小鼠DC细胞,并与小鼠外周血T淋巴细胞混合培养,通过体外培养研究增强IDO在DC中的表达对Treg细胞的诱导增殖作用,阐明IDO在DC的增强表达与Treg细胞增殖的相互关系,为肺癌淋巴结转移机制研究提供新的实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料 小鼠DC细胞从C57小鼠骨髓中分离;真核表达重组质粒pEGFP-IDO由暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室何贤辉教授馈赠;大肠肝菌DH 5α由本研究所保存,高保真DNA Taq聚合酶为美国Promega公司产品,TRIzol试剂、RT-PCR系统购自晶美公司,质粒抽提试剂盒为晶美公司产品,淋巴细胞分离液为挪威NYCOMED产品,DMEM培养基及胎牛血清(FBS)为美国Gibco公司产品,IL-2、DNA Ladder、G418(p romega)、HRP化学发光检测试剂购于晶美生物公司;荧光标记的抗鼠单克隆抗体Foxp3-PE及CD4-PECY 5均购自晶美生物公司。

1.2 方法

1.2.1 小鼠DC细胞的分离和培……