酵母抽提物中海藻糖分析方法的探讨

窦 明，李 博

(鹤壁职业技术学院，河南鹤壁 458030)

酵母抽提物主要成分为蛋白质、海藻糖、多种氨基酸等。它的成分复杂，本实验仅对海藻糖的检测方法进行研究。测定酵母溶液中海藻糖的方法主要有蒽酮法和酶水解法［1］。蒽酮法基于糖和蒽酮的显色反应机理，但遇到能与蒽酮反应的其他物质时，会使测定值偏大;酶水解法受水解条件的限制。由于海藻糖旋光性(比旋光度+178.3°，20℃，7%于水中)远大于其他物质，可利用其旋光性测定其浓度［2］。

1 实验材料与方法

1.1 实验材料

海藻糖、谷氨酸、丙氨酸、亮氨酸、缬氨酸，生化试剂，中国医药上海化学试剂公司;针用活性炭，中国医药上海化学试剂公司;旋光仪，南京实验仪器厂。

1.2 实验方法

标准溶液配制:称量分析级海藻糖5 g，溶解定容至100mL，然后稀释成质量浓度分别为0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0 g/100 mL 的标准溶液。

酵母溶液旋光分析:取酵母抽提物2 g，定容至100 mL，1 000 r/min离心分离10 min，然后加一定量活性炭脱色［3］20 min，过滤取澄清透明溶液测定旋光度。

2 分析与讨论

2.1 浓度—旋光度标准曲线

取标准海藻糖溶液，测定旋光度3次，取其平均值，然后以海藻糖含量为横标，旋光度为纵标绘制标准曲线。

表1 旋光度测定结果

图1 海藻糖含量—旋光度曲线

由图1可知该曲线线性较好，相关系数为0.999 7，可作为海藻糖测定的标准曲线。

2.2 氨基酸对海藻糖旋光度的影响

酵母溶液中除蛋白质和海藻糖外，还含有氯化钠、氨基酸等其他糖类物质。氨基酸以谷氨酸、丙氨酸、亮氨酸、缬氨酸含量最多，四者之和约占总氨基酸的60%以上。故考察四种氨基酸对海藻糖测定的影响。配制浓度为5g/L的各氨基酸溶液，取1 mL分别加到25 mL浓度为5 g/L标准海藻糖溶液中，测定各氨基酸对海藻糖旋光度的影响测定结果影响如下页表2所示。

表2 氨基酸对海藻糖旋光度的影响

由表2可知，氨基酸加到海藻糖溶液中对测定结果影响很小，可近似看作不受干扰。

2.3 酵母浓度对测定结果的影响

配制浓度为10%的酵母溶液，加0.3%活性炭在30℃条件下脱色，分别稀释不同的倍数，测定稀释液旋光度，查得海藻糖含量如表3所示。

表3 酵母浓度对测定结果的影响

在整个测定范围内，对测得的海藻糖含量和酵母浓度进行线性拟合得直线如图2所示。

图2 海藻糖含量与酵母浓度关系

图2表明，酵母浓度和旋光度线性较好，表明旋光法能满足浓度在1%～10%之间的酵母溶液中海藻糖含量的测定。10%的酵母溶液经脱色后测得海藻糖平均含量为10.252 g/L，折合酵母中海藻糖含量10.25%。

3 结论

旋光法测定酵母溶液中海藻糖含量时，其他成分对测定的干扰性小，回收率高，方法的准确性和精密度均好。采用旋光法测得酵母抽提物海藻糖含量10.25%。

［1］袁勤生.海藻糖的定量分析方法比较［J］.药物生物技术，2001，(6):40-42.

［2］邓保炜.比旋光度测定方法的改进［J］.理化检验—化学分册，2003，(3):58-60.

［3］张亚丽.活性炭脱色对大豆低聚糖质量的影响［J］.化学与黏合，2001，(6):39-41.