凝胶层析分离提纯芦荟多糖的方法

云南万绿生物股份有限公司 罗秉俊 张苏云

目的：通过凝胶层析法提高芦荟多糖的含量

基本原理：凝胶是一种不带电荷的具有三维空间的多孔网状结构、呈珠状颗粒的物质，每个颗粒的细微结构及筛孔的直径均匀一致，像筛子，直径大于孔径的分子将不能进入凝胶内部，便直接沿凝胶颗粒的间隙流出，称为全排出。较小的分子在容纳它的空隙内，自由出入，造成在柱内保留时间长。由此过程，较大的芦荟多糖分子先被洗脱下来，而较小的分子后被洗脱下来，从而达到相互分离提纯。

器材及试剂

玻璃层析柱；葡聚糖凝胶；芦荟凝胶汁

实验内容

干胶用量的计算

干胶用量（g）=柱床体积（ml）/凝胶的床体积（ml/g）

由于凝胶处理过程以及实验过程可能有一定损失，所以一般凝胶用量在计算的基础上再增加10%～20%。

凝胶的处理：葡聚糖凝胶市售商品为干燥颗粒，使用前必须充分溶胀。方法是将欲使用的干凝胶缓慢地倾倒入5～10倍的去离子水中，进行充分浸泡，然后用倾倒法除去表面悬浮的小颗粒，并减压抽气排除凝胶悬液中的气泡，准备装柱。许多情况下，也可采用加热煮沸方法进行凝胶溶胀，此法不仅能加快溶胀速率，而且能除去凝胶中污染的细菌，同时排除气泡。

凝胶柱的装备：凝胶柱子装的质量好与差，是柱层析法能否成功分离纯化物质的关键步骤之一。一般要求柱子装的要均匀，不能分层，柱子中不能有气泡等。否则要重新装柱。

首先选好柱子，根据层析的基质和分离目的而定。……