浊度法测定氯霉素注射液的效价

陆 娟 钱 梅

（湖北省襄阳市食品药品检验所，湖北 襄阳 441021）

氯霉素是由委内瑞拉链丝菌产生的抗生素，属广谱抑菌剂。在执行标准[1]中，试验人员常采用管碟法测定其效价，管碟法的特点是结果比较稳定，适用于各种抗生素效价的测定，但操作繁琐、影响因素多、耗时长；采用浊度法可克服上述不足。笔者参考其它文献[2]，对浊度法测定氯霉素注射液效价的方法与管碟法进行了比较，结果基本一致，表明浊度法用于本品的效价测定快速准确，切实可行。

1 仪器与试药

WBS - 100微生物比浊法测定仪（北京先驱威锋技术开发公司） ;ZY - 300Ⅳ多功能微生物自动测量分析仪（北京先驱威锋技术开司）；MettlerAL-204电子天平；金黄色葡萄球菌 [CMCC（B） 26003]、大肠埃希菌[CMCC（B）44103]；藤黄微球菌[CMCC（B）28001]和氯霉素标准品（批号：0303-9613，每毫克相当于994单位）均由中国药品生物制品检定所提供。营养琼脂培养基（批号: 101105，北京三药）与抗生素检定培养基Ⅲ（批号: 1008232，北京三药）。0.9%灭菌氯化钠溶液和磷酸盐缓冲溶液（pH7.0）均按文献[3,4]的方法配制。氯霉素注射液（规格: 2mL：0.25g ；批号：101101，濮阳市汇元药业有限公司；批号：100911，安徽城市药业有限责任公司；批号：11042812，上海现代哈森（商丘）药业有限公司）。

2 方法与结果

2.1 标准品溶液的制备

精密称取氯霉素标准品适量，少量乙醇溶解后，用灭菌水制成1000U/mL的溶液，备用。

2.2 供试品溶液的制备

精密量取氯霉素注射液5mL，用灭菌水制成1000U/mL的溶液，备用。

2.3 培养基的制备

取金黄色葡萄球菌，接种于营养琼脂斜面上，置35℃培养约20h，用0.9%灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下并稀释，使其在580nm波长处的吸光度约为1.0。取菌液 0.6mL，加至100mL抗生素培养基中，摇匀，为含菌培养基。

2.4 方法学考察

2.4.1 线性试验

精密量取标准品溶液适量，用磷酸盐缓冲液（ pH7.0）按剂距比1∶1.25进一步稀释成5.0、6.2、7.8、9.8、12.2、15.3U/mL的溶液，分别量取1.0mL置石英杯中，再加入含菌培养基9.0mL，石英杯按拉丁方阵排列，置微生物比浊法测定仪内，于37℃培养4h。另取两支石英杯，一支加入1.0mL缓冲液和9.0mL含菌培养基，作为阳性对照；另一支加入1.0mL缓冲液和9.0mL空白培养基，作为空白对照。仪器在线于530nm处测定不同培养时间下的吸光度（A）。培养4h时，以A对浓度（C）的对数进行回归计算，线性方程：A= -0.1979lgC +0.4448，r=0.9980，表明浓度在5.0～15.3U/mL范围内，A与IgC呈良好的线性关系，故选定浓度8.0、12.0U/mL为试验浓度。

2.4.2 回收率试验

以等比例量取氯霉素标准品和氯霉素注射液适量，用灭菌水配置成80%、100%、120% 浓度的溶液，每个浓度各用3批样品平行制备3份溶液，测定效价平均加样回收率为99.2%，RSD=1.8%，表明该方法回收率良好。

2.4.3 精密度试验

取供试品（批号: 101101）6份，按样品效价测定项下的方法测定，可信限率为1.8%～2.2%，效价平均测定值为96.3%，RSD=1.5%，结果表明，该方法精密度良好。

2.4.4 稳定性试验

取已知含量（批号: 101101）（ 96.3% ）的供试品溶液，室温放置24h 后测定。结果：效价为95.6%，可信限率为2.1%，结果显示，供试品溶液在24h内稳定性良好。

2.5 样品效价测定

取氯霉素注射液3批，分别用浊度法和管碟法测定效价，比浊法测得结果分别为96.7%，95.5% ，96.4%；管碟法测得结果分别为96.3%，95.9%，96.0%。经显著性检验，3组数据无显著性差异（P＞0.05） 。

3 讨 论

3.1 金黄色葡萄球菌对不同浓度的氯霉素，培养后菌液吸光度值差值较合适，吸收度在0.3～0.7之间，符合浊度法测定要求，故选择金黄色葡萄球菌为试验菌。

3.2 往石英杯中加入溶液时，应在某一记号处沿管壁加入，分装培养基时，在该标记稍上方沿管壁流入，保证试验平行操作。

3.3 采用管碟法测定本品时，实验结果容易出现抑菌圈边缘模糊、双圈等现象，从而影响测定，使结果准确度下降；浊度法具有操作方便、快速，结果准确、精密度好等优点，值得推广应用。

[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准.抗生素药品(第一册)[S].1989:60.

[2] 张文婷,刘绪平,王庆全.浊度法测定硫酸小诺霉素片的效价[J].药物分析杂志,2010,30 (2): 346-348.

[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[S].北京:中国医药科技出版社,2010:附录Ⅺ A 93-98.

[4] 中国药品生物制品检定所,中国药品检验总所.中国药品检验标准操作规范[S].北京:中国医药科技出版社,2010:295-299.