吉非替尼对脐带来源间充质干细胞表达MCP-1的抑制作用

王 林 陈 红 王 原 杜改萍 陈银苹 俞亮科 孙晓东

(河北联合大学附属医院药剂科，河北 唐山 063000)

间充质干细胞(MSCs)广泛应用于组织工程和细胞治疗〔1〕。MSCs还具有免疫调节作用，抑制树突细胞呈递抗原，改变单核巨噬细胞的活化状态，促进调节性T细胞的转化〔2〕。有研究报道，来源于脐带组织的MSCs(UC-MSCs)有类似来源于骨髓基质干细胞(BMSCs)的特性〔3〕。而且，脐带MSCs取材方便，对供者无损伤。表皮生长因子(EGF)是促进MSCs增殖的重要生长因子。有报道发现EGF可促进MSCs向脂肪和骨组织分化，并且可以产生破骨细胞形成促进因子(RANKL)，单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)等单核巨噬细胞趋化因子，尤其是MCP-1对于单核巨噬细胞的生物学活性有重要的调节作用〔4〕。吉非替尼作为EGF受体的特异性抑制剂已经在临床中广为使用，多数癌症患者从中受益。然而，吉非替尼是否能够抑制EGF对MSCs的作用，尤其是调节MCP-1表达从而改变单核巨噬细胞的功能活性值得探讨。

1 材料与方法

1.1 细胞培养 UC-MSCs培养方法参照文献〔3〕。用磷酸盐缓冲液冲洗脐带组织样本，然后用0.075%Ⅰ型胶原酶37℃、30 min消化样本，然后用含10%胎牛血清的α-MEM培养基中和酶的活性，再将样本以1 200 r/min，10 min离心10 min，将沉淀物用含10%胎牛血清、100 U/ml青霉素及100 μg/ml链霉素的α-MEM培养基培养于37℃、5%CO2孵箱。EGF购自R＆D公司。吉非替尼为临床应用药物，购自AstraZeneca。

1.2 方法

1.2.1 分组 分为空白对照组、EGF处理组、吉非替尼处理组、EGF联合吉非替尼处理组。EGF、吉非替尼作用浓度分别为10 ng/ml、4 μmol/L。联合组为EGF先作用24 h后再加吉非替尼作用4 h。

1.2.2 Real-Time PCR分析 根据产品说明书，采用TRIzol○RReagent(购自invitrogen公司)提取细胞总RNA并进行逆转录。……