DNA分子标记在念珠菌遗传多样性中的应用

熊娟 阎澜 姜远英，

(1.福建中医药大学药学院，福州 350108;2.第二军医大学药学院新药研究中心，上海 200433)

DNA分子标记是继形态标记、细胞标记和生化标记之后发展起来的一种较为理想的遗传标记形式［1］。大致有基于 southern杂交技术、PCR反应、限制性酶切与PCR技术相结合和单核苷酸多态性等DNA分子标记［2］。目前，已经应用的有几十种DNA分子标记，最常见的如随机扩增多态性DNA (Random Amplified Polymorphic DNA，RAPD)、扩增片段长度多态性 (Amplified Fragment Length Polymorphism，AFLP)、简单序列重复标记(Simple Sequence Repeats，SSR)、单核苷酸多态性(Single-Nucleotide Polymorphisms，SNPs)等［3］，已被广泛地应用于真菌遗传图谱构建、基因定位及克隆、遗传多样性和分离菌株的DNA鉴定等方面的研究。

利用传统的真菌分类方法常引起分类系统的不稳定或分歧，核酸技术为真菌检测开辟了一条新的有效途径，它可用于真菌种的鉴定，更多的是用于亚种、变种水平上的鉴定。条件性致病念珠菌尤其是白念珠菌 (Candida albicans)是医院感染常见病原真菌，现已成为艾滋病、肿瘤、移植和吸毒等免疫缺陷患者的死亡原因之一。因此确定念珠菌的感染源和传播途径意义重大，这不仅需对念珠菌在种间水平分类，还需深入到种内甚至亚种水平。运用分子标记技术可以将不同菌株基因分型，快速、准确地鉴定出不同菌株，以深入对其流行病学和耐药机制的了解［4-5］，这对医院抗菌药物使用及寻找新的抗真菌药物具有重要指导作用。

1 RAPD标记技术

1.1 RAPD标记技术原理及其特点

RAPD 标记是 Williams等［4，6］于 1990 年建立的基于PCR基础之上的分子标记技术。它采用人工合成的较短的随机排列碱基顺序的核酸单链(通常为10个核苷酸左右)为引物，在一种热稳定DNA多聚酶的作用下，对所研究的未知序列的基因组DNA进行PCR扩增以检测其多态性。……