右归丸对自然衰老大鼠海马5-HT、NE含量与HPA轴活性作用的实验研究*

姚建平，金国琴，戴薇薇，姚龄爱，康湘萍

本研究通过观察自然衰老肾虚大鼠海马组织五羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)含量与HPA轴活性变化及右归丸对其的影响，探索衰老时海马组织5-HT、NE含量与HPA轴功能变化的关系。

1 材料

1.1 动物

雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，清洁级，上海中医药大学实验动物中心提供，动物许可证号2003-0002。

1.2 主要试剂与药品

乙腈(acetonitrile)，HPLC 级，批号 020210，上海吴泾化工总厂;氯乙酸(Chloroacetic acid)，分析纯，批 号 017013/1 23903419，Fluka公 司;甲 醇(Methanol)，HPLC 级，批号 3246A，Sigma-Aldrich Laborchemikallen GmbH;去甲肾上腺素(NE)，优级纯，批号023K0697，Sigma公司;樟脑磺酸(C210–7(1s)-(+)-10camphorsulfonic acid)，分析纯，批号S11/93-024，Fluka公司;乙二胺四乙酸，分析纯，批号 015783/120103039，Fluka 公 司;5-羟 色 胺 (5-HT)，优级纯，批号 112K7002，Sigma公司;大鼠皮质酮放免检测试剂盒(Diagnostic Systems Laboratories，Inc)和中药(饮片)。

1.3 主要仪器

BAS高效液相色谱仪(Bio Analytical Systems，Inc)，BAS LC-4C电化学探测器(Bio Analytical Systems，Inc)，VELOSEP RP-18 层析柱(填料直径为3μm，规格为3.2×100mm，Perkin Elmer Company)，γ-射线计数仪(Beckman Company)。

2 方法

2.1 分组、造模与给药

SD雄性大鼠随机分为老年对照组、右归丸组，另设青年对照组共3组，温度18℃ ～22℃，光暗周期 12h∶12h，群养，5只/笼，常规喂养饲料，自由饮水。以自然衰老SD雄性大鼠(24月龄)为模型，老年对照组大鼠常规喂养至24月龄。右归丸组大鼠从20月龄始，按生药7.5g·kg－1(相当成人临床用量的15倍)自由饮用稀释药液，每周停药2d，连续4个月。

2.2 药材及制剂

右归丸组方及用量均参照《方剂学》第1版教材。原方用量:熟地24g，山药12g，山茱萸9g，枸杞子 9g，菟丝子 12g，鹿角胶 12g，炒杜仲 12g，当归 9g，肉桂6g，炮附子6g。中药(饮片)一次性购于上海华宇药业有限公司，按原方用量比例水煎浓缩成膏，－30℃保存。

2.3 取材

大鼠腹腔麻醉(25%乌拉坦，0.75mg/kg)，腹主动脉取血 5ml，制备血清(静置 1h 后，3000r·min－1，离心15min);用消毒手术器械取大鼠海马，置于高压蒸气灭菌的Eppendorf管中，－70℃保存。……