骨髓间充质干细胞移植对脑缺血模型大鼠记忆功能的影响

刘丽萍 那汉荣(吉林大学药学院，吉林 长春 3002)

骨髓间充质干细胞(MSCs)能自我更新并具有多种分化潜能，近年来的研究发现间质干细胞可以横向分化为外胚层起源的神经细胞〔1〕，进一步研究发现，将MSCs移植到局灶性脑损伤大鼠的脑内能存活、迁移，部分细胞分化为神经元和神经胶质细胞，并能在一定程度上促进脑功能恢复〔2，3〕，使其在神经系统疾病的应用前景更加广泛。且其具有取材方便、体外培养易扩增、生物学特性稳定、免疫原性低及不受伦理道德的限制等优点，成为目前组织工程和再生医学研究的一个新热点。本研究拟通过体外培养扩增大鼠 MSCs，并将经DAPⅠ标记的MSCs注入缺血性脑损伤模型大鼠，观察MSCs移植后在脑损伤大鼠脑组织中的迁徙、定居及对模型鼠学习记忆功能的影响。

1 材料与方法

1.1 试剂和动物 DMEM培养基(Gibco公司)，胎牛血清(hyclone公司)，胰蛋白酶(Gibco公司)，DAPⅠ(Sigma公司)。5日龄健康Wistar乳鼠(8～10 g)及6周龄大鼠280～350 g由吉林大学实验动物中心提供。

1.2 BMSCs的分离、培养及鉴定 见参考文献〔4〕。

1.3 MSCs的标记 取生长状态良好的3代MSCs，注入前1 d进行标记。弃去MSCs培养瓶中的培养液，用PBS洗涤2次，加入DAPⅠ应用液，10 ml/瓶，置培养箱中1 h后弃去 DAPⅠ应用液，加入含胎牛血清的DMEM培养液，常规培养24 h后，倒置荧光显微镜下观察细胞标记情况。收集细胞备用。

1.4 动物模型制备 采用线栓法制备Wistar大鼠大脑中动脉缺血模型(MCAO)〔5〕。模型大鼠偏瘫清醒后，可见右侧肢体瘫痪，以前肢为重;表现为提尾时大鼠右前肢屈曲、内收，行走时向右侧转圈或倾倒、偏瘫、肢体强直等，提示模型已成功建立。……