多靶位FISH技术在膀胱癌诊治中的应用进展

余 义，黄红卫

(南昌大学第二附属医院，南昌330006)

膀胱癌是泌尿系最常见的恶性肿瘤，由于膀胱癌发病率高以及需要对肿瘤术后复发的监测，它已经成为治疗花费最高的肿瘤之一［1］。尿细胞学分析为诊断膀胱癌的主要实验室检查，其特异性强，但敏感性较低。最近研究表明尿细胞学检查实际上只发现了71%的G3级肿瘤，诊断低级别肿瘤的敏感性则很更低［2］。此外，膀胱肿瘤抗原、核基质蛋白-22等标记物检查也可用于膀胱癌的诊断，但其敏感性和特异性均不很理想。研究表明［3］多靶位荧光原位杂交(FISH)技术对于膀胱癌具有高度的敏感性和特异性，可以用于早期诊断膀胱肿瘤及其预后评估。现将多靶位FISH在膀胱癌诊治中的应用综述如下。

1 FISH技术的原理及特点

FISH是一种非放射性分子细胞遗传学技术，其基本原理是通过标记的DNA探针与细胞核内的DNA靶序列杂交，获得细胞内多条染色体(或染色体片段)或多种基因状态的信息，用已知的荧光素标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行特异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列，因此探针可以直接与染色体进行杂交，从而将特定的基因在染色体上定位。多靶位FISH即利用FISH技术，通过多种荧光标记的DNA探针，以及定位p16抑癌基因的9p21位点特异探针对膀胱癌相关遗传学改变进行检测。与传统的放射性标记原位杂交相比，多靶位FISH具有安全、快速、灵敏度高、检测信号强、杂交特异性高、能同时显示多种颜色等优点，不但能显示细胞中期分裂相，还能显示间期核［4］。

2 多靶位FISH的应用

随着人们对疾病与染色体基因改变之间的研究不断深入，检测与疾病发生和进展相关的染色体及基因改变成为某些疾病早期诊断、风险评估、疗效监测过程中重要的分子水平检测方法。多靶位FISH技术是基因检测，与形态学检测相比，可以更早的发现细胞异常，降低漏诊率，且该技术为快速无创的检测技术，仅用患者的尿液或膀胱冲洗液检测肿瘤脱落细胞，24 h内即可获得检测结果。

2．1 多靶位FISH在血尿检查中的应用 血尿是大部分膀胱癌患者的最初临床表现 ，但却不是膀胱癌的特异性表现［5，6］。Sarosdy 等［3］发现，对血尿患者行 FISH 和尿细胞学检查，其膀胱癌的诊断率分别为69%和38%，除外TaG1膀胱癌，其诊断率分别升高至83%和50%，前者对膀胱癌检出率明显高于后者。如果对血尿患者直接进行膀胱镜检查，则会给患者带来一些不必要的痛苦，并可能漏诊一些微小或不典型病灶，导致早期诊断的延误和最佳治疗时机的错失，这就极大地影响了患者的存活率［7］。因此，对血尿患者行膀胱镜检查前应用多靶位FISH进行筛查。

2．2 多靶位FISH在尿细胞学检查中的应用 对于血尿患者尿细胞学检查结果不明确在临床很常见。有数据表明有＜50%尿细胞学检查不明确者在随访过程中发现了肿瘤［8］。而有研究结果［9］表明，对尿细胞学检查结果不明确者行多靶位FISH检查，其阳性率为91%，这些患者在随后的首次活检中发现了肿瘤，FISH检查阴性的患者中未发现肿瘤，这说明FISH是一种可以检测细胞学不明确患者是否患有肿瘤的方法。尿细胞学检查结果不明确，而FISH检查漏诊的肿瘤多为膀胱乳头状瘤，后者行膀胱镜容易发现［9］，因此对尿细胞学检查结果不明患者宜采用多靶位FISH技术与膀胱镜联合检查，以提高其诊断率。最近，有学者研究发现FISH有助于判断尿细胞学检查及膀胱镜检查不明确或阴性的患者的情况［10］。

2．3 多靶位FISH在膀胱癌复发预测中的应用 多靶位FISH检查阳性但膀胱镜或尿细胞学检查阴性的膀胱癌(治疗后)患者被称作预测阳性患者［11］。临床中常见如下情况:膀胱镜诊断膀胱癌复发前，FISH检查即为阳性;约有27%尿细胞学检查阴性或不典型，且膀胱镜检查阴性的治疗后的膀胱癌患者FISH呈阳性，而这些患者在随访的29个月中有近65%的患者膀胱癌复发［12］。这进一步提示FISH检查可以预测膀胱癌复发。

2．4 FISH在膀胱灌注治疗中的应用 早期、中分化的膀胱癌患者多采用卡介苗(BCG)膀胱灌注治疗，而后者导致的膀胱黏膜严重炎性反应红斑，在膀胱镜和尿细胞学检查时，其与原位癌均不易鉴别。有学者研究发现［13］膀胱灌注BCG治疗不会影响FISH检查结果，且发现FISH检查阳性患者，其膀胱癌复发及进展为肌层浸润的可能性分别是FISH检查阴性患者的4．6倍和9．4倍。因此，对膀胱灌注BCG治疗结束后的膀胱癌患者，进行FISH检查可评估其治疗效果，预测其复发性。

综上所述，多靶位FISH在膀胱癌的诊断和治疗中具有极其广阔的应用前景，但目前膀胱癌的FISH结果只停留在阳性与阴性的判断上，对于FISH阳性细胞比率(定量)与膀胱癌诊断、治疗及预后的关系有待于进一步研究。

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