海人酸致痫大鼠中多药耐药相关蛋白1和主穹窿蛋白的表达及作用

王海燕,任艳霞,杜 宁

(1.佳木斯大学第一附属医院儿科,黑龙江 佳木斯 154003;2.佳木斯大学在读研究生,黑龙江佳木斯 154007)

癫痫是一种神经系统的常见病,但仍有1/3的患者对药物治疗无效而成为难治性癫痫(intractable epilepsy,IE,RE)。然而人们对IE的形成机制尚不清楚,耐药蛋白可能在其中发挥着重要的作用。多药耐药相关蛋白1(M RP1)和主穹窿蛋白(M VP)均是目前研究的热点,分别由MRP和LRP基因编码,两者均位于16号染色体上,MRP定位于16p13.1,LRP定位于16p11.2,相距大约27cM.本课题利用海人酸致痫大鼠模型,观察海马中M RP1和MVP的表达,以及两者之间是否有相关性,以探讨其与癫痫耐药性的关系及机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物及分组

健康80只 Wistar大鼠,体重 250～300g,雌雄不限,由佳木斯大学动物实验中心提供,随机分为对照组24只、KA组28只、TMP治疗组28只,每个小组再分1d、3d、7d 3个时间点。

1.2 主要试剂

海人酸(美国Sigma公司),MRP1抗体、MVP抗体(北京博奥森生物工程有限公司),二抗试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)。

1.3 海人酸癫痫模型建立及大鼠惊厥分级

将大鼠麻醉后固定于立体定位仪上,头颅正中切开皮肤,暴露前囟。在头架上,将进样器针尖抵住前囟位置读出X、Y、Z的原始值视为原点,参照大鼠脑立体定位图谱[1]所确定的目标即右侧海马CA3区:X-4.5mm,Y+4.5mm,Z硬膜下4mm,将微量进样器抽取KA1μ L(将KA用注射用水配制 10mg/5mL,即 2μ g/μ L),调整 XY 坐标 ,显露硬膜,再调整Z轴使进样器针头平稳深入至硬膜下4mm,半分钟内缓慢注入KA,留针3～5min,再缓慢提起进样器针尖。对照组以NS代替KA,余同模型组。癫痫发作按Racine[2]分级:Ⅰ级,面部肌肉痉挛表现为咀嚼运动;Ⅱ级,颈部肌肉痉挛表现为点头运动;Ⅲ级,一侧前肢阵挛;Ⅳ级,站立性伴双前肢阵挛;Ⅴ级,在Ⅳ级基础上身体向后倒下。……