‘国庆1号'温州蜜柑未发育胚珠再生完整植株的研究

蔡小东,骆 浩 (长江大学园艺园林学院,湖北荆州434025)

柑橘是我国南方重要的主栽果树之一,通过生物技术进行柑橘的遗传改良是一个切实可行的方法[1]。体细胞胚状体 (体胚)发生是植物体细胞离体培养的重要途径之一。许多植物器官、愈伤组织及原生质体等培养过程中,体胚能否再生关系到完整植株再生的成败[2-3]。现代生物技术育种已被广泛应用于作物遗传及品质改良,如转基因技术、体细胞融合技术等一般都需要通过体胚再生途径获得完整植株[4-5]。本研究以 ‘国庆1号'温州蜜柑 (Citrus unshiu Marc.cv.Guoqing No.1)成熟果实中未发育胚珠为外植体,研究不同种类的植物生长调节剂对 ‘国庆1号'植株再生的影响,以期为直接以未发育胚珠为起始材料进行柑橘生物技术育种奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

供试材料为 ‘国庆1号'温州蜜柑 (Citrus unshiu Marc.cv.Guoqing No.1)成熟果实。在超净工作台上将果实浸泡在75%酒精中约10min后,用镊子取出并用酒精灯外焰灼烧30～60s。接着将果实放入已灭菌的培养皿 (内放有多张滤纸)中剥开果皮,去掉果肉后可发现囊衣内紧靠中柱处有许多长约1～2mm未发育胚珠,用尖嘴镊子将这些未发育胚珠轻轻挑下备用。

1.2 胚状体诱导

将上述未发育胚珠分别接种于下述培养基A(MT+500mg·L-1麦芽浸出物 (ME))、B(MT+1.0mg·L-1GA3+500mg·L-1ME)、C(MT+2.0mg·L-1BA+0.5mg·L-1IAA)和D(MT+1.0mg·L-1KT+500mg·L-1ME)上。

所有培养基均添加30g·L-1蔗糖及7.5g·L-1琼脂,pH5.8,暗培养。每种处理接种5瓶,每瓶放置3～5个胚状体。

1.3 胚状体诱导生芽

将获得的胚状体接种到培养基E(M T+2.0mg·L-1BA+0.5mg·L-1IAA)上。接种5瓶,每瓶接种5个胚状体,培养后统计出芽的时间、快慢、质量及数量等。……