久泻宁颗粒对大鼠溃疡性结肠炎细胞凋亡及其调控蛋白影响的研究

马少丹，阮时宝，苑述刚

(福建中医药大学药学院 方剂教研室，福建 福州 350108)

溃疡性结肠炎(UC)是一种以慢性非特异性肠道炎症为主要病变的疾病，临床主要表现为腹泻、腹痛、黏液血便等，多呈慢性反复发作过程[1]。现在UC的特异性致病因素及发病机制均不明确，大多数专家认为是多种因素相互作用的结果，如感染、遗传、免疫异常等。近年越来越多的研究[2-3]表明，细胞凋亡参与了溃疡性结肠炎的发病，且淋巴细胞的凋亡减慢和溃疡性结肠炎的发生关系密切。本实验观察了久泻宁颗粒对大鼠溃疡性结肠炎肠组织中淋巴细胞凋亡及其调控蛋白的影响，探讨久泻宁颗粒对溃疡性结肠炎肠黏膜的保护作用及其可能的作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物 清洁级SD大鼠40只，雌雄各半，体质量为(200±20)g，上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供；大耳白家兔4只，体质量2.0～2.5 kg，福建中医学院实验动物中心提供。

1.2 实验试剂 久泻宁颗粒(自备)，补脾益肠丸，批号:Z44023376，广州陈李济药厂生产。弗氏完全佐剂和2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)，(美国Sigma)。细胞凋亡检测试剂盒，兔IgG、Fas、Fas-L多克隆抗体及免疫组化染色试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)。仪器：OLYMPUSCX-40显微镜(日本奥林巴斯公司),LEICA Qwin图像软件分析系统(德国徕卡公司)。

1.3 实验方法

1.3.1 实验动物分组 清洁级SD大鼠40只，随机分为4组，每组10只。各组分别为：正常组，UC模型对照组，补脾益肠丸治疗阳性对照组，久泻宁颗粒治疗组。

1.3.2 模型所需药物制备 异种异体抗原：参照许叔云[4]方法稍作改进，取家兔新鲜结肠黏膜组织，匀浆充分后，-20 ℃下冷冻24 h，溶冻后以4 000 r/min离心30 min,取上清液提纯，用总蛋白试剂盒双缩脲法测定蛋白质含量。……