白毛藤多糖抑制人卵巢癌细胞增殖作用及其机制研究

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(牡丹江医学院，黑龙江 牡丹江 157011)

白毛藤(Solanum lyratum Thunb),又名白英，是茄科植物，具有清热、解毒、利湿、消肿等作用[1]。临床上用于多种肿瘤的治疗,是传统抗癌中药之一，已有实验[2-3]证实，其水提物有体外抑制细胞增殖的作用，但具体的抗癌成分并不明确，限制了其进一步的开发利用。本研究观察白毛藤中多糖成分对人卵巢癌细胞体外抑制作用，并初步从分子生物学角度探讨其作用机制，为筛选白毛藤中有效抗癌成分提供一定的实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞株 人卵巢癌SKOV3细胞株购自武汉中美科技有限公司。

1.1.2 药物、试剂与仪器 白毛藤多糖溶液由牡丹江医学院中心实验室提供。MTT试剂购自泰伦生物科技有限公司(批号041025)；Trizol购自Sigma公司(批号15596-018);荧光显微镜(CKX41-F32FL，奥林巴斯)，550型酶标仪(美国BIO-BAD公司产品)。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养与分组 1%青霉素、链霉素，10%胎牛血清的RPMI-1640培养液,37 ℃、5%CO2孵箱中培养。实验组：0.4、0.8、1.6 mg/mL的白毛藤多糖溶液。对照组：含SKOV3细胞的培养液。

1.2.2 MTT实验 收集对数生长期细胞调整浓度为1×105个/mL，接种100 μL/每孔,每个剂量设12个平行孔，分别培养12、24、48 h，加入5 g/L四甲基唑氮蓝(MTT)20 μL继续孵育；4 h后，弃上清,加入DMSO 150 μL，完全显色后，采用酶标仪测定各孔490 nm处吸光度(OD)值。按下列公式计算细胞生长抑制率(inhibition rate,IR)。IR=(对照组OD-实验组OD)/(对照组OD-空白组OD)×100%。

1.2.3 细胞凋亡检测 胰蛋白酶消化指数生长期的癌细胞。调整细胞密度为3×105/mL，接种于6孔板中1 mL/每孔。加入不同浓度白毛藤多糖，48 h后用胰酶消化细胞，冷PBS(pH 7.2)洗3遍，固定液4 ℃固定，10 min后弃固定液，蒸馏水洗3遍，室温干燥，用5 mg/L Hoechst33258染色15 min，置于荧光显微镜上观察细胞形态并计算细胞凋亡率。……