柱花草总RNA提取方法比较

张倩茜，张伟丽，刘凤民，许修宏，庞丹丹

(1.东北农业大学资源与环境学院,黑龙江 哈尔滨 150030; 2.仲恺农业工程学院生命科学学院,广东 广州 510225; 3.仲恺农业工程学院教学科研基地,广东 广州 510225)

柱花草属(Stylosanthes)植物是热带亚热带地区的优质豆科牧草[1-2]，具有茎叶产量高、草品质好、耐旱、耐酸性贫瘠土壤的特点。自20世纪60年代从东南亚国家引入我国后，柱花草被广泛用于青饲料、草粉生产、放牧、水土保持、果园覆盖和绿肥作物等[3]。近年来，随着牧草分子技术的广泛应用，从基因水平研究柱花草(S.guianensis)遗传特性的研究受到了重视。提取完整性好、纯度高的柱花草总RNA，是开展柱花草基因表达调控及抗性分子机制研究的前提。目前植物RNA提取方法有很多种[4-7]，常用的提取方法有SDS-酚抽提法、CTAB法和异硫氰酸胍法等，常用的试剂盒主要有Trizol试剂盒等商品化的产品。但没有一种方法是适应所有植物RNA提取的，要根据具体的植物种类和试验条件选择适宜的试验提取方法[8-12]。成熟的柱花草组织富含多糖、酚类化合物及一些尚未确定的次生代谢产物使得RNA提取的产率和纯度受到影响[13]。热研2号柱花草(S.guianensisReyan No.2)是我国亚热带地区的重要柱花草栽培品种，本研究采用改良SDS-酚抽提法、改良CTAB法、Trizol法和柱式植物RNAout试剂盒法等提取热研二号柱花草总RNA，并对总RNA反转录cDNA的看家基因β-actin进行扩增，进而检测提取柱花草总RNA的纯度和质量，旨为后续的柱花草基因表达调控研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1材料和试剂

1.1.1材料 试验材料选用热研2号柱花草(S. guianensis cv. Reyan No.2)，材料种植在仲恺农业工程学院试验地盆钵中，待植株生长2个月后采集幼嫩叶片提取RNA。……