短期应用利尿剂对正常大鼠尿液水通道蛋白 2排泄浓度的影响研究

林 晟,许顶立,赖文岩

水通道蛋白 2(aquaporin-2)是迄今为止发现的最具病理生理意义的水通道蛋白之一,对维持机体水平衡和调节体液容量至为重要,主要分布在肾脏集合管主细胞胞浆内和小管侧细胞膜上,在体内主要受血管加压素 (AVP)调节[1-2];其中部分肾脏 AQP2蛋白可脱落于小管腔经尿液排出[3]。尿液AQP2浓度的检测可能是一些临床重要疾病,如心力衰竭水潴留等的重要检测指标[4]。利尿剂是临床常用药物,主要用于调节机体水钠代谢,利尿剂和 AQP2两者之间的相互联系一直是临床较为关注的问题。本实验就生理状况下,短期运用呋塞米、双氢克尿噻和安体舒通对大鼠尿液中 AQP2的改变进行了研究。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 成年雄性 SD(Sprague dawley)大鼠 30只,体质量 180～250g(购自南方医科大学南方医院实验动物中心)。

1.1.2 试剂 呋塞米片,双氢克尿噻片,安体舒通片。

1.2 实验方法

1.2.1 动物分组 将 18只 SD大鼠随机分为呋塞米组、安体舒通组、双氢克尿噻组,每组 6只。放置代谢笼中,自由进食水 (饲料由南方医院动物所提供)。环境温度控制在 25～28℃左右。动物适应 3d后开始灌药,灌药 1次/d。将药物溶于2ml去离子水中,注入胃内。呋塞米组:20mg/kg,双氢克尿噻组:25mg/kg,安体舒通组:20mg/kg。

1.2.2 尿液的收集 每天收集大鼠尿液记尿量,在 4℃以3000r/min离心 10min,去除细胞残骸和食物残渣,加入蛋白酶抑制剂 PMSF,放入-70℃低温冰箱,尿渗量由南方医院肾内科实验室采用冰点抑制法检测。

1.2.3 ELISA 测定尿液 AQP2浓度[5]尿液用 0.05%SDSPBS等倍稀释后,取 50m l加入 96孔酶标板,37℃预包被30min,然后 4℃过夜。每 1个孔用洗涤缓冲液 (PBS含0.05%Tween)清洗 1次,然后加入封闭液 (PBS含 3%牛血清白蛋白)100μl 37℃,45min。……